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食管鳞癌的蛋白质组学: 2012年; 大部分食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)确诊时已发展至中晚期,临床治疗效果差,是导致我国华北地区ESCC死亡率居高不下的主要原因之一.因此,亟需筛查ESCC特异性、敏感性的生物标志物,以期用于ESCC早期诊断、个体化分子靶向治疗和预后评价.与相对稳定、携带遗传信息的基因组不同,蛋白质组具有时空变化特性,由此构成生命活动复杂性的物质基础.在病理情况下,蛋白质组能够精确反映患病组织器官的功能状态,因此为疾病的监测提供了窗口.本文总结了ESCC蛋白质组研究现状及差异表达的蛋白质谱,并探讨了ESCC候选分子标志物的潜在临床应用价值.; 张娟卜旺雨齐义军; 关键词：食管鳞癌蛋白质组质谱生物标志物

14-3-3σ蛋白与宫颈癌的关系被引量：1: 2011年; 目的：探讨14-3-3σ蛋白与宫颈癌临床病理特征之间的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测14-3-3σ蛋白在正常宫颈粘膜组织、宫颈黏膜上皮内瘤变及宫颈癌中的表达。结果：14-3-3σ蛋白在正常宫颈黏膜组织、宫颈黏膜上皮内瘤变与宫颈癌中的阳性表达率分别为100%（10/10）, 70%（42/60）和43.10%（25/58），在宫颈癌变过程中，14-3-3σ蛋白的表达率逐渐下降。14-3-3σ在高分化癌中的表达高于在中、低分化癌中的表达；14-3-3σ蛋白的表达与肿瘤的病理类型、患者的年龄因素无相关性。结论：14-3-3σ蛋白表达可能与宫颈癌发生、发展及组织分化程度相关，可能成为宫颈癌早期诊断的分子指标，同时也可能成为宫颈癌生物预防和疗效评价的新靶点。; 侯艳芳晁玮霞齐义军王攀卜旺雨牛保华; 关键词：上皮内瘤变宫颈癌免疫组织化学

二维电泳和质谱技术鉴定肝细胞癌相关N-连接糖蛋白被引量：2: 2015年; 目的鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达N-连接糖蛋白。方法采用刀豆凝集素A(Con A)、晶状体凝集素(LCH)、雪花凝集素(GNA)等3种植物凝集素组成的亲和层析柱,分别从肝永生化细胞系L02和HCC细胞系Huh7、PLC5、SNU449中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱、生物信息学等技术鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证了转录调控肿瘤蛋白(TCTP)、上皮细胞黏附分子(Ep CAM)和膜联蛋白A2(annexin A2)在肝永生化及HCC细胞和HCC及癌旁组织中的表达规律,体外侵袭实验检测TCTP沉默后对SNU449的侵袭力影响。结果质谱、生物信息学等技术共鉴定出42个差异表达的蛋白质分子/异质体(HCC细胞中高、低表达的蛋白/异质体分别为14个、28个),代表32个蛋白质分子,其中的22个蛋白含有至少1个N糖基化位点(Net NGlyc 1.0预测)。这些差异表达的蛋白主要参与氧化还原内稳态维系、碳水化合物/能量代谢、糖酵解、抗凋亡等生物学过程。Western blotting检测表明,TCTP、Ep CAM和annexin A2在6个肝癌细胞系PLC5、Hep G2、SNU449、Huh7、HCC7721和SNU473及肝癌组织中表达显著升高,siRNA介导的TCTP沉默明显抑制了HCC细胞系SNU449的体外侵袭能力。结论 TCTP、Ep CAM和annexin可能参与了HCC发生发展过程,TCTP可能成为HCC靶向治疗的分子靶点之一。; 王明丽韩大正晁玮霞刘瑞敏赵云岗张天齐义军; 关键词：肝细胞癌植物凝集素质谱二维电泳

凝胶电泳蛋白质组学蛋白样品纯化方法比较被引量：3: 2013年; 目的探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响。方法应用超滤法和7种沉淀方法[包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点。结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定。超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40%和4%,其他方法的蛋白回收率约为22%。丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失最多。结论丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法。; 卜旺雨齐义军魏华张娟马瑾王明马远方; 关键词：食管蛋白质组蛋白沉淀二维电泳

TGF-β通过TAGLN2诱导食管鳞癌EC9706细胞迁移和浸润被引量：1: 2016年; 上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）使上皮细胞极性和细胞间紧密连接消失,并赋予肿瘤细胞侵袭和转移的能力。本研究应用携带TAGLN2特异性沉默序列或无关序列的慢病毒载体感染食管鳞癌细胞系EC9706,建立EC9706 sh TAGLN2及阴性对照EC9706 sh Control亚细胞系。以5~80 ng/m L不同浓度或40 ng/m L TGF-β刺激EC9706 sh TAGLN2和EC9706sh Control细胞,发现与EC9706 sh Control细胞比较,EC9706 sh TAGLN2细胞中TAGLN2的表达无明显增加,同时TGF-β诱导的间质标志物如N-cadherin、Vimentin等蛋白质表达无明显升高;上皮标志物如E-cadherin表达无明显降低;TAGLN2的沉默不仅阻断了TGF-β诱导EC9706 sh TAGLN2细胞体外迁移和侵袭能力的增加,并抑制TGF-β信号通路下游分子p-Smad2/3的激活。本研究结果提示,TGF-β可能通过TAGLN2促进食管鳞癌的恶性演进,TAGLN2是潜在的食管鳞癌治疗的分子靶点之一。; 谷娟赵云岗晁玮霞韩大正杨文义刘瑞敏贾彩云郭二涛崔纪丽马远方齐义军; 关键词：食管鳞状细胞癌 TGF-Β 上皮间质转化

SELDI-TOF/MS分析原发性肝癌TACE治疗前后血清蛋白质差异表达谱被引量：3: 2014年; 目的分析原发性肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞（TACE）治疗后血清蛋白质4a．es~图谱的变化。方法应用SELDI—TOF／MS技术和IMAC30蛋白质芯片采集50例肝癌患者TACE治疗前后肝癌患者的血清蛋白质质谱，Biomarkerwizard软件分析差异表达蛋白质峰，应用支持向量机（supportvectormachine，SVM）建立TACE治疗前后分类模型，KOC评价各差异蛋白质峰和SVM分类模型的分类效率。结果在0～20000m／z质荷比范围内，共采集到199个蛋白质峰，BiomarkerWizard软件鉴定出13个差异表达蛋白质峰（P〈0．05），包括TACE治疗24h后7个高表达蛋白质峰和6个低表达蛋白质峰。2883、11535和11687等3个蛋白质峰区分TACE治疗前后HCC的敏感性和特异性分别为80％、76％、62％和80％、60％、62％，AUC为0．8；SVM分类模型区分TACE治疗前后HCC的敏感性和特异性均为100％。结论应用SELDI—TOF／MS技术可分析TACE治疗后血清差异表达蛋白质谱，SVM分类模型能有效区分TACE治疗前后HCC。; 齐义军马瑾张天王明晁玮霞朱晗刘瑞敏马远方Philip Johnson; 关键词：原发性肝癌 SELDI-TOF 蛋白质芯片经导管肝动脉化疗栓塞

肝细胞癌中差异表达N-连接糖蛋白的分析鉴定被引量：3: 2014年; 目的分析鉴定与肝细胞癌(HCC)发生发展相关的差异表达的N-连接糖蛋白。方法应用刀豆蛋白凝集素(ConA)、晶状体凝集素(LCH)和雪花凝集素(GNA)组成的亲合层析柱富集10对HCC和癌旁非癌组织中N-连接糖蛋白、二维电泳(2DE)比较分析差异表达的蛋白质点、串联质谱鉴定差异表达蛋白,Western blotting验证人羧酸酯酶1(hCE1)、触珠蛋白(HP)及组织蛋白酶D(CD)的差异表达;体外侵袭实验检测CD表达沉默后对HCC的侵袭力影响。结果质谱、生物信息学等技术鉴定了28个与HCC相关的差异表达蛋白(HCC中高表达和低表达的蛋白均为14个),Western blotting验证hCE1、HP在HCC中明显低表达,组织蛋白酶D前体(pCD)在HCC中高表达;而ConA亲和层析柱富集的ConA-CD在HCC中显著高表达。CD-siRNA介导的CD表达沉默能够显著降低肝癌细胞系SNU449、SNU473的体外侵袭能力。结论 HP、hCE1蛋白表达变化和CD N-糖链变异可能参与了HCC发生发展过程。; 马瑾齐义军刘瑞敏王明张天朱晗马远方; 关键词：糖蛋白组织蛋白酶D 触珠蛋白二维电泳质谱

应用蛋白质组技术筛选人食管癌细胞系9706顺铂耐药相关蛋白: 2012年; 目的应用蛋白质组技术筛选人食管癌(esophageal cancer,EC)顺铂耐药相关蛋白。方法采用顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)浓度递增法、间歇作用方式建立EC9706顺铂耐药细胞系(EC9706/CDDP),应用细胞培养稳定同位素标记(cell culture and stable isotope labeling,SILAC)、质谱(mass spectrometry,MS)筛选和鉴定食管癌耐药相关的蛋白。结果共鉴定出耐药相关的74种差异表达蛋白,其中53种在EC9706/CDDP中表达显著升高和21种表达明显降低。结论筛选的EC9706/CDDP耐药相关蛋白对进一步阐明肿瘤多药耐药分子机制具有重要理论意义和应用价值,并为逆转多药耐药表型的药物设计提供了新的分子靶点。; 晁玮霞刘琳卜旺雨张娟侯艳芳高小飞牛保华马远方齐义军; 关键词：食管癌顺铂多药耐药串联质谱

二维电泳和质谱技术鉴定肝癌血清差异表达的N-连接糖蛋白被引量：5: 2013年; 缺乏有效的早期诊断方法是导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后极差的主要原因之一.蛋白质异常糖基化与恶性肿瘤细胞侵袭、转移等生物学过程关系密切,人体内至少有50%的蛋白质发生了糖基化修饰.本实验采用IgY12去除血清高丰度蛋白、多植物凝集素亲和层析技术分别从20例肝癌和年龄、性别匹配的20例非癌慢性肝病患者血清中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱检测、生物信息学等技术鉴定了18个差异表达的糖蛋白和/或其异质体(12种高表达和6种低表达).ExPASy数据库比对结果表明,本实验鉴定的糖蛋白质分子含有至少1个已报道的N-糖基化位点.这些差异表达的糖蛋白属于急性期反应蛋白,分别具有蛋白酶抑制、生物转运、凝血和纤溶等功能,表明肝癌的发生发展过程中机体产生的急性期反应物可能是潜在的肝癌血清标志物.; 王明黄志红雷鹏王明丽晁玮霞马瑾卜旺雨张娟牛保华马远方齐义军; 关键词：二维电泳质谱血清生物标志物

热休克蛋白-肽复合物与肿瘤免疫被引量：1: 2012年; 热休克蛋白（heat shock protein,HSP）是一类在生物进化过程中高度保守,广泛表达于所有生命机体组织细胞并具有管家功能的蛋白质。根据分子量的差异,HSP可分为10个家族,包括HSP110/grp170、gp96/grp94、HSP90、HSP70/grp78、HSP65、HSP25/27等,每个家族有1~5个成员[1]。在正常生理状态下,; 牛保华齐义军晁玮霞马远方; 关键词：肿瘤免疫 PROTEIN HSP90 HSP65 生物进化组织细胞

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