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同胞相合异基因造血干细胞移植受者移植前胸腺近输出功能与预后相关性研究: 2007年; 目的通过同胞相合异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）受者移植前胸腺近输出功能与预后相关性研究，判断能否将受者移植前的胸腺近输出功能作为预后的指标。方法应用Real—time PCR的方法定量检测64例同胞全相合骨髓移植（MSD—BMT）患者移植前T细胞受体重排删除环（TREC）水平（作为胸腺近输出功能），并对所有移植后病例临床资料进行收集整理。通过统计学分析进行回顾性研究，用Log-rank检验比较生存率，运用COX比例风险回归模型进行单因素和多因素统计分析。同时检测70名正常供者的TREC水平作为正常对照。结果70名正常人外周血单个核细胞中TREC拷贝数为（3351±3711）拷贝／10^5细胞，年龄与TREC含量呈负相关。移植前患者TREC定量检测结果为（180±332）拷贝／10^5细胞，明显低于正常人。COX回归模型单因素分析显示移植前TREC水平与移植后长期生存、慢性移植物抗宿主病（cGVHD）有明显的相关性（P〈0．05），与CMV感染亦有一定的相关性（P=0．084），而与急性移植物抗宿主病（aGVHD）的发生无明显的相关性。COX回归模型多危险因素的分析结果显示，受者移植前TREC水平与移植后长期生存、cGVHD、CMV感染（P=0．07）等具有相关性，与aGVHD的发生无明显相关性。其结果与单一TREC因素对移植后的预后指标的影响一致。结论接受MSD—BMT患者移植前的胸腺近输出功能与移植预后具有明显的相关性，可以作为影响allo—HSCT后独立的预后因素。; 符粤文吴德沛常伟荣朱子玲岑建农邱桥成冯宇锋何军; 关键词：造血干细胞移植 COX比例风险回归模型

利用T细胞受体重排删除环和TCRBV克隆谱型研究异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建被引量：1: 2007年; 目的通过T细胞受体重排删除环（TREC）和T细胞受体（TCRBV）克隆谱型研究异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后T细胞免疫重建。方法应用实时PCR的方法定量检测43例3组不同类型allo—HSCT后及70名正常供者TREC水平；应用RT—PCR扩增其中24例3组不同类型allo—HSCT后及5名正常供者的外周血的TCRBV24个家族的基因序列，利用基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达、互补决定区3（CDR3）克隆性质及计算BV家族的利用率。结果移植前患者TREC定量检测结果为（335．1±782．5）拷贝／10^5细胞，明显低于正常人。3组在移植后3个月TREC含量均明显下降，同胞相合骨髓移植（MSD—BMT）组TREC恢复快于其他两组，且在移植后24个月基本恢复到移植前水平。单倍型骨髓移植（HID—BMT）组的TREC恢复延迟。在移植后3—19个月内TCRBVCDR3克隆谱型仍处于不均一状态，在6～16个BV家族中有表达。多克隆表达率在33％～48％，其余为单克隆或寡克隆增生，且分布在24个不同的BV家族，未见共用的BV家族。结论通过TREC和TCRBV克隆谱型分析，移植后3～24个月，胸腺输出初始T细胞数量低水平及TCRBV家族克隆性利用。单倍型骨髓移植后T细胞免疫缺陷更严重，与临床经过一致。; 符粤文吴德沛岑建农冯宇锋常伟荣邱桥成朱子玲朱平; 关键词：异基因造血干细胞移植免疫缺陷 TREC

HLA同胞全相合异基因造血干细胞移植后T细胞重建的规律: 2007年; 目的通过胸腺近输出功能和T细胞受体克隆谱型来研究同胞全相合骨髓移植后T细胞免疫重建。方法应用实时定量PCR的方法定量检测23例同胞全相合骨髓移植后不同时间及70例正常供者T细胞受体重排删除环（TRECs）水平；应用RT-PCR扩增其中10例患者骨髓移植后及5例正常供者外周血的T细胞受体β链可变区（TCRBV）24个家族的基因序列，通过基因扫描的方法判断TCRBV家族的克隆表达、互补决定区3（CDR3）克隆性质及计算TCRBV家族的利用率。结果70例正常人外周血单个核细胞中TRECs为（3351．1±3711．1）拷贝／10^5细胞，年龄与TRECs含量呈负相关。移植前患者TRECs定量检测结果为（307．9±433．3）拷贝／10^5细胞，明显低于正常人。移植后1～5个月患者TRECs水平均明显下降，部分患者未能检测到TRECs。移植后6个月TRECs明显升高并持续1年；移植后24个月TRECs水平有较大提高并接近移植前状态。移植后2～15个月，10例患者在7～16个BV家族有表达，且多克隆表达率为48％，单克隆及寡克隆分布在24个BV家族。结论在移植后早期TRECs为低水平并持续一段时间。移植后6个月，胸腺产生一定数量的初始T细胞并且TCRBV CDR3谱型显示BV家族的利用及多克隆的表达均在增加。; 符粤文吴德沛岑建农冯宇锋朱子玲朱平; 关键词：造血干细胞移植 T细胞免疫重建

异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的分子特征被引量：5: 2007年; 目的研究异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后细胞免疫重建过程中T细胞克隆的T细胞受体B链可变区互补决定区3（TCRBVCDR3）分子特征。方法应用RT—PCR扩增24例不同类型白血病患者allo—HSCT后及5名正常供者外周血的TCRBV24个家族的基因序列，通过基因扫描（Genescan）的方法判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质及计算B链可变区（BV）家族的利用率。对于寡克隆表达的T细胞克隆进一步电泳，得到单克隆条带并测序，获得一组与移植物抗宿主病（GVHD）或巨细胞病毒（CMV）直接相关的TCRBVCDR3的分子。结果在移植后2个月至19个月，单倍型骨髓移植的9例患者在6～14个BV家族中有表达，多克隆表达率为33％，其余为单克隆或寡克隆表达。无血缘关系外周血干细胞移植的5例患者在10～15个BV家族中有表达，多克隆表达率为45％。同胞全相合骨髓移植的10例患者在9～16个BV家族中有表达，多克隆表达率为48％。单克隆或寡克隆增生分布在24个不同的BV家族，未见共用的BV家族。单倍型骨髓移植后细胞免疫恢复迟于其他两组。其中2例患者在移植后2个月、移植后3个月检测TCRBV，发现移植后随时间增加BV家族的利用增加，CDR3的多克隆群体增多。得到的23条与GVHD及CMV直接相关的TCRBV CDR3分子，经过生物信息学比较发现，在相同的BV家族内，不同患者中可以出现结构相似的CDR3氨基酸分子，也可以完全不同；不同BV家族的CDR3分子相差较大，未发现共同使用的氨基酸基序。结论不同类型白血病患者allo-HSCT后19个月内，TCRBV家族的利用仍处于不均一状态。单倍型骨髓移植后细胞免疫恢复迟于其他两组。得到的一组与GVHD及CMV相关的单克隆或双克隆T细胞CDR3分子，在相同的BV家族内，不同患者出现结构相似的CDR3氨基酸分子；不同BV家族的CDR3分子之间未发现共同使用的氨基酸�; 符粤文吴德沛孙爱宁冯宇峰常伟荣朱子玲朱平; 关键词：造血干细胞移植免疫重建克隆

IL-2和IL-15激活供者自然杀伤细胞在异基因造血干细胞移植应用的实验研究被引量：5: 2008年; 目的探讨IL-2和IL-15激活的供者自然杀伤（NK）细胞在异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）中减轻移植物抗宿主病（GVHD）发挥移植物抗白血病效应方面的作用。方法采用免疫磁珠分选小鼠脾NK细胞，采用添加IL-2和IL-15的培养基扩增NK细胞并测定NK细胞杀伤活力。C57BL／6小鼠作为供鼠，BALB／c小鼠作为受鼠，部分小鼠移植前8天静脉接种EL9611白血病细胞。异基因移植小鼠输注骨髓细胞5×10^6和脾细胞5×10^6。NK细胞治疗组输注骨髓细胞和脾细胞各5×10^6以及激活的NK细胞1×10^7，并且给予腹腔注射IL-2和IL-15。移植后观察GVHD发生、生存期、嵌合度、免疫重建。结果分选NK细胞纯度为95．7％～97．1％。培养后NK细胞杀伤活力较静息时增加3倍。单纯异基因骨髓细胞输注组小鼠未见GVHD发生，异基因骨髓及脾细胞移植对照组移植后1周起开始出现GVHD表现。实验组小鼠发生GVHD的严重程度明显低于脾细胞输注小鼠（P〈0．05）。单纯全身照射预处理小鼠生存期9．5～14．0d。白血病模型中对照组移植后100d生存率10％，其余死于白血病；实验组80％生存期超过100d，实验组生存期明显长于对照组（P〈0．01）。实验组小鼠移植后2周外周血NK细胞占4．8％，对照组外周血NK细胞占2．8％，实验组NK细胞恢复早于对照组（P〈0．05）。实验组TRBV基因重建比对照组快，而且TRBV家族基因表达数比对照组多，对照组小鼠多见单克隆及寡克隆表达。结论IL-2和IL-15在体外可以有效促进NK细胞增殖与激活。allo—HSCT时给予激活的供者NK细胞输注以及相关细胞因子处理可以促进免疫重建、减轻GVHD发生、降低白血病复发。; 陈广华吴德沛孙爱宁杨明珍王易唐晓文常惠荣冯宇峰朱子玲; 关键词：白细胞介素15 自然杀伤细胞移植物抗宿主病

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卫生部科学研究基金(wjk2004-2-2005)

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