山东省自然科学基金(2009CM019)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：潍坊医学院潍坊医学院附属医院潍坊市人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- BCSC-1基因异位表达对MDA-MB-231侵袭能力影响及其机制探讨被引量：2
- 2014年
- 目的:利用已构建的乳腺癌候选抑制蛋白-1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因真核表达质粒转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,观察BCSC-1基因异位表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力的影响,初步探讨其影响机制。方法:利用脂质体将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染野生型MDA-MB-231细胞,以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的MDA-MB-231细胞为对照组,野生型MDA-MB-231细胞为空白对照组,转染后经G418加压筛选获得稳定BCSC-1表达细胞株。细胞划痕和Transwell细胞侵袭实验分析转染前后细胞侵袭能力的改变,实时荧光定量PCR分析转染前后基因的变化,细胞免疫组化分析转染前后BCSC-1以及细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)的变化。结果:转染后成功获得BCSC-1基因异位高表达稳定细胞株。细胞划痕实验显示,转基因组细胞平均迁移距离为(105.33±13.61)μm,较对照组(225±18.02)μm和对照组(236±16.46)μm明显降低,F=60.50,P=0.002。细胞侵袭实验显示,转基因组24h平均穿膜细胞数为34.67±2.52,较空白对照组56.66±2.08和对照组63.33±4.16明显降低,F=72.33,P=0.005。实时定量荧光PCR结果显示,转基因组BCSC-1表达水平为32.66±2.51,较对照组2.33±1.52和空白对照组明显升高,F=333.12,P=0.001;转基因组ICAM-1表达水平为28.67±3.79,较对照组3.33±1.53和空白对照组明显升高,F=127.14,P=0.003。细胞免疫组化结果显示,转染后BCSC-1以及ICAM-1表达水平明显增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对MDA-MB-231细胞体外转移和侵袭能力有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与ICAM-1表达增高有关。
- 邸大琳陈蕾王丽娜王洪伟魏兵王会东鞠吉雨
- 关键词：乳腺肿瘤基因表达MDA-MB-231细胞
- BCSC-1过表达抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移
- 2013年
- 目的:研究人乳腺癌候选抑癌蛋白1基因(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)过表达对肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,并探讨其可能的机制。方法:将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染的Bel-7402细胞作为BCSC-1组和空载体组,Bel-7402细胞为野生型组。MTT法、Transwell实验、体外黏附实验和划痕实验分别检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,Real-time PCR检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞中与细胞增殖、黏附相关的ICAM-1、PTTG、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)mRNA表达的影响。结果:转染pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1后Bel-7402细胞中BCSC-1 mRNA的表达水平显著高于空载体组和野生组细胞[(10.58±0.56)vs(1.10±0.22)、(1.00±0.01),均P<0.01],成功制备BCSC-1稳定过表达的Bel-7402细胞株。与空载体组和野生型组相比,BCSC-1组Bel-7402细胞生长速度明显减慢[72 h:(0.29±0.003)vs(0.34±0.014)、(0.35±0.013),均P<0.05];侵袭率[(76.20±1.85)%vs(93.42±3.24)%、(100.00±1.05)%,均P<0.01)]、黏附率[(58.57±0.84)%vs(97.14±0.84)%、(100.00±1.30)%,均P<0.01]显著降低,迁移距离显著降低[(116.60±10.58)vs(231.33±10.26)、(237.96±11.58)μm,均P<0.01];同时过表达BCSC-1的Bel-7402细胞的OPN mRNA表达量明显降低[(0.12±0.06)vs(0.95±0.14)、(1.00±0.08),均P<0.01],ICAM-1、PTTG mRNA表达无明显变化。结论:BCSC-1过表达能够抑制Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移能力,其机制可能与OPN基因表达下降有关。
- 田俊芳邸大琳王洪伟巩方郇雪洁鞠吉雨
- 关键词：肝癌BEL-7402细胞迁移
- BCSC-1基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定
- 2014年
- 目的构建BCSC-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7,实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰效果。方法 设计并合成两条针对人BCSC-1基因的干扰序列(BCSC-1 shRNA1和BCSC-1shRNA2)以及对照序列(NS),将其连接入载体PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒Lipofectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7,QPCR方法检测两种干扰载体对BCSC-1基因的抑制效率。结果 菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP载体,DNA测序证实插入序列无误。QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后,BCSC-1 shRNA1组和BCSC-1 shRNA2组BCSC-1基因表达水平分别为0.34±0.046和0.63±0.043,较空白对照组和NS组均有明显下降(P<0.05),且BCSC-1 shRNA1抑制效果优于BCSC-1 shRNA2(P<0.05)。结论 成功构建了两种BCSC-1基因慢病毒干扰载体,两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中BCSC-1基因表达水平。
- 王洪伟刘义帅邸大琳魏兵吴国庆鞠吉雨
- 关键词：慢病毒载体基因MCF-7细胞实时荧光定量PCR
- BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应被引量：3
- 2012年
- 背景与目的:人乳腺癌候选抑制蛋白1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因已被证实是一种新型抑癌基因,在多种肿瘤细胞均存在表达缺失的现象。该研究通过将BCSC-1基因转染至人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,探讨BCSC-1基因异位表达对NCI-H446细胞增殖的抑制效应。方法:用PCR扩增BCSC-1 cDNA,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1。通过脂质体把pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染入野生型NCI-H446细胞。以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的NCI-H446细胞为对照组,野生型NCI-H446细胞为空白对照组。采用流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测细胞增殖;免疫组化确认BCSC-1基因和CD44分子在NCI-H446细胞中的表达。结果:成功构建了真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1,制备了BCSC-1基因异位高表达的NCI-H446稳定细胞株。细胞周期分析显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞大部分阻滞在G0/G1期,明显高于对照组和空白组(P<0.01)。MTT法检测显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞与对照组、空白组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。免疫组化显示异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞CD44表达增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对NCI-H446细胞的恶性增殖行为有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与细胞周期阻滞和黏附分子CD44表达增高有关。
- 袁芳鞠吉雨唐媛媛邸大琳王丽娜孙萍
- 关键词：NCIH446细胞细胞周期CD44
