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有机溶剂分级沉淀分离线性β-1,3-葡寡糖: 2015年; 盐酸水解二甲亚砜中的热凝胶可大规模地制备线性β-1,3-葡寡糖。为了快速高效地分离二甲亚砜中线性β-1,3-葡寡糖,采用不同种类的有机溶剂进行沉淀和分级沉淀。十三种常见有机溶剂中九种可以沉淀热凝胶水解产物,其中二氯甲烷和乙酸乙酯具有较高的应用可行性。二氯甲烷和乙酸乙酯可以分级沉淀分离线性β-1,3-葡寡糖,乙酸乙酯使用体积较小但选择性较差。分级沉淀效果受热凝胶浓度、水含量和离子强度的影响,而不受水解程度的影响。有机溶剂分级沉淀法可以快速高效地终止水解反应和分离水解产物,并可进一步回收二甲亚砜和有机溶剂进行重复利用,对β-1,3-葡寡糖的分离纯化具有重要的指导意义。; 陆光兴罗宸毛江川杨晗贾云蒋巧诗张洪涛詹晓北朱莉; 关键词：热凝胶二甲亚砜有机溶剂

双酶耦合催化法合成特定聚合度β-1,3-葡寡糖研究被引量：3: 2018年; 采用蔗糖磷酸化酶和昆布二糖磷酸化酶双酶耦合催化工艺合成β-1,3-葡寡糖。以蔗糖为底物,通过蔗糖磷酸化酶磷酸解蔗糖生成α-D-葡萄糖-1-磷酸（α-D-Glucose-1-phosphate,G1P）,再以来自纤细眼虫（Euglena gracilis Z）中的昆布二糖磷酸化酶为β-1,3-葡寡糖合成酶实现G1P所带的葡萄糖单元往引物葡萄糖上的添加,通过控制催化反应时间得到不同聚合度的寡糖。在该策略下,反应0.5 h时耦合催化合成寡糖聚合度在4~6之间;反应4 h时,有7~11糖生成;4 h之后反应趋于平衡,并无更高聚合度的寡糖生成,聚合度稳定在4~11之间。对合成的寡糖进行电喷雾串联质谱（electrospray ionization tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS）和氢核磁共振（hydrogen nuclear magnetic resonance,^1H-NMR）分析,可证明产物为β-1,3-葡寡糖。对耦合催化条件进行优化,发现在100 mmol/L的磷酸缓冲液（pH 6.5）、100 mmol/L的蔗糖、50 mmol/L的葡萄糖、5 mmol/L的MgCl2、0.1 U/mL昆布二糖磷酸化酶、0.2 U/mL蔗糖磷酸化酶,40℃条件下反应4 h,葡萄糖的转化率可达39.4%。; 贺海涛张洪涛曲娟娟郭进郑明仪蒋芸詹晓北

De Novo Sequencing of complex mixture of fructo-glucooligosaccharides derived from biocatalysis method with ESI-CID-MS/MS: Fructo-oligosaccharides, former most found existed in honey, has been successfully synthesized with microorgan...; Hong-Tao ZhangJuanjuan QuZhi-Mou GuoF.Javier MorenoM.Fernandez-LobatoShuang ZhangXue-ming XuXiao-Bei Zhan; 关键词：FRUCTO-OLIGOSACCHARIDES; 文献传递

基于电喷雾串联质谱的蓝藻寡糖脱果糖分析及系列α-1,2-葡聚寡糖的制备被引量：1: 2014年; 为获得系列α-1,2-葡聚寡糖,首先以蓝藻寡糖六糖、八糖、九糖和十糖为原料,在0.5 mol/L的三氟乙酸(TFA)中于95℃酸解9 min以脱去还原端果糖,经低压凝胶色谱分离纯化,用电喷雾离子化-碰撞诱导解离-串联质谱(ESI-CID-MS/MS)和基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)鉴定和序列表征,获得了除去末端果糖的α-1,2-五、七、八和九糖;然后在0.5 mol/L的TFA中于95℃对混合蓝藻寡糖六糖和八糖酸水解45 min,用Bio-Gel P2凝胶柱对混合物进行分离和纯化,并通过ESI-MS和MALDI-MS对获得的每个寡糖组份进行表征,获得了聚合度为2,3,4和6的α-1,2-葡聚寡糖.本研究为利用糖生物芯片技术进行α-1,2-葡聚寡糖的功能筛选及分析其与靶标蛋白之间相互作用的特异性提供了葡聚寡糖物质基础.; 张洪涛朱莉詹晓北; 关键词：电喷雾串联质谱

香菇子实体中水溶性多糖LFI和LFII的分级精制及其结构表征被引量：3: 2014年; 以香菇子实体为材料,依次经过0.9%Na Cl和80℃热水进行提取,获得多糖LFI和LFII,然后比较了树脂AB-8和DA201对LFI和LFII的脱除色素效果,确定了AB-8为最佳脱色树脂,脱除色素率分别为72%和53%。用多角度光散射仪器对所分离多糖的分子质量进行了测定,然后利用红外光谱,1H-NMR,13C-NMR和甲基化分析分析对LFI和LFII进行结构表征。得到实验结果:LFI和LFII的重均分子质量Mw分别为1.350×106Da和2.771×106Da,数均分子质量Mn分别为1.337×106Da和2.693×106Da。LFI多糖组分由α-1Man、β-1Glc、α-1Gal、β-1,3-Glc-、α-1,6-Glc-、α-1,4-Glc-和α-1,4,6-Man-糖单元组成;LFII多糖组份由α-1Xyl,α-1Gal,β-1Glc,β-1,3-Glc-,β-1,6-Glc-,α-1,6-Man-,β-1,3,6-Glc,α-1,4,6-Man-和α-1,2,6-Gal-糖单元组成。由此获得并实现了香菇子实体中可溶性多糖的结构信息。; 张洪涛赵小亮范尊晓罗宸朱莉毛江川詹晓北毛延卿; 关键词：香菇水溶性多糖

α-1,3-葡聚糖的精制、鉴定及其系列寡糖的制备与序列表征: 2014年; 目的:提取α-1,3-葡聚糖并获得系列α-1,3-葡聚寡糖。方法:以香菇子实体粗提粉为原材料,依次经生理盐水(0.9%Na Cl)和水溶解提取,然后用质量分数5%Na OH和质量分数0.05%Na BH4溶解,调节p H值至中性再分离提取的分级沉淀策略,获得了依次命名为LFⅠ、LFⅡ、LFⅣ、PⅢ和PⅣ的5个不同组分,再利用红外光谱(infrared spectroscopy,IR)和核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)对PⅣ结构进行鉴定,然后利用酸解法对PⅣ进行寡聚化,并利用常压色谱Bio-Gel P4柱进行分离,同时对每个组分利用基质辅助激光解吸-电离质谱(matrix assisted laser desorption ionization mass spectrometry,MALDI-MS)或电喷雾离子化质谱法(electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS)进行表征。结果:结构分析表明PⅣ为线性α-1,3-葡聚糖,10 mmol/L三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)中,100℃处理2 h为较佳的水解条件,经过Bio-Gel P4柱分离获得的各个组分被依次鉴定为α-1,3-2~α-1,3-13糖。结论:实现α-1,3-葡聚糖的分级精制与结构鉴定,成功获得结构确定的系列α-1,3-葡聚寡糖。; 张洪涛范尊晓朱莉赵小亮詹晓北; 关键词：核磁共振

基于pH调控的环β-1,2-葡聚糖合成及结构鉴定被引量：1: 2018年; 目的：研究pH调控对发酵法生产环β-1,2-葡聚糖的影响,并对pH调控条件下所产环葡聚糖的结构进行解析。方法：以根瘤菌ATCC 1333为研究对象,进行pH调控与不调控的发酵过程分析,并结合乙醇分级沉淀对pH调控后的发酵液中多糖进行分离提纯,经Superose 12层析纯化,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-MS）、单糖组成分析、电喷雾串联质谱（electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS）,傅里叶红外光谱（fourier transform infrared spectoscopy,FTIR）,核磁共振nuclear magnetic resonance,NMR）手段对葡聚糖进行结构鉴定。结果：提出两阶段pH调控发酵策略,生长期pH控制为7.0,产糖期pH控制为5.5,与自然发酵模式相比,环葡聚糖产量增加了52%,细胞浓度增加了102%,并且发酵颜色不再发生褐化现象,更有利于后续环葡聚糖的分离纯化。并确定pH调控对根瘤菌ATCC 1333发酵生产的葡聚糖的结构并无影响,合成的环葡聚糖是以葡萄糖为单体,通过β-1,2糖苷键连接的环葡聚糖,聚合度从17~22,以19为主的环状葡聚糖,无支链结构。结论：pH调控对于发酵生产环β-1,2-葡聚糖的结构无影响,为环β-1,2-葡聚糖的发酵工艺研究提供理论基础,也为研究β-1,2-葡聚糖提供可靠的糖源。; 曲娟娟詹晓北张洪涛周献超贾雨辰曹雪颖; 关键词：MALDI-MS ESI-MS NMR

基于ESI-CID-MS/MS离子碎片峰特征的香菇多糖水解机制及系列香菇寡糖的制备被引量：5: 2014年; 将香菇多糖和0.02 mol/L三氟乙酸(TFA)溶液按照1 mg∶200μL比例混合并于100℃水解,然后利用快速蛋白液相色谱(FPLC)技术对分别水解2,4,6 h的水解产物中不同聚合度寡糖的组成与丰度进行分析,从而确定最佳水解时间;用确定的最佳时间对水解残留多糖重复水解3次,直至多糖沉淀消失为止,然后分别对水解产物进行FPLC分离并依次收集每批次的七糖.对七糖进行ESI-CID-MS/MS分析,结合β-1,3-二糖、七糖及β-1,6-葡聚寡糖二糖的ESI-CID-MS/MS质谱特征,可获得每次水解产物中寡糖的结构信息,进而获得香菇多糖的水解机制;最后用P4凝胶柱对水解产物进行色谱分离,获得具有不同聚合度的全序列寡糖.结果表明,香菇多糖的最佳水解时间为4 h,在不同批次的水解过程中香菇寡糖的结构由β-1,3/1,6-寡糖过渡为纯β-1,3-寡糖.; 张洪涛朱莉张爽詹晓北; 关键词：香菇多糖

双酶耦合催化法规模合成β-1,3-葡寡糖研究: β-1,3-葡寡糖作为功能糖,已经在功能食品领域展现出极大的应用潜力。如何实现β-1,3-葡寡糖的大规模、廉价制备成为葡聚寡糖产业领域研究的难点和热点。目前β-1,3-葡寡糖的获得主要通过对热凝胶的酸解和酶解法来制备,价...; 贺海涛张洪涛詹晓北; 文献传递

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国家自然科学基金(31201384)

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