国家自然科学基金(81072068)
- 作品数：31 被引量：128H指数：6
- 相关作者：张宝刚李洪利尹崇高郭文君孙磊更多>>
- 相关机构：潍坊医学院潍坊医学院附属医院南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤相关巨噬细胞通过EMT促进乳腺癌的浸润转移被引量：6
- 2013年
- 探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)是否通过上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)促进乳腺癌浸润转移。免疫组化检测80例乳腺浸润性导管癌中TAMs标记物CD68、E-cadherin和Vimentin的表达。结果显示,乳腺浸润性导管癌中CD68阳性表达率明显高于正常乳腺组织,CD68阳性表达与分化程度、淋巴结转移程度相关,与E-cadherin表达呈负相关,与Vimentin表达呈正相关。分离新鲜肿瘤组织中的TAMs,细胞免疫荧光鉴定TAMs分离成功;乳腺癌MCF-7细胞在TAMs条件培养基培养后:细胞形态学发生改变;Transwell侵袭实验表明,细胞侵袭转移力增强;Western blot结果显示,细胞中E-cadherin表达明显减少,Vimentin表达明显增多。由此可得出,TAMs与乳腺癌的浸润转移过程密切相关,TAMs可促进MCF-7细胞发生EMT进而促进乳腺癌的浸润转移。
- 宋瑞卉张宝刚李洪利尹崇高董惠郭文君
- 关键词：乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞上皮-间质转化
- CCL18通过与Nir1结合促进胶质瘤细胞侵袭的研究被引量：3
- 2015年
- 背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果:Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论:在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。
- 陈萍萍田红艳李洪利史立宏任甜甜翟丽敏张宝刚
- 关键词：胶质瘤AKTSIRNA
- 下调Raptor表达对乳腺癌细胞侵袭能力影响及其机制探讨被引量：2
- 2014年
- 目的研究Raptor对乳腺癌细胞侵袭能力的作用及其机制。方法采用小RNA干扰技术,向MDA-MB-231细胞转染Raptor小RNA干扰质粒,并通过蛋白质印迹法检测转染细胞Raptor的表达水平以鉴定转染效果。癌细胞体外侵袭实验观察使用RNAi降低Raptor表达后MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化。再进行蛋白质印迹实验检测细胞中ARK5的磷酸化情况和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)与基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达。收集潍坊医学院附属医院病理科2008-01-15-2012-12-31 52例乳腺癌和8例癌旁组织,使用免疫组织化学染色检测Raptor的表达水平。结果转染成功的SiRaptor/MDA-MB-231细胞Raptor蛋白条带灰度值为529.22±81.58,明显低于MDA-MB-231组的1 345.63±215.05(F=37.799,P=0.004)和SCR/MDA-MB-231组的1 349.15±85.13,F=145.082,P<0.001。体外侵袭实验发现,实验组穿透Matrivgel基质膜的细胞数为40.00±3.61,少于对照组细胞的82.33±10.50,t=6.602,P=0.003。EGF刺激后实验组细胞中ARK5蛋白的磷酸化水平为224.72±30.14,较对照组(852.46±88.93)低,F=134.083,P<0.001;MMP-2蛋白的表达为604.32±177.06,较对照组(1 051.72±116.54)低,F=13.365,P=0.022;MMP-9蛋白的表达为347.85±84.80,较对照组(924.46±108.61)低,F=52.535,P=0.002。乳腺癌组织Raptor的表达与淋巴结转移存在相关性,χ2=9.094,P<0.001。结论 Raptor可能通过磷酸化ARK5以增加MMP-2和MMP-9的表达,从而与乳腺癌细胞的侵袭相关。
- 李小龙齐岳亮陈为一孙磊田红艳张宝刚刘雨清
- 关键词：RAPTOR乳腺肿瘤雷帕霉素靶蛋白
- 小RNA干扰降低COX-2表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨小RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株COX-2蛋白表达及增殖凋亡的影响。方法:应用已合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-231细胞株,采用免疫荧光技术和蛋白印迹法(Westernblotting)检测COX-2蛋白的表达;通过MTT实验和流式细胞术分别检测siRNA后对细胞增殖和凋亡的影响结果:转染后72 h,与阴性对照组细胞相比,实验组细胞的COX-2蛋白表达水平明显下降(P<0.01);COX-2减低的乳腺癌细胞的增殖能力比对照组细胞明显受抑制(P<0.05);流式细胞仪检测实验组细胞与阴性对照组细胞相比早期凋亡增加(P<0.05)。结论:利用siRNA技术能够显著抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231中COX-2蛋白的表达;同时能够明显抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖,并可诱导其凋亡的发生。
- 徐滨李媛媛张宝刚赵云刘雨清
- 关键词：乳腺肿瘤环氧化酶-2RNA干扰
- BMK1表达对胶质瘤细胞U87侵袭能力影响机制探讨被引量：1
- 2014年
- 目的探讨大丝裂原活化蛋白激酶1(big mitogen-activated protein kinase 1,BMK1)表达对U87细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法应用siRNA干扰技术转染U87细胞株,并采用蛋白质印迹法检测U87细胞中BMK1表达及转染后BMK1表达情况。体外癌细胞侵袭实验检测U87细胞转染后侵袭能力变化。BMK1下降后,蛋白质印迹法检测间叶细胞特异性标记蛋白N-cadherin、T-cadherin、Vimentin和转录因子Snail、Slug、Twist1、Zeb1的表达。结果蛋白质印迹法检测结果显示,U87细胞中BMK1相对表达量为1.0±0.21,SCR/U87细胞中BMK1相对表达量为1.1±0.18,SiBMK1/U细胞中BMK1相对表达量为0.45±0.12,差异有统计学意义,F=12.129,P=0.008。体外癌细胞侵袭实验显示,SiBMK1/U87实验组穿透Matrigel膜基质的细胞数为106±18,SCR/U87对照组为61±15,U87对照组为62±14,差异有统计学意义,F=7.977,P=0.020;U87对照组与SCR/U87对照组差异无统计学意义,P=0.941;而SiBMK1/U87实验组穿透基膜的细胞数明显多于U87对照组(P=0.014)和SCR/U87对照组(P=0.013),差异有统计学意义。蛋白质印迹法结果显示,SCR/U87和SiBMK1/U87细胞中N-cadherin相对表达量分别为1.0±0.13和3.8±0.31,t=-14.427,P<0.001;Vimentin相对表达量分别为1.5±0.16和3.9±0.22,t=-15.281,P<0.001;T-cadherin相对表达量分别为4.5±0.12和1.3±0.14,t=30.059,P<0.001。SCR/U87和SiBMK1/U87细胞中Twist1蛋白相对表达量分别为0.75±0.14和2.3±0.22,t=-10.295,P=0.001,差异有统计学意义。表明BMK1表达影响Twist1的表达。结论 BMK1与U87细胞侵袭性显著相关,其侵袭性的调控是通过间叶转化(mesenchymal transition,MT)实现的。
- 齐岳亮陈为一李小龙陈萍萍李洪利刘晓丽张宝刚
- 关键词：U87细胞SIRNA干扰
- NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移被引量：5
- 2013年
- 本课题组先前研究证明NUAK1/ARK5参与乳腺癌、胶质瘤侵袭转移,但机制尚不清楚.本文证明,NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移.应用小RNA干扰技术敲除乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的NUAK1,用G418进行稳定筛选,并用Western印迹进行蛋白质表达检测,结果显示,成功敲除MDA-MB-231细胞中的NUAK1;采用Transwell侵袭实验检测NUAK1在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用,结果表明,NUAK1被干扰的SiNUAK1/MDA-231细胞的侵袭能力明显减弱;应用免疫荧光法对细胞的F-actin进行荧光染色,半定量F-actin聚合分析结果显示,IGF-1在转染空载的细胞组(Scr/MDA-231)能诱导肌动蛋白短暂的聚合反应,而在敲除NUAK1的细胞组(SiNUAK1/MDA-231)肌动蛋白的聚合显著减少;用细胞因子IGF-1刺激乳腺癌细胞观察cofilin磷酸化,结果显示,在敲除NUAK1的细胞组(SiNUAK1/MDA-231),IGF-1诱导的cofilin的磷酸化明显受抑制.上述结果表明,NUAK1能通过促进F-actin的聚合从而影响乳腺癌细胞的侵袭转移.
- 尹崇高李平李洪利孙磊刘菲张丽娜李文通张宝刚
- 关键词：乳腺肿瘤
- 靶向阻断Snail逆转非小细胞肺癌多药耐药的研究被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肺癌组织中Snail、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance p rotein,LRP)的表达并分析它们的相关性。用RNA干扰技术稳定敲除肺腺癌细胞系A549中的Snail,采用Western blot法检测稳定转染后Snail蛋白的表达情况。Snail下降后,Western blot法检测P-gp、LRP蛋白表达情况。结果:Snail、P-gp、LRP在NSCLC组织中的表达率分别是73.1%、53.8%、51.9%,P-gp及LRP的蛋白表达与Snail的表达呈正相关。采用RNA干扰的方法成功敲除肺腺癌细胞系A549中Snail基因;A549细胞中Snail基因被敲除后耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显降低。结论:在NSCLC中,Snail蛋白的表达与耐药相关基因的表达呈正相关;阻断肺癌细胞系A549细胞中的Snail能有效逆转肺癌的多药耐药特性。
- 张丽娜刘菲孙磊田慧玲陈为一李洪利张宝刚尹崇高郭文君
- 关键词：SNAIL上皮一间质转化LRP
- PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力机制的研究被引量：7
- 2014年
- 背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)检测PTTG1蛋白在不同胶质瘤细胞系中的表达;采用小RNA质粒干扰技术抑制U87细胞中PTTG1蛋白的表达,应用Western blot技术检测转染的效率;通过体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭力的变化;采用Western blot技术检测经过表皮细胞生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后敲除PTTG1的细胞组(siPTTG1/U87)与转染空载的细胞组(Scr/U87)中Akt、ARK5磷酸化的情况。结果:PTTG1蛋白在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达;敲除PTTG1后U87细胞的侵袭力明显下降;对Scr/U87细胞进行EGF刺激5 min后,Akt、ARK5的磷酸化情况显著增强,而无论有无EGF的刺激,siPTTG1/U87中Akt、ARK5的磷酸化情况都没有明显改变。结论:在恶性胶质瘤细胞中,PTTG1蛋白呈高表达状态并且与侵袭性显著相关,其对侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。
- 陈为一李小龙齐岳亮李洪利尹崇高刘晓丽张宝刚郭文君
- 关键词：胶质瘤SIRNA
- NUAK1增加乳腺癌细胞的趋化和粘附能力被引量：1
- 2014年
- 本课题组先前已证明NUAK1/ARK5可通过影响F-actin的聚合从而促进乳腺癌细胞的侵袭和转移.但是NUAK1是否还通过其它机制影响乳腺癌的侵袭和转移尚有待于探讨.本文证明NUAK1还可以影响乳腺癌细胞趋化、粘附能力从而在乳腺癌细胞侵袭转移中起重要作用.应用化学合成的小RNA干扰质粒转染到乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,用免疫印迹技术检测NUAK1蛋白的表达情况.结果显示,在敲除NUAK1的细胞(siNUAK1/MDA231)中,NUAK1蛋白表达水平明显降低;趋化运动实验结果显示,siNUAK1/MDA231细胞的趋化运动能力比未处理组(Scr/MDA231)细胞明显降低;细胞粘附实验结果显示,EGF刺激5 min、15 min后,siNUAK1/MDA231细胞比Scr/MDA231细胞粘附细胞数量均明显减少;免疫印迹技术检测integrinβ1磷酸化验证NUAK1影响乳腺癌细胞粘附的机制.结果显示,siNUAK1/MDA231细胞内integrinβ1磷酸化比Scr/MDA231细胞不同程度降低.上述结果表明,NUAK1通过磷酸化integrinβ1促进乳腺癌细胞与纤维粘连蛋白的粘附,从而促进乳腺癌的侵袭和转移.
- 李洪利尹崇高
- 关键词：乳腺癌整合素Β1粘附
- 乳腺癌中mTOR、CCR7的表达及与淋巴结转移的关系被引量：5
- 2013年
- 目的探讨乳腺浸润性导管癌中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)与趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CCR7)的表达以及与乳腺癌侵袭、转移之间的关系。方法采用免疫组化MaxVision法检测105例乳腺浸润性导管癌、55例转移淋巴结及40例正常乳腺组织中mTOR和CCR7的表达,并分析mTOR和CCR7的表达与乳腺癌侵袭和淋巴结转移的关系以及二者之间的相关性。结果 mTOR在乳腺浸润性导管癌、转移淋巴结及正常乳腺组织中的阳性率分别为68%(71/105)、93%(51/55)、25%(10/40),差异有统计学意义(P<0.05);CCR7在乳腺浸润性导管癌、转移淋巴结及正常乳腺组织中的阳性率分别为74%(78/105)、94%(52/55)、28%(11/40),差异有统计学意义(P<0.05)。在乳腺癌中,mTOR和CCR7的表达呈正相关(rs=0.203,P<0.05)。mTOR和CCR7的高表达均与淋巴结转移有关(P<0.05)。结论mTOR和CCR7的异常高表达可能与乳腺癌的侵袭、转移有关,且检测二者的表达可作为判断乳腺癌转移及预后的预测指标。
- 刘清华孙磊李媛媛李小龙王竹青刘雨清
- 关键词：乳腺肿瘤浸润性导管癌MTORCCR7
