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一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：3: 2013年; 为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌,从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份,利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌,采用3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活,结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16SrDNA序列进行鉴定。结果表明,从样品中分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B.LY02,纤维素酶活力可达0.5351U/mL。该菌株呈短杆状,革兰氏染色阳性,能形成芽孢。基于16SrDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus licheniformis strain CICC10095的亲缘关系最近,基因序列的同源性为96.5%,因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。; 董鹤娟丁轲恒子钤贾艳艳彭春平罗伟光李旺; 关键词：纤维素酶芽孢杆菌

双纤维素酶基因在乳酸杆菌中的融合分泌表达被引量：3: 2014年; 为提高纤维素的降解效率,将两种不同的纤维素酶基因在乳酸杆菌中融合表达,实现双纤维素酶在乳酸杆菌中的高效表达。根据两纤维素酶的基因序列设计两对引物,并在两基因间引入一段连接肽。通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增得到两纤维素酶基因CelL15和CelL73,将其融合后连接到乳酸杆菌分泌性表达载体pMJ67中,构建重组表达质粒pMJ-CelL15-CelL73,电转化入乳酸杆菌Lactobacillus casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,通过PCR验证获得了分泌表达双纤维素酶的重组乳酸杆菌。电泳实验结果表明重组乳酸杆菌成功表达了1个约为83 kD的融合蛋白。平板酶活力检测发现重组乳酸杆菌能明显降解底物中的羧甲基纤维素钠,培养液上清中纤维素酶酶活力可达1.25 U/mL。; 丁轲罗伟光丁盼盼李旺李元晓余祖华恒子钤贾艳艳程相朝; 关键词：纤维素酶分泌

以绿色荧光蛋白标记干酪乳杆菌的构建被引量：3: 2014年; 为了更直接、更方便检测乳酸杆菌表达系统,研究通过PCR法以质粒pEGFP-C1为模板扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)序列,将扩增产物连接到乳酸杆菌的整合型载体pMJ67上,成功构建了重组质粒pMJ-egfp。将质粒pMJ-egfp电转化入乳酸杆菌L.casei CECT5276,egfp编码序列通过质粒上的Lac操纵子同源重组整合到L.casei CECT5276染色体上,连续传代50次,发现绿色荧光蛋白能够稳定遗传。说明试验获得了能在无抗性选择压力下稳定表达绿色荧光蛋白的重组菌L.casei CECT5278。; 丁轲丁盼盼余祖华李旺李元晓曹平华程相朝张春杰; 关键词：绿色荧光蛋白干酪乳杆菌稳定性电转化

鸭源高产L-乳酸凝结芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：9: 2015年; 为了获得高产L-乳酸的凝结芽孢杆菌,从河南省汝州市的肉鸭养殖场采集50份鸭肠道黏液样品。利用分离培养基对细菌进行分离和纯化,用试剂盒检测L-乳酸产量,结合菌落形态、显微形态、生理生化试验和16S r DNA序列鉴定其种属。鉴定结果表明:从50株细菌中分离得到一株高产L-乳酸的菌株BC07,L-乳酸产量为43.2 g/L。经鉴定为凝结芽孢杆菌,能形成芽孢,而且该菌株能够耐受较强的酸、胆盐和高温。; 孟长纪丁轲李旺李元晓孙二刚; 关键词：鸭源凝结芽孢杆菌 L-乳酸

2011—2013年河南省犬细小病毒分子流行病学调查与分析被引量：7: 2014年; 为了解近年来河南省犬细小病毒病的流行情况及毒株的分子变异特征,于2011—2013年从郑州、洛阳、开封、信阳等10个不同的地区采集了573份疑似犬细小病毒病病例样品,首先采用国标法检测犬细小病毒(CPV)VP2基因462—1 023bp片段,对扩增的序列进行测序和进化树分析。在分类的基础上分别挑选出代表性毒株,克隆VP2全基因,测序后进行比较分析。结果表明,国标法检测样品的阳性率为88.48%,阳性毒株分为7个分支,通过对7个代表毒株VP2基因426AA的碱基组成分析,发现6株属于CPV-2a型,1株属于CPV-2b型。与国内外的代表毒株的核苷酸相似性为98.4%~99.9%,氨基酸相似性为97.6%~100.0%。遗传进化树分析表明,7个CPV分离株分属于2个分支,其中KJ438801株与其它分离株亲缘关系较远。氨基酸序列比较发现共有12个位点发生变异,其中突变率较高的位点是267、297、324、440、555位氨基酸,每个毒株均有2~3个氨基酸发生突变。以上结果表明,河南省流行的CPV以CPV-2a型和CPV-2b型并存,但以CPV-2a型为主,且基因呈多变异现象,从而为河南省犬细小病毒病的疫苗研发和防治提供了科学的参考依据。; 丁轲余祖华彭春平赵战勤何雷贾艳艳张春杰程相朝夏咸柱; 关键词：犬细小病毒分子流行病学调查 VP2基因

猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定被引量：1: 2013年; 利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离菌中筛选了一株酶活较大的菌株B.A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16S rDNA序列长度是1 463 bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99%,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2.19×103U·mL-1。; 李三栋丁轲罗伟光彭春平孙二刚刘永垒; 关键词：蛋白酶芽孢杆菌 RDNA

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河南省教育厅科学技术研究重点项目(13B230987)