本文旨在研究小鼠体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)重构胚中γ-微管蛋白的动态变化。采用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察的方法,对去核前后第二次减数分裂中期(metaphase II of meiosis,MII)的卵母细胞和核移植后的重构胚进行γ-微管蛋白的定位观察,分析γ-微管蛋白的作用。结果显示,MII期卵母细胞去核后,γ-微管蛋白主要分布于皮层;卵母细胞激活后随着胞质星体的逐渐增多,皮层γ-微管蛋白明显减少,但没有新的纺锤体形成。卵丘细胞注入去核MII期卵母细胞后,经SrCl2激活能形成一个纺锤体,在分裂前期,斑点状的γ-微管蛋白散布在染色体之间;在分裂中期,γ-微管蛋白沿着纺锤体分布或聚集于纺锤体两极;在分裂后期或末期,γ-微管蛋白迁移到分开的染色单体之间。部分重构胚发生提前激活,形成异常纺锤体,主要表现在γ-微管蛋白和染色体分布异常。卵丘细胞注入未去核的MII期卵母细胞后,经SrCl2激活后能形成两个纺锤体,γ-微管蛋白的分布与正常核移植相类似。同样,部分卵母细胞发生提前激活,形成两个小梭形纺锤体或一个宽而大的桶状纺锤体。以上结果提示,供体细胞核内的γ-微管蛋白在SCNT重构胚纺锤体组装过程中发挥着关键作用;SCNT重构胚易被提前激活形成异常纺锤体,γ-微管蛋白的异常与染色体分布失常和纺锤体结构异常密切相关。
SIN3转录调控蛋白家族成员A(SIN3 transcription regulator family member A,Sin3A)包含许多蛋白质相互作用结构域,是一个多蛋白的转录共阻遏复合物的核心组分,通过结合该转录阻遏复合物中的组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)起到转录抑制的作用。Sin3A通过与不同的功能蛋白,如Mad(Max dimerization protein)-Max(MYC associated factor X)、Myc(Myelocytomatosis oncogene)、甲基Cp G结合蛋白2(Methyl Cp G binding protein 2,Mecp2)等相互作用,在细胞增殖、分化、凋亡,肿瘤的形成、细胞周期调控、植入前胚胎发育以及组织器官发育过程中扮演重要角色。近来有研究表明,Sin3A在体细胞重编程过程中显著上调,因此,Sin3A可能在体细胞重编程中也起到重要作用。
