国家自然科学基金(81271785)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：王恒樑刘先凯冯尔玲王东澍朱力更多>>
- 相关机构：军事医学科学院兰州生物制品研究所有限责任公司上海海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 炭疽芽胞杆菌中CRISPR位点被引量：5
- 2014年
- 【目的】考察炭疽芽胞杆菌中规律成簇的间隔短回文序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)位点多态性情况及基于CRISPR位点多态性的分子分型方法是否在炭疽芽胞杆菌分型中适用。【方法】下载NCBI数据库中6株炭疽芽胞杆菌基因组并截取其中CRISPR位点片段序列。根据炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点信息,设计相关引物,以193株炭疽芽胞杆菌基因组为模板PCR扩增CRISPR位点片段,测序。本地Blast比对截取序列及测序结果,查看CRISPR位点在炭疽芽胞杆菌中的多态性情况,并比较炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌内CRISPR位点情况。【结果】炭疽芽胞杆菌内CRISPR位点不存在多态性。【结论】基于CRISPR位点多态性的分子分型方法不适用于炭疽芽胞杆菌分型,但可以用于区分炭疽芽胞杆菌与蜡样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌。
- 高志奇王东澍冯尔玲王秉翔惠一鸣韩少波焦磊刘先凯王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌分子分型
- 炭疽芽胞杆菌A16R株FtsE蛋白的可溶性表达和纯化
- 2014年
- 目的:构建炭疽芽胞杆菌FtsE蛋白的原核表达载体,实现其在原核表达系统中的可溶性表达,并纯化融合蛋白。方法:用PCR方法从炭疽芽胞杆菌A16R株扩增得到ftsE基因片段,酶切后连接到pET28a原核表达载体,构建重组表达质粒pET28a-ftsE,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,筛选可溶性诱导表达与纯化融合蛋白的条件,以获得高纯度融合蛋白。结果:构建了FtsE蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;在20℃下,经0.1 mmol/L IPTG诱导3 h表达的产物主要是可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化获得了高纯度的FtsE融合蛋白,经Western印迹检测,目的蛋白表达正确。结论:实现了炭疽芽胞杆菌FtsE蛋白原核表达系统的可溶性表达并获得了高纯度融合蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 李强刘先凯冯尔玲朱力王沛王红杨新华赵美玲姜永强王恒樑
- 关键词：炭疽芽胞杆菌
- 病原细菌糖蛋白研究进展
- 2013年
- 蛋白糖基化一度被认为只存在于真核生物中,但近年越来越多的研究显示,无论是N-连接糖基化还是O-连接糖基化都同样存在于原核微生物中,其中就包括一些病原菌。糖蛋白的存在对这些病原菌的生命过程至关重要,研究者希望通过对病原菌糖蛋白的研究,探索出新的方式来预防及治疗由相关病原菌引发的疾病。该文对一些重要病原菌内糖蛋白的研究进展进行了综述。
- 白国旺白国旺朱力
- 关键词：糖基化糖蛋白类病原菌
- 炭疽芽孢杆菌sigF缺失株的构建及其对芽孢形成的影响被引量：1
- 2017年
- 目的构建炭疽芽孢杆菌sigF基因缺失株,以及缺失株的sigF回复株,分析缺失株、回复株表型特点并明确sigF基因对芽孢形成的影响,为后续研究提供基础。方法采用同源重组技术在炭疽菌A16D2(pXO1+pXO2^-)菌株sigF基因处插入大观霉素抗性基因,取代sigF基因,构建了sigF基因缺失突变株。通过构建回复株质粒并电转到sigF基因缺失株中,构建了sigF基因的回复株。通过生长曲线测定、糖代谢能力比较、显微镜观察芽孢形成及微流控实验实时观察细胞生长等方法分析突变株和回复株的特点。结果获得炭疽菌A16D2菌株sigF基因缺失突变株和相应的回复株。生长曲线测定表明,突变株较出发菌株在繁殖体阶段生长状态无明显差异;糖代谢实验表明,突变株与出发菌株在对碳水化合物的利用上差异不显著;显微镜观察显示,突变株丧失了形成芽孢的能力、回复株恢复了部分形成芽孢的能力;微流控实验观察显示,缺失株细胞保持在不对称分裂的状态,回复株能形成芽孢。结论成功获得了炭疽菌A16D2sigF基因缺失突变株。该研究证明sigF基因为炭疽菌形成芽孢所必需,但不是细胞生长所必需的因子。
- 洪一平王东澍吕宇飞陈蒙冯尔玲王恒樑卢瑛刘先凯
- 关键词：芽孢突变株
