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国家高技术研究发展计划(2006AA100312)

作品数：15 被引量：40H指数：4
相关作者：刘庆慧黄倢陈文博张秀丽邢婧更多>>
相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛科技大学中国海洋大学更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 15篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 12篇农业科学
  • 5篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 8篇对虾
  • 7篇WSSV
  • 5篇细胞
  • 4篇白斑综合征
  • 3篇蛋白
  • 3篇血细胞
  • 3篇白斑综合征病...
  • 3篇白斑综合症
  • 3篇白斑综合症病...
  • 2篇对虾白斑症病...
  • 2篇对虾白斑综合...
  • 2篇对虾白斑综合...
  • 2篇疫苗
  • 2篇螯虾
  • 2篇免疫
  • 2篇克氏原螯虾
  • 2篇活性
  • 2篇发酵
  • 2篇白斑症病毒
  • 2篇VP28

机构

  • 11篇中国水产科学...
  • 4篇辽宁师范大学
  • 3篇青岛科技大学
  • 3篇中国海洋大学
  • 2篇青岛农业大学
  • 1篇中国科学院
  • 1篇黄海水产研究...

作者

  • 11篇刘庆慧
  • 6篇黄倢
  • 5篇陈文博
  • 3篇张秀丽
  • 3篇战文斌
  • 3篇侯林
  • 3篇邢婧
  • 2篇王轶南
  • 2篇唐小千
  • 1篇梁艳
  • 1篇李响
  • 1篇陈婷
  • 1篇杨冰
  • 1篇韩文君
  • 1篇仇知光
  • 1篇黄健
  • 1篇林颖博
  • 1篇程江峰
  • 1篇石正丽
  • 1篇成君军

传媒

  • 3篇动物医学进展
  • 3篇渔业科学进展
  • 2篇安徽农业科学
  • 2篇水产学报
  • 2篇海洋水产研究
  • 2篇中国海洋大学...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2011
  • 4篇2010
  • 3篇2009
  • 7篇2008
  • 1篇2007
共 15 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
发酵条件对细菌工程菌产WSSV-VP37的影响被引量：1
2009年
在pBAD/gIIIA-VP37重组表达载体构建的基础上,研究发酵工艺参数对重组WSSV-VP37(rVP37)蛋白表达量的影响,并对重组质粒的稳定性和重组菌的生长进行研究。结果表明,pBAD/gIIIA-VP37表达的rVP37以包涵体形式存在于菌体中,发酵温度及诱导时间影响rVP37蛋白表达和菌体产量,以37℃诱导5h最佳。重组质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,WSSV-VP37基因的插入对宿主菌的生长规律影响不大。
张秀丽杨啸刘庆慧马璀艳黄倢
关键词：发酵条件蛋白表达
一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用被引量：3
2010年
RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的方法。使用商业载体pGEMT和pDRIVE,以2步克隆法构建含有发夹环(hairpin loop)dsRNA表达载体,转化RNA酶Ⅲ缺陷的大肠杆菌HT115(DE3)进行体内转录制备dsRNA。构建的发夹RNA表达载体含有494bp的正向靶序列和403bp的反向互补靶序列,其中正向靶序列多出的91bp即可成为loop环,而无需再次克隆加入。培养30mL的细菌,即可得到1mg纯化的dsRNA,而其成本仅为使用商业化体外转录试剂盒的四分之一。为评估RNAi效果,按照每1克虾体肌肉注射2μg dsRNA的剂量,在dsRNA注射后0,6,12和24h采集血淋巴,RT-PCR检测KPI mRNA的基因转录水平。与对照组GFP-dsRNA和NaCl注射组相比,KPI-dsRNA注射组可以在24h内沉默血淋巴中的KPI基因。结果表明该方法是可大规模制备长的dsRNA的方法。
梁艳Vanvimon SaksamerpromeKallaya Sritunyalucksan黄倢
关键词：斑节对虾RNA干扰双链RNA
对虾原代细胞培养研究现状被引量：2
2010年
对对虾血细胞的原代培养进行综述。对于对虾用作细胞培养的组织和培养基进行总结,介绍了对虾用于细胞培养的组织以及原代培养的培养基和培养条件控制,还介绍了对虾细胞培养的潜在应用价值,尤其是对于病毒防治工作的价值。
张秀丽刘庆慧
关键词：细胞培养
真核表达载体pcDNA3.1(+)-vp28的构建及其在细胞中的表达被引量：3
2010年
[目的]为研究对虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白与虾细胞之间的作用机制奠定基础。[方法]采用PCR扩增方法构建含白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28的真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-vp28,用磷酸钙共沉淀法将重组质粒转染到293T细胞中,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。[结果]VP28的PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中呈现出1条634bp左右的条带,与GenBank中vp28的序列完全一致。对pcDNA3.1(+)-vp28转染后的阳性单克隆菌落进行PCR鉴定、扩大培养和质粒提取,并对所得质粒进行HindⅢ和BamⅢ双酶切,获得了5409和610bp左右的2条带,与预期结果一致;所获扩增产物与vp28序列完全一致,说明重组质粒pcDNA3.1(+)-vp28被成功转染到293T细胞中;SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示,pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中的表达产物与预期结果相符。[结论]pcDNA3.1(+)-vp28在293T细胞中可成功表达VP28。
姜坤黄健张峥成君军石正丽刘庆慧
关键词：WSSVVP28细胞转染293T细胞
重组毕赤酵母SMD1168/pGAPZaA-VAP1稳定性及发酵表达WSSV-VAP1被引量：1
2008年
研究发酵时间和接种量对WSSV-VAP1重组菌蛋白表达量的影响及重组毕赤酵母中外源基因的稳定性。结果表明,构建的重组菌SMD1168/pGAPZaA-VAP1在发酵72h后,蛋白表达量占总蛋白10.45%,控制接种量对基因工程菌Pichia pastoris表达WSSV-VAP1非常重要。外源基因的插入对宿主菌的生长未产生明显的影响,重组质粒在毕赤酵母SMD1168中很稳定。
刘庆慧陈婷黄倢
关键词：重组毕赤酵母稳定性发酵
对虾白斑综合征病毒亚单位疫苗研究进展被引量：4
2008年
对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是一种可以引起养殖对虾暴发性死亡的传染性病原,由于其强烈的传染性和极高的致死率,使得人们在应对它时,必须侧重于早期的防控。近年的研究表明,对虾存在类免疫(quasi-immune)机制,而WSSV的重组蛋白可以诱导对虾产生抗病保护效应。目前有关对虾白斑综合征病毒亚单位疫苗的研究大多围绕诱导产生高效免疫应答能力的囊膜蛋白进行免疫接种方式来展开。文章对该领域研究成果做一综述,旨在为今后WSSV的防控提供参考。
陈文博侯林刘庆慧
关键词：对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白亚单位疫苗
WSSV-VP39基因克隆与结构分析被引量：2
2007年
根据已公布的WSSV-VP39全基因序列(GenBank No.AAL89161)设计1对引物,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析,扩增出约898bp的特异条带,将其回收后克隆入pGAPZα-A载体中,并进行序列测定与分析。结果表明,扩增序列与Gene Bank登录序列(GenBank No.AAl89161)核苷酸同源性100%。序列分析表明,WSSV-VP39基因编码蛋白无跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和酪氨酸硫酸化位点,1个糖基化位点。蛋白序列比对结果表明,WSSV-VP39与WSSV-VP37具有较高的同源性,其在WSSV侵染中的作用值得关注。
刘庆慧韩文君杨冰黄倢
关键词：基因克隆
Hematological Changes in White Spot Syndrome Virus-Infected Shrimp,Fenneropenaeus chinensis(Osbeck)被引量：1
2008年
The pathological changes of hemocytes in the haemolymph and hepatopancreas were examined in experimentally and naturally WSSV(white spot syndrome virus) infected Fenneropenaeus chinensis. The results showed that the pathological manifesta-tions of hemocytes were similar among moribund shrimps infected via injection,feeding and by nature. Firstly,the total hemocyte counts(THCs) in WSSV-infected shrimp were significantly lower than those in healthy shrimp. Secondly,necrotic,broken and dis-integrated cells were often observed,and a typical hematolysis was present in the haemolymph smear of WSSV-infected shrimp. Thirdly,necrosis and typical apoptosis of hemocytes were detected with TEM in the peripheral haemolymph of WSSV-infected shrimp. Hyalinocytes and semi-granulocytes with masses of WSSVs in their nuclei often appeared,whereas no granular hemocytes with WSSV were found in the hepatopancreas of moribund infected shrimps. All our results supported that hemocytes were the main target cells of WSSV,and hyalinocytes and semigranular hemocytes seemed to be more favorable for WSSV infection in F. chinensis.
FENG ShoumingZHAN WenbinXING JingLI JunYANG KaiWANG Jing
关键词：白斑综合征
DNA疫苗与多糖类免疫促进剂在对虾疾病控制上的应用研究进展被引量：3
2008年
DNA疫苗作为第3代疫苗具有许多优点,其在水产养殖领域的应用前景广阔。多糖类免疫促进剂是一种能直接作用于免疫系统激活有关细胞的物质,它能够提高机体的免疫力,在虾的养殖领域中已得到应用。论文对DNA疫苗与多糖类免疫促进剂做了简要介绍,并对其在对虾疾病控制上的应用前景进行了展望。
李响刘庆慧侯林陈文博
关键词：DNA疫苗多糖免疫促进剂对虾疾病控制
白斑综合征病毒与中国对虾血细胞膜的体外结合实验被引量：1
2008年
筛选小分子受体配基或抗受体蛋白的单克隆抗体作为阻断剂,是阻断病毒感染的有效途径。通过差速离心法提取海捕中国对虾血细胞膜,分别利用Dot-Blot和ELISA技术,将血细胞膜包被于硝酸纤维素(NC)膜或酶标板,使地高辛(Digoxigenin,DIG)标记的对虾白斑综合征病毒(WSSV-DIG)与之4℃结合4h,并以碱性磷酸酶标记抗DIG抗体作为探针检测,实验结果皆为阳性,证明体外环境下WSSV能稳定地与血细胞膜结合。通过血细胞膜免疫Balb/c小鼠生产抗中国对虾血细胞多克隆抗体,以该多抗37℃孵育血细胞膜1h,然后使WSSV-DIG与血细胞膜结合并检测。在Dot-Blot实验中,阻断组发色明显浅于未阻断组;在ELISA实验中,阻断组OD值比未阻断组降低69%。可以推断,多抗中抗血细胞受体的抗体与血细胞膜上的受体蛋白结合,占据了WSSV黏附蛋白的结合位点,从而显著地抑制了WSSV与血细胞膜的体外结合。实验所建立的WSSV与对虾血细胞膜体外结合技术可以应用于WSSV与血细胞受体蛋白的黏附特性的研究以及WSSV阻断剂的筛选,多抗阻断实验证明了本方法的可行性。
林颖博战文斌邢婧唐小千刘宝良
关键词：白斑综合征病毒受体蛋白阻断剂
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