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利用响应面法优化鳗弧菌载体疫苗MVAV6203A-1冷冻干燥保护剂配方: 2012年; 应用单因素试验、复合保护剂组合试验和响应面分析法,对鳗弧菌载体疫苗MVAV6203A-1冷冻干燥的保护剂配方进行筛选和优化。试验结果表明,众多保护剂中半乳糖、海藻糖和脱脂牛奶的组合使用,能够显著提高细胞对冷冻干燥环境的耐受力。以冻干后的细胞存活率为响应值,响应面法优化的结果为:半乳糖4.6%、海藻糖2.3%、脱脂牛奶10.2%,以优化的最佳配方进行的3次重复冻干试验,细胞平均存活率可达77.3%。优化的保护剂配方适用于鳗弧菌载体疫苗的冻干生产。; 王三营刘琴王启要张元兴; 关键词：冷冻干燥保护剂响应面法

养殖大菱鲆迟缓爱德华氏菌的分离鉴定与系统发育分析被引量：10: 2008年; 从患病的大菱鲆成鱼体内分离到一株致病菌(编号1101),经人工感染试验证实该菌具有较强的毒力(LD50=3.34×106CFU/mL),并能从病鱼中重新分离出此菌。应用API20E自动鉴定卡及16S rRNA序列分析等方法对该菌进行了综合鉴定。结果显示菌株1101为革兰氏染色阴性、氧化酶阴性、触酶阳性,API20E鉴定系统鉴定为迟缓爱德华氏菌,相似率达99%。测定了其16S rRNA序列,长度为1419 bp,在GenBank上经同源性比对与迟缓爱德华氏菌聚为一类,同源性达99%,据此鉴定为迟缓爱德华氏菌(Ewardsiela tarda)。药敏试验结果表明菌株1101对多粘菌素较敏感,而对其它药物中度或不敏感。; 杨春志王秀华黄倢; 关键词：大菱鲆迟缓爱德华氏菌 RRNA 系统发育树

牙鲆幼鱼消化道内蛋白酶活性及食糜蛋白的GFP示踪被引量：3: 2009年; 用添加绿色荧光蛋白(GFP)饲料投喂牙鲆,研究了不同消化时间内食糜在牙鲆消化道中的分布情况,采用福林-酚法测定了不同时间胃、前肠、中肠和后肠各组织黏液蛋白酶活性。结果表明,牙鲆在摄食后消化道蛋白酶活性随着食糜在消化道内的分布而变化,食物的刺激引起消化腺体分泌蛋白酶。牙鲆摄食后1h食糜达到中肠,胃和中肠蛋白酶活性与空腹相比迅速增高;食糜在5h时遍布整个消化道,此时胃蛋白酶活性几乎检测不出,而前肠蛋白酶活性迅速增高,5h达到最高,然后开始降低;8h时中肠蛋白酶活性一直很高,之后降低;而后肠直到12h其蛋白酶活性仍维持在较高水平,说明牙鲆这种消化道较短的鱼类其肠道比胃在蛋白质消化过程中发挥更重要的作用。; 边慧慧黄健王秀华蒋继志; 关键词：牙鲆消化道蛋白酶活力

多效价载体疫苗免疫大菱鲆效果评价被引量：12: 2011年; 采用注射与浸泡2种方法,对构建的多效价载体疫苗MVAV6203A-1进行了免疫保护效果和血清效价的研究。结果显示,用多效价载体疫苗注射免疫大菱鲆(Scophthalmus maximus),可同时获得对鳗弧菌(Vibrio anguil-larum)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的免疫保护效果,免疫相对保护率分别为80.6%和77.0%;用ELISA方法测定血清效价的结果显示,免疫MVAV6203A-1后大菱鲆血清效价最高达到2 048,均值为891,明显高于对照组的97;用多效价载体疫苗浸泡免疫大菱鲆后,对鳗弧菌与嗜水气单胞菌的免疫相对保护率分别为62.2%和11.7%。血清效价分析显示,实验组与对照组的均值均为64。上述结果表明,所构建的疫苗MVAV6203A-1可有效提高大菱鲆对鳗弧菌和嗜水气单胞菌的免疫力,并且免疫和攻毒的途径可能是影响免疫保护效果的因子。本研究旨在为鳗弧菌与嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。; 王秀华周凌云王玉娟刘琴; 关键词：大菱鲆鳗弧菌免疫保护率抗体效价

MS-222对牙鲆麻醉效果被引量：22: 2009年; 以MS-222为麻醉剂,在13～14℃水温条件下,用浸浴麻醉方法测试了不同麻醉剂浓度和不同麻醉时间对牙鲆复苏时间、复苏率和24h存活率及长时间麻醉对复苏率的影响以及超有效浓度麻醉剂(60mg/L)麻醉后的抗露干能力。预备实验证明,本试验条件下麻醉剂的有效浓度为50mg/L。实验表明,将麻醉剂浓度从50mg/L提高到200mg/L,供试鱼被麻醉的时间由288s缩短至50s,复苏时间由94s延长至106s;用60、100和200mg/L的麻醉液持续麻醉后,可获得100%复苏率的最长麻醉时间分别为64、32和32min,牙鲆经MS-222麻醉后抗露干时间延长。牙鲆麻醉后复苏过程中存在较大的个体差异,但一旦复苏,牙鲆24h内的存活率可达100%。实验表明,MS-222的合理麻醉浓度为60mg/L,此浓度下最长麻醉时间为64min,麻醉露干时间应低于60min。; 王秀华张烨伟杨春志; 关键词：牙鲆

两株养殖大菱鲆体表出血病原菌的分离鉴定被引量：4: 2008年; 从秦皇岛和胶南患出血病的大菱鲆（Scophthalmus maximus）肾脏中分别分离得到优势菌株MHK。和JN，人工感染实验证实这两株菌对大菱鲆有较强的致病性，半数致死量（LD50）分别为6．30×10^3cfu／尾和2．51×10^4cfu／尾。对病原菌16SrDNA序列对比分析及进化树分析表明，MHK2和JN与迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）高度一致。API ID32E快速鉴定结果表明，MHK2和JN生理生化特征与非致病性迟缓爱德华氏菌标准菌株LSE6一致，属于迟缓爱德华氏菌。经APIZYM酶活检测，MHK2和JN的碱性磷酸盐酶和酸性磷酸酶活性明显高于LSE6这两项酶活特征有望作为区别致病性和非致病性迟缓爱德华氏菌的一个标准。; 李杰莫照兰茅云翔肖鹏; 关键词：出血病

esaC基因对迟缓爱德华氏菌的毒力及T3SS蛋白分泌的影响被引量：2: 2010年; 为了确定编码迟缓爱德华氏菌(E.tarda)Ⅲ型分泌系统(T3SS)装置蛋白的esaC基因的功能,采用基因敲除的方法构建了E.tarda野生型致病菌株LSFAO的esaC基因无极性缺失突变株LSE40ΔesaC,该突变株缺失了esaC的46-1452bp。Western blotting分析表明,由于esaC的缺失,E.tarda T3SS的输送器蛋白(EseB,EseC,EseD)不能分泌到细胞外,同时细菌的自凝聚现象消失;毒力检测发现,突变株LSE40ΔesaC对蓝曼龙鱼的半数致死量比野生型菌株提高了11.5倍。结果表明,esaC基因影响T3SS输送器蛋白的分泌和E.tarda的毒力。此研究确定了esaC基因作为E.tarda T3SS装置蛋白的功能,加深了对E.tarda致病机理的了解。; 李杰莫照兰茅云翔王波杨佳银邵林; 关键词：迟缓爱德华氏菌毒力

基于斑马鱼模型的鳗弧菌减毒活疫苗的生物安全性评价被引量：1: 2011年; 利用疫苗对养殖鱼类进行疾病预防正得到逐步应用,而减毒活疫苗通过浸泡方式也能使鱼体获得较高的免疫保护力。利用模式动物斑马鱼对鳗弧菌减毒活疫苗MVAV6203的生物安全性进行了评价。首先进行了疫苗对斑马鱼毒性实验,每条鱼注射免疫的半致死量为9.26×104CFU;其次分析了鳗弧菌在水体中的存活情况,菌体浓度在1.0×106CFU/mL条件下,10 d后水体基本检测不到鳗弧菌;最后考察了其在鱼体内的存活情况,注射或浸泡免疫3 d后,鱼体组织匀浆物未检测到该菌,表明鳗弧菌减毒活疫苗具有较好的生物安全性。; 石竹刘琴张智慧杨敏俊张元兴; 关键词：斑马鱼生物安全性

迟缓爱德华氏菌及其致病机理被引量：22: 2007年; Edwardsiella tarda is a gram-negative pathogen with a wide host range, which can infect many kinds of fish and lead to extensive losses in aquaculture. The pathogenesis of E. tarda is not clearly understood. So far as we know its virulence factors include hemolysins, chondroitinases, dermatonecrotic exotoxic substances, catalases, etc. The latest study indicates that the type three secretion system (TTSS) of E.tarda is tightly associated with bacterial pathogenesis. The gene structure of the TTSS has been elucidated and relational research is on the way.; 王波莫照兰; 关键词：爱德华氏菌致病菌株鞭毛蛋白鲻鱼

从迟缓爱德华氏菌fosmid文库克隆编码寡肽透过酶的opp基因簇被引量：1: 2008年; 从迟缓爱德华氏菌（Edwarclsiellatarda）LSE40 fosmid文库克隆到编码寡肽透过酶的opp基因簇。该基因簇全长6741bp，含有5个ORF，依次编码OppA—B-C-D-F5个蛋白；位于oppA翻译起始住点上游385bp处有一个推测的转录起始位点，在该转录起点的-35和-10区分别有TAGACA和TATATT两个特征性启动子序列；位于oppA和oppB的间隔区和oppF之后的非编码区各有一个茎环结构，推测分别为oppA和opp基因簇的转录终止子。氨基酸序列分析表明该基因簇编码的各个蛋白与同属细菌鲶鱼爱德华氏菌（E．ictaluri）对应的各个蛋白高度相似，相似性在96％～98％；与其他革兰氏阴性菌相似性在56％～89％；与革兰氏阳性菌的相似性在27％～53％。以细菌OppA的保守结构域SBP_bac_5构建系统发生树，结果显示E．tardaLSE40与同属细菌E．ictaluri的亲缘关系最近，与肠杆菌科细菌的亲缘关系较近，与革兰氏阳性细菌的亲缘关系较远，表明oppA的SBP_bac_5结构域可作为细菌分类鉴定的依据。opp基因簇的获取为深入了解E．tarda适应环境和宿主的生存机制奠定了基础。; 杨佳银莫照兰茅云翔李杰叶旭红王波; 关键词：FOSMID文库

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国家高技术研究发展计划(2006AA100310)

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