江苏省自然科学基金(BK2009190)
- 作品数：13 被引量：48H指数：5
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- 相关机构：扬州大学中国农业科学院家禽研究所更多>>
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- 鹌鹑Piwi基因的克隆及鉴定
- 鉴于Piwi蛋白在哺乳动物生殖细胞中的重要作用,本研究选择体型小、繁殖周期短的鹌鹑为研究对象来开展禽类Piwi蛋白及其结合小RNA的初步研究,以期填补国内相关研究中的空白。本研究通过RT-PCR和RACE技术首次获得了鹌...
- 陈蓉常国斌张颖戴爱琴马腾徐琪陈国宏
- 关键词：鹌鹑PIWIPIRNA禽类
- 文献传递
- 鹌鹑首例小分子RNA测序图谱
- 非编码小分子RNA(ncRNAs)几乎存在于所有较高等的真核生物细胞中,对生物体具有非常重要的调控作用。各种调控小分子RNA图谱的构建可以促进ncRNAs调控网络的完善及RNA生物学的发展。本研究利用Solexa深度测序...
- 常国斌陈蓉张颖戴爱琴马腾徐琪陈国宏
- 关键词：鹌鹑睾丸小分子RNAMIRNAPIRNA
- 文献传递
- 鹌鹑piRNAs和Piwil1基因克隆及表达研究被引量：7
- 2011年
- 【目的】目前,国内外尚无有关禽类piRNAs及其结合蛋白Piwi的研究报道,开展禽类小分子RNA及其结合蛋白的研究将为小分子RNA的遗传特性、发生和消失机理以及转基因鸡等研究提供基础依据。【方法】以鹌鹑为研究对象,通过构建cDNA文库和TA克隆测序的方法从睾丸组织中获得piRNAs序列和Piwil1基因的CDS序列,同时采用Q-PCR技术分析了鹌鹑不同生命阶段不同组织中piRNAs和Piwil1基因的表达规律。【结果】从鹌鹑睾丸组织中克隆了13个piRNAs序列和Piwil1基因的CDS序列;Q-PCR结果表明piRNAs和Piwil1基因在鹌鹑不同生命阶段不同组织中均有不同程度地表达。【结论】鹌鹑piRNAs长度与哺乳动物相似;Piwil1基因与红色原鸡有较高的同源性,包含PAZ和Piwi结构域,无信号肽剪切位点,推测其属于Piwi家族蛋白,可能通过降低结合RNA的能力或者影响其它转录因子与结构基因启动子的亲和性发挥调控作用;在睾丸组织中,piRNAs和Piwil1蛋白的表达量均是随着个体的不断发育而增加,推断在禽类中piRNAs可能与Piwi蛋白相互作用共同调控精子的发生过程。
- 陈蓉常国斌张颖陈国宏胡国顺栾德琴刘艳戴爱琴
- 关键词：鹌鹑睾丸PIWI克隆
- 鸡肌内脂肪性状候选基因的聚合效应及初步验证被引量：5
- 2011年
- 【目的】旨在探讨影响鸡脂肪性状重要候选基因A-FABP、Ex-FABP的聚合效应,并对其进行初步验证,为进一步开发利用脂肪性状的有效分子标记提供依据。【方法】运用PCR-SSCP技术分别检测如皋鸡A-FABP、Ex-FABP基因所有外显子区域的单核苷酸多态性(SNPs),分析单基因型和聚合基因型与12周龄胸肌脂肪含量之间的关系;同时,采用荧光定量PCR技术检测后代分离群体单基因型和聚合基因型的发育性表达规律,进行聚合基因型遗传效应的初步验证。【结果】如皋鸡A-FABP的外显子3、Ex-FABP基因外显子4区域中存在A/G突变,共出现3种基因型;AA型(A-FABP)、BB(Ex-FABP)型个体的肌内脂肪含量显著高于其它基因型(P<0.05),为有利基因型,两者聚合的AABB型个体同样为最佳基因型。经后代分离群体Q-PCR证实,单基因表达和聚合基因型的表达均不存在性别效应,在胸肌组织中,两候选基因在4周龄时表达量最高,8周龄下降,至12周龄缓慢上升。在聚合基因型个体中,均以AABB型表达水平最高,ABAB型表达量较低。【结论】A-FABP、Ex-FABP两个基因存在聚合效应;其中,AABB型与胸肌组织中高肌内脂肪含量具有紧密关联性。A-FABP、EX-FABP两基因及其聚合基因型可作为如皋鸡肌内脂肪性状有效的候选标记。
- 常国斌刘向萍陈蓉栾德琴王克华张颖马腾周伟戴爱琴陈国宏
- 关键词：肌内脂肪基因型
- 鸡GPC1基因外显子8的SNPs与部分免疫性状的相关性分析
- 2012年
- 采用PCR-SSCP对12个不同鸡种glypican-1(GPC1)基因外显子8的单核苷酸多态性进行检测,同时检测如皋鸡、安卡鸡和文昌鸡3个鸡种56日龄的5个免疫性状,进一步分析SNP位点与免疫性状的关系。结果表明:12个鸡种中均出现3种带型,存在g.155 C>A错义突变,引起苏氨酸突变为精氨酸。12个鸡种群中,AA、AB和BB基因型平均频率分别为0.259、0.545和0.211;平均观察杂合度为0.466,平均Shannon信息指数为0.671。除乌骨鸡、大骨鸡偏离了Hardy-Weinberg平衡外(P<0.05),其余群体均处平衡状态。基于该位点构建的UPGMA聚类图将12个鸡种分为3大类,反映了12个鸡种在抗性方面存在的差异。经过关联分析,如皋、安卡鸡中AB型个体的IL-1浓度、H/L值与BB型存在显著差异,与AA型差异不显著;在其他免疫性状中各基因型之间均无显著差异。安卡鸡的一般抗性总体低于如皋鸡和文昌鸡。
- 盛中伟常国斌栾德琴周伟胡国顺刘艳李芹陈国宏
- 关键词：单核苷酸多态性免疫性状
- 13个鸡品种NLRC5基因外显子8多态性分析被引量：1
- 2012年
- 本研究采用PCR-SSCP方法对13个鸡品种的NLRC5基因外显子8的多态性进行了SNP检测,共检测到2个等位基因,2种基因型,其中北京油鸡、固始鸡、皖南三黄鸡、大骨鸡群体中检测到AA和AB两种基因型,其余群体中只检测出AA基因型。序列分析结果显示,在NLRC5基因外显子8的43bp处存在G/A突变,将该突变翻译为氨基酸仍然为缬氨酸,因此该突变是一个同义突变;卡方适合性检验结果显示:13个鸡品种均处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);根据群体遗传变异分析,13个鸡品种均处于低度多态或无多态(PIC<0.25)。本研究为NLRC5基因作为一种新兴研究的抗性基因是否能为鸡抗病性状选育工作的分子标记提供了初步的参考。
- 李芹常国斌窦套存栾德琴盛中伟陈国宏
- 关键词：多态性
- 细菌内毒素对鸡NLRC5受体及IFN基因转录的影响被引量：9
- 2011年
- 本研究旨在探讨鸡NLRC5受体及IFN基因对不同细菌内毒素的诱导表达变化,为禽类NLRC5受体的分子功能及其参与先天免疫调控的作用机制提供理论依据。用不同浓度的(0、0.1、1.0、10.0μg.mL-1)来自致病性大肠杆菌(E.coli,EC)和肠炎沙门氏菌(S.enteriditis,SE)的2种内毒素(LPS)分别刺激鸡天然巨噬细胞系(HD11)2、4和6h,在不同的时间点收集细胞,提取总RNA,并设计相关引物,利用荧光定量PCR分析鸡NLRC5受体以及下游功能基因IFNA和IFNB的转录量变化,探讨HD11细胞对不同来源的细菌内毒素的免疫反应。研究表明:与对照组相比,1.0和10.0μg.mL-1的EC-LPS、SE-LPS均能诱导HD11细胞产生免疫应答,但0.1μg.mL-1组未能诱导成功;不同细菌LPS诱导的免疫应答时间不一致,经EC-LPS诱导的NLRC5和IFNB基因均在刺激后6h达到转录高峰,与2、4h差异显著(P<0.05),与对照组差异极显著(P<0.01);但IFNA基因在2、6h达到高峰,而在4h下降,呈"V"型转录趋势。SE-LPS诱导的NLRC5和IFNA、IFNB转录量随时间均保持一直上升的趋势,在6h达到高峰,且与对照组及2、4h差异显著(P<0.05)。结果表明NLRC5受体与IFNA和IFNB共同参与了细胞对细菌内毒素的免疫应答,NLRC5基因可能对鸡先天免疫功能具有调节作用。
- 常国斌陈蓉栾德琴张颖刘向萍马腾戴爱琴周伟陈国宏
- 关键词：IFN先天免疫
- 如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性及其与部分免疫指标的关联分析被引量：1
- 2013年
- 采用PCR-SSCP技术对中国地方鸡种如皋鸡NLRC5基因外显子8多态性进行检测,结果检测到AA和AB2种基因型,基因型频率分别为0.867 9和0.132 1,X2适合性检验表明如皋鸡NLRC5基因外显子8等位基因的分布处于Hardy-Weinberg平衡状态。序列分析结果显示,NLRC5基因外显子8存在G43A同义突变。测定部分免疫指标,分析不同周龄如皋鸡个体免疫指标的差异以及12周龄如皋鸡2种基因型与免疫指标间的关联性,结果表明:IgM含量和IgG含量变化比较一致,随周龄不断降低;2周龄IgM含量显著高于4、6、8、10、12周龄(P<0.05);12、10、8周龄IgG含量极显著低于2、4、6周龄(P<0.01);淋巴细胞转化率在12周龄达到最大值为33.742%,极显著高于其他周龄(P<0.01);12周龄AA型个体的IgM和IgG含量、淋巴细胞转化率均高于AB型个体,但差异并不显著(P>0.05)。
- 李芹常国斌陈国宏徐琪窦套存栾德琴陈蓉盛中伟张颖
- 关键词：多态性免疫指标
- 基于IL-1β基因的不同鸡种遗传多样性和遗传分化研究
- ＜正＞引言IL-1是单核细胞及巨噬细胞分泌的一种细胞因子,由一条多肽链组成,包含α和β两种结构形式。IL-1β的主要功能包括信号传导、诱导其它细胞因子的表达与分泌、诱导其它免疫细胞的成熟与分化。鸡IL-1β基
- 常国斌王存波王克华李尚民窦套存胡雪萍洪军张颖陈国宏
- 文献传递
- 鸡胚胎期和出生后Pax3基因时空表达规律的研究被引量：6
- 2011年
- 为探讨鸡Pax3基因在胚胎阶段以及不同生长阶段的时空表达规律,试验选取同一批鸡胚(8、16、20 d和21 d)以及2、4、6、8、10、12周龄的如皋鸡各6只,公、母各半,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术分析了Pax3基因在胸肌、腿肌中的表达规律。结果表明:胸肌和腿肌组织中公、母鸡表达水平变化趋势一致,无性别效应;在胸肌组织中,Pax3基因在8 d的鸡胚中表达水平最高,随后降到最低,出雏前缓慢上升,出雏后随着周龄的增加表达水平保持在较低状态。但在腿肌组织中,Pax3基因的表达高峰在出雏前(20 d和21 d),出雏后随周龄的增加表达量持续降低,并保持在较低的水平。表明Pax3基因表达存在组织特异性,且集中在胚胎期大量表达,出雏后表达水平较低,揭示该基因可能对鸡肌纤维生长发育存在调控作用。
- 常国斌刘向萍张颖戴爱琴马腾周伟陈国宏
- 关键词：RT-PCR
