国家自然科学基金(30271004)
- 作品数：11 被引量：96H指数：8
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- 相关机构：浙江大学华南农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学理学更多>>
- 家蚕蛋白质双向电泳的样品制备方法被引量：32
- 2003年
- 进行蛋白质组研究的关键是要尽可能完整地获得一个基因组在一个生物体或一个组织器官的特定时期表达的蛋白质的种类和数量 ,双向电泳技术是分离组织和器官蛋白质的核心技术 ,而蛋白质样品的制备是双向电泳的基础。以家蚕胚胎、中肠、皮肤、丝腺等组织器官为材料 ,采用磷酸缓冲液或Tris HCl缓冲液抽提蛋白质样品 ,用 6种不同的蛋白质溶解缓冲液溶解蛋白质 ,经蛋白质双向电泳和蛋白质图像软件分析 ,结果表明用磷酸缓冲液抽提、蛋白质溶解缓冲液E溶解是制备家蚕蛋白质双向电泳样品的较好方法。蛋白质磷酸抽提缓冲液 (PBS)的组成为 :32 5mmol/LK2 HPO4,2 6mmol/LKH2 PO4,4 0 0mmol/LNaCl,pH 7 6。蛋白质样品溶解缓冲液E的组成为 :8mol/L尿素 ,2mol/L硫尿 ,4 %CHAPS ,2 0mmol/LTrisbase,30mmol/LDTE ,2 %Pharmalyte(pH 3～ 10 )。
- 钟伯雄颜海燕沈飞英李建科周丽
- 关键词：家蚕蛋白质双向电泳器官
- 家蚕胚胎血淋巴保幼激素结合蛋白肽质量指纹图谱分析
- 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对催青期出现的表达量较大的519号特异蛋白斑点进行了肽质量指纹图谱分析,得到了该蛋白斑点的肽质量指纹图谱。获得的肽质量指纹图谱与蛋白质数据库中已有的蛋白质酶解理论肽质量数或序列相比较,...
- 颜新培林高堂钟伯雄徐孟奎
- 关键词：家蚕肽质量指纹图谱
- 文献传递
- 家蚕五龄后部丝腺蛋白质构成与茧层量的关系被引量：34
- 2003年
- 家蚕 5龄期是后部丝腺细胞大量合成并分泌蚕丝主要成分丝素蛋白的时期 ,对这一时期后部丝腺细胞的蛋白质构成进行研究 ,有利于发现丝腺细胞分泌丝素蛋白有关的功能蛋白质 ,阐明蚕茧高产的机理。采用蛋白质双向电泳和图像分析技术 ,研究发现家蚕同一品种的不同个体 ,或同一个体不同部位的后部丝腺细胞蛋白质的构成基本一致。该结果反映了家蚕同一品种不同个体后部丝腺细胞的新陈代谢水平基本没有差异 ,家蚕品种个体间茧层量差异 ,可能是个体生长发育和后部丝腺细胞数的不同等原因造成 ,而与每一个体后部丝腺细胞的新陈代谢关系不显著。该结果也说明在目前双向电泳技术和染色技术的条件下进行家蚕后部丝腺蛋白质组研究时 ,从家蚕同一品种的任一个体、任一部位提取后部丝腺细胞的蛋白质样品 。
- 颜新培钟伯雄徐孟奎郭定国姚国华
- 关键词：家蚕后部丝腺功能蛋白质蚕茧产量双向电泳
- 家蚕催青期胚胎蛋白质图谱的建立被引量：25
- 2004年
- 胚胎发育一直是生命科学研究的主题之一。通过家蚕各个时期胚胎蛋白质的研究 ,可以从蛋白质水平探讨胚胎蛋白质的构成和基因顺序表达的规律。应用蛋白质组的研究方法 ,以连续发育的家蚕胚胎为材料 ,采用蛋白质双向电泳技术 ,对催青期各个时期的胚胎蛋白质进行了分离 ,建立了家蚕催青期各个胚胎蛋白质参考图谱。从催青期各个时期的胚胎蛋白质图谱中发现 :从临界期胚胎到气管显现期的胚胎 ,结构基因表达变化不大 ;从点青期开始 ,一些酸性蛋白有关的结构基因被激活表达。
- 颜新培钟伯雄曹家树徐孟奎沈飞英姚国华
- 关键词：家蚕催青期胚胎蛋白质图谱发育结构基因
- 家蚕温敏性品种胚胎发育的蛋白质表达谱变化被引量：13
- 2005年
- 采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,对温敏性家蚕品种K05在不同温湿度催青条件下不同发育阶段胚胎的蛋白质变化进行研究,发现蛋白斑点1、7、8、10、13、15、17、18、19、20和25的缺失、蛋白斑点11、12、16、21、22、23和24含量的降低与高温干燥条件下催青时胚胎的不孵化有关;而蛋白斑点2、3、5、6和9的特异表达,以及蛋白斑点4和14含量的增加,与高温多湿催青条件下胚胎正常发育孵化有关。由此推测:温敏性家蚕品种在高温干燥催青条件下不孵化的原因可能是由于一系列基因的被关闭或表达量下降所造成;而在高温多湿条件下催青时胚胎能够正常发育孵化,则可能是由于一些特异基因被激活,致使温敏性家蚕品种的生理代谢得到了补偿。
- 叶键钟伯雄林健荣颜海燕梁建设苏松坤徐海圣
- 关键词：家蚕蛋白质双向电泳
- 家蚕5龄幼虫后部丝腺细胞酶基因表达的比较分析被引量：4
- 2005年
- 基于了解家蚕后部丝腺细胞分泌丝素蛋白基因的表达调控信息,阐明蚕茧高产的机理,根据EST分析结果,分析了家蚕5龄幼虫不同发育时期后部丝腺细胞中酶基因的表达谱特征。发现家蚕5龄幼虫第1天和第5天的生理生化反应涉及氧化还原酶的数量最多,达到30个,转移酶数量达28个,水解酶数量达22个,合成酶数量达12个,裂合酶数量达6个,异构酶数量最少,只有4个。这6种酶基因在家蚕5龄第1天和第5天之间表达差异不大,表达频率超过10次的酶只有细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ、S腺苷甲硫氨酸合成酶和肽基脯氨酸顺反异构酶。上述结果暗示家蚕5龄不同时期,丝素蛋白合成能力的差异与酶分子的数量关系不密切。
- 钟伯雄余东亮梁建设缪云根苏松坤徐海圣
- 关键词：表达序列标签基因表达调控丝素
- 家蚕幼虫关联基因在胚胎期的表达(英文)被引量：2
- 2008年
- 用蛋白质表达谱分析技术研究家蚕胚胎发育时期的基因表达.用蛋白质双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质,用I mage Master Elite图谱分析软件比较分析12个家蚕胚胎发育特异时期的2-DE图谱,发现一些蛋白斑点丰度高,并且一旦出现就在后续特异时期一直表达,推测这些蛋白可能在胚胎发育和代谢方面起重要作用,从中选择5个点分析它们的序列和功能.用基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定蛋白质,发现5个幼虫期功能蛋白分别在4个胚胎发育特异时期表达:保幼激素结合蛋白(J HBP)基因在缩短期表达,表皮生长因子受体在头胸分化期表达,家蚕幼虫表皮蛋白和副腺特异肽在毛瘤发生期表达,淀粉酶在转青期表达.这些幼虫功能蛋白都在胚胎特定的生理期功能需要下出现,表明幼虫关联基因在胚胎期有序而及时地表达.
- 陈金娥杨惠娟李建营沈彦伟钟伯雄
- 关键词：家蚕胚胎发育
- 30K蛋白质对胚胎生长发育的影响
- 家蚕体内存在含量较多的、分子量约为30KDa 的一个蛋白质家族,被统称为30K 蛋白,有关其生物学功能不很清楚。家蚕有一个在胚胎期对高温干燥具有敏感性的品系,其胚胎在高温干燥条件（30℃、60%相对湿度（RH））催青,孵...
- 钟伯雄李建科林健荣颜海燕张平波藤井博
- 文献传递
- 家蚕催青前期胚胎蛋白质双向电泳图谱分析被引量：11
- 2005年
- 为了探讨家蚕 Bombyx mori胚胎蛋白质整体变化, 以多化性品种P50为材料, 采用蛋白质双向电泳技术及图像分析技术分析了催青前期胚胎 (戊3 以前) 各个时期蛋白质图谱及其变化情况。研究发现: 从临界Ⅱ期 (丙2 ) 胚胎到缩短期(戊2) 胚胎蛋白质双向电泳图谱基本稳定, 存在于临界Ⅱ期胚胎的蛋白斑点在催青前期的4个胚胎中消失的个数较少, 仅占22 80%, 而在催青的最后2个胚胎中消失的蛋白质斑点却占 48 18%; 在神经沟出现 (丁1)、腹肢突起 (丁2)、上唇突起 (戊1) 和缩短期 (戊2) 胚胎的双向电泳图谱中能够检测到 100 个特异蛋白质斑点, 这些特异蛋白质斑点大多在随后邻近的胚胎发育中消失, 暗示了这些特异蛋白可能与相应胚胎的形体特征发育有关。
- 颜新培钟伯雄徐孟奎梁建设沈飞英
- 关键词：家蚕蛋白质双向电泳胚胎发育
- 家蚕催青后期胚胎蛋白质双向电泳图谱分析被引量：22
- 2005年
- 采用蛋白质双向电泳技术分析了家蚕Bombyxmori催青后期胚胎蛋白质图谱的变化。研究发现:在头胸分化期(戊3)、反转期(己1)、毛瘤发生期(己2)、点青期(己3)、转青期(己4)和孵化期(己5)胚胎蛋白质的双向电泳图谱中共检测到209个特异蛋白斑点,其中己3和己4两个胚胎出现的特异蛋白斑点数在整个催青期胚胎中为最多,分别达55和77个。与催青前期胚胎出现的特异蛋白斑点变化规律相似,这些特异蛋白斑点大多也是在随后邻近的胚胎发育中消失。推测这些特异蛋白可能与相应胚胎的形体特征发育有关。
- 钟伯雄陈金娥颜新培徐孟奎梁建设
- 关键词：家蚕蛋白质双向电泳胚胎发育
