国家自然科学基金(30271008)
- 作品数：15 被引量：76H指数：6
- 相关作者：张传溪程家安施婉君张素方沈立荣更多>>
- 相关机构：浙江大学杭州市疾病预防控制中心上海交通大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 蜜蜂囊状幼虫病毒病的Nest-PCR检测被引量：24
- 2007年
- 蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病,病原为一小正链RNA病毒。如何尽早鉴别蜂群的感染在养蜂业生产上具有重要的意义。本文报道一种利用RNA反转录结合巢式PCR检测鉴定蜜蜂的囊状幼虫病毒病的方法。
- 许益鹏章奕卿李江红邢丽苹张传溪
- 关键词：中华蜜蜂反转录
- 二种胡蜂前溶血肽原基因在昆虫杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2006年
- 构建亚非马蜂和额斑黄胡蜂前溶血肽原基因的重组供体质粒pBacHT-PhPPM和pBacHT-VmPPM,转化到穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,得重组穿梭载体Bacmid-PhPPM和Bacmid-VmPPM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn-5B1-4,最后观察细胞表达时相动态.经ELISA法证实,胞内表达产物具有良好的抗原性,证明二种重组病毒Bacmid-PhPPM和Bacmid-VmPPM已在昆虫细胞中得到了表达.
- 施婉君张传溪程家安
- 关键词：胡蜂科
- 中华蜜蜂MRJP7基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2008年
- 用PCR方法从含中华蜜蜂Accmrjp7基因的质粒DNA模板中扩增出MRJP7成熟肽编码区片段,将该片段克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行融合表达,SDS-PAGE和薄层扫描显示,该基因得到高效表达,表达产物大小约为66 kDa,占细胞总蛋白的22.8%。利用割胶回收的方法,获得目的蛋白,注射兔子制备多克隆抗体,并利用所获抗体进行Western blot印迹分析,检测MRJPs,获得特异性条带。
- 李艳陈艳霞沈立荣张传溪
- 关键词：中华蜜蜂蜂王浆原核表达多克隆抗体
- 中华蜜蜂前溶血肽原基因在Tn-5B1-4细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 构建中华蜜蜂前溶血肽原基因的重组供体质粒pBacHT-GFPTAccPPM,将其转化进入穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,得重组穿梭载体Bacmid-GFPTAccPPM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn-5B1-4,最后观察细胞表达时相动态。经ELISA法和荧光显微镜观察证实,胞内表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有良好的抗原性,证明重组病毒Bacmid-GFPTAccPPM已在昆虫细胞中得到了表达。
- 施婉君张传溪程家安
- 关键词：中华蜜蜂基因DNA转染绿色荧光昆虫细胞
- 浅论城市害蜂的危害与治理被引量：11
- 2004年
- 蜂害是我国城市化发展过程中出现的新问题。该文综述了国内外螫人害蜂的种类、习性与危害 ,蜂毒的成分与毒理 ,被蜂螫伤者的救治及蜂害的治理方法 ,分析了目前我国所面临的城市蜂害问题 。
- 沈立荣程家安张传溪项海青
- 关键词：蜂毒生活习性毒理
- 2种蜜蜂和3种胡蜂蜂毒前肥大细胞脱粒肽原基因的克隆及同源性分析(英文)被引量：7
- 2003年
- 从中华蜜蜂、意大利蜜蜂、大胡蜂、墨胸胡蜂和亚非马蜂 5种雌成蜂毒腺中快速抽提总RNA ,用RT PCR方法分别扩增各得到大小约为 35 0bp的cDNA片段 ,进一步将这 5个片段克隆入pGEM T easy载体 ,进行测序和序列分析。结果表明 :所扩增得到的 5个片段长度均为 341bp ,均包含一个完整的开放阅读框和 3′端未编码区的 188bp核苷酸序列 ,证实为 5种蜂的蜂毒前肥大细胞脱粒肽原的cDNA。经序列比较 ,意大利蜜蜂、中华蜜蜂、大胡蜂、墨胸胡蜂和亚非马蜂前肥大细胞脱粒肽原核苷酸序列彼此间的同源性都为 90 %以上。中华蜜蜂、大胡蜂、墨胸胡蜂和亚非马蜂与意大利蜜蜂的前肥大细胞脱粒肽原氨基酸序列的同源性分别为 96 %、10 0 %、94 %和 98%。尽管大胡蜂和墨胸胡蜂与意大利蜜蜂属于不同的科 ,但它们的肥大细胞脱粒肽却完全相同 ,而中华蜜蜂与意大利蜜蜂属于同一个属 ,它们的肥大细胞脱粒肽却不相同。中华蜜蜂和亚非马蜂肥大细胞脱粒肽第 5号位的氨基酸为精氨酸 ,替代了意大利蜜蜂 5号位的半胱氨酸 ,该位置的半胱氨酸与 19号位的半胱氨酸组成意大利蜜蜂肥大细胞脱粒肽分子的一个对蛋白活性起重要作用的二硫键。
- 张素方施婉君程家安张传溪
- 关键词：蜂毒蜜蜂
- 中华蜜蜂蜂毒镇静肽基因的cDNA克隆和表达被引量：8
- 2003年
- 从中华蜜蜂 (Apisceranacerana)工蜂毒腺中快速抽提总RNA ,用RT PCR扩增得到大小约为2 5 0bp的cDNA片段 ,测序得到的片段长度为 2 34bp ,为蜂毒前镇静肽原 (preprosecapin)基因编码区的cDNA .以 3′RACE方法 ,扩增和测定了 3′端非编码区 2 19bp序列 .中蜂前镇静肽原cDNA序列与已报道的欧洲意蜂该基因cDNA序列具有 92 %同源性 ,氨基酸序列具有 87%同源性 .代表成熟肽镇静肽的最后 2 5个氨基酸序列 ,中蜂与意蜂同源性为 88% .3′端非编码区cDNA序列与欧洲意蜂序列有 73 1%同源性 .将中华蜜蜂蜂毒镇静肽成熟肽编码区与 3′非编码区部分克隆 ,构建了镇静肽与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX AcSecapin .将载体转化大肠杆菌BL2 1(DE3)进行融合表达 .表达产物与抗GST抗体在 2 9kD处有很强的交叉反应 .大肠杆菌超声破碎后的上清液用SDS PAGE检测到表达的蛋白多为可溶性融合蛋白 。
- 张素方施婉君张传溪程家安
- 关键词：中华蜜蜂蜂毒CDNA克隆
- 中华蜜蜂王浆多肽Apisimin基因转录、克隆与表达研究被引量：9
- 2006年
- 构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂头部cDNA文库并进行了测序,从8568个表达序列标签(expression sequencetag,EST)中获得96个Apisimin基因克隆,结果表明Apisimin基因是一个高丰度转录的基因。进一步对克隆分析表明该基因cDNA全长为379 nt,包含一个237 nt、可以编码78个氨基酸的ORF。推导的Apisimin蛋白N端含有一个由24个氨基酸残基组成的信号肽,后端为54残基、预计分子量为5.9kDa的成熟肽。该ORF与意大利蜜蜂和印度蜜蜂的Apisimin基因核苷酸同源性分别为100%和95%。将成熟肽编码区进行亚克隆,构建了Apisimin与谷胱甘肽转移酶融合表达的载体pGEX/apisimin,并将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达。SDS-PAGE和薄层扫描表明,表达的融合蛋白分子量为31 kDa,表达量占细菌总蛋白的22.1%,约50%是可溶性的。通过亲和柱进一步纯化了表达的融合蛋白。
- 邢丽苹沈立荣乌晓云施婉君高其康程家安张传溪
- 关键词：中华蜜蜂原核表达
- 2种蜜蜂和4种胡蜂蜂毒明肽基因比较(英文)被引量：5
- 2003年
- 从中华蜜蜂、意大利蜜蜂和大胡蜂、墨胸胡蜂、额斑黄胡蜂、亚非马蜂 6种蜂的雌成蜂毒腺中快速抽提总RNA ,用RT PCR方法分别扩增各得到大小约为 15 0bp的cDNA片段 ,进一步将这 6个片段克隆入pGEM Teasy载体 ,进行测序和序列分析。结果表明 ,所扩增得到的 6个片段长度均为 14 1bp ,均为编码蜂毒apamin前体的cDNA。序列比较发现 ,中华蜜蜂、大胡蜂、墨胸胡蜂和亚非马蜂序列完全一样 ,都与已发表意大利蜜蜂precursorofapamin核苷酸序列具有 95 %同源性 ,氨基酸序列具有 95 %的同源性。额斑黄胡蜂和意大利蜜蜂precursorofapamin核苷酸序列完全一样。本研究首次从中华蜜蜂与几种胡蜂中克隆到蜂毒precursorofapamin基因 ,并发现胡蜂科与蜜蜂科来源的蜂毒明肽序列是完全保守的。
- 张素方施婉君程家安张传溪
- 关键词：蜜蜂蜂毒同源性总RNART-PCR
- 意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2基因在杆状病毒-昆虫细胞系统中的表达被引量：5
- 2006年
- 利用BactoBac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA。提取其基因组DNA,用脂质体介导转染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,得到重组病毒rACV-Bac-AmPLA2。用此重组病毒感染Tn-5B1-4细胞,在细胞中表达AmPLA2。SDS-PAGE电泳结果显示,与6×HisTag融合表达的产物蛋白分子量约为18kD左右,表达量约占细胞总蛋白的5·35%。Westernblot印迹显示,融合表达产物能与意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清发生免疫反应。生物活性测定显示,含表达产物的细胞蛋白粗提物对底物蛋黄的酶活力约为6·13μmol·min-1·mg-1。
- 沈立荣邢丽苹张传溪程家安
- 关键词：意大利蜜蜂蜂毒
