国家教育部博士点基金(200805331090)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：中南大学安化县人民医院更多>>
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- 血管内皮生长因子小干扰核糖核酸联合双自杀基因抗胃癌作用的体外研究
- 2011年
- 目的探讨联合应用靶向血管内皮生长因子（VEGF）小于扰RNA（siRNA）与双自杀基因yCDglyTK对人胃癌细胞的体外杀伤作用。方法以磷酸钙纳米颗粒为载体介导空白质粒pcDNA3．1（-）null（空白质粒组）、靶向VEGF的干扰质粒pGenesil—shVEGF（干扰质粒组）、双自杀基因质粒pcDNA3．1（-）CV-yCDglyTK（双自杀基因组）及联合基因质粒pcDNA3．1（-）shVEGF—yCDglyTK（联合基因组）转染胃癌SGC7901细胞，未转染的胃癌细胞为空白对照组，经G418筛选稳定转染的胃癌细胞株，采用RT—PCR和免疫印迹法验证目的基因表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶（5-FC）后，通过四甲基偶氮唑盐（MTT）生长曲线、旁观者效应实验、Hoechst33258染色及流式细胞术，观察各组细胞的生物学特性变化、凋亡细胞形态及凋亡率。采用SPSS13．0统计学软件进行数据处理分析，组间多重比较采用LSD检验。结果成功建立4种转染不同质粒的胃癌细胞株，联合基因组及双自杀基因组均可检测到双自杀基因yCDglyTK的表达。MTT生长曲线显示5-FC作用24h后，与空白对照组和空白质粒组相比，干扰质粒组、双自杀基因组及联合基因组吸光度值明显降低（P〈0．01）。当稳定转染联合基因的SGC7901细胞占60％、80％和100％时，细胞相对存活率分别为13．09％±2．40％、9．74％±2．83％及5．68％±1．03％。荧光显微镜下见双自杀基因组及联合基因组大量细胞呈现凋亡形态改变。流式细胞检测结果示干扰质粒组、双自杀基因组以及联合基因组的凋亡率分别为16．40％±4．68％、57．63％±4．96％及69．07％±4．69％，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论采用靶向VEGF siRNA与双自杀基因联合治疗可有效杀伤胃癌SGC7901细胞，诱导凋亡是其杀伤瘤细胞的重要机制之一。
- 叶玲张桂英陈选民冷爱民彭杰李新华易红刘霆
- 关键词：基因疗法血管内皮生长因子
- 新型非病毒载体介导融合自杀基因靶向治疗胃癌的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK,并以新型磷酸钙纳米为基因治疗载体,研究该基因治疗体系在胃癌细胞中体外与体内专一性表达和杀伤作用。方法采用PCR、RT-PCR、融合PCR、酶切及连接等技术构建由CEA启动子、CMV增强子驱动的融合自杀基因pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK表达载体和融合自杀基因pcDNA3.1(-)CMVyCDglyTK表达载体。以磷酸钙纳米为载体分别转染CEA阳性的人胃癌细胞株SGC7901细胞和CEA阴性的Hela细胞.采用RT—PCR、免疫荧光法检测感染细胞中yCDglyTK基因的表达,并在体外观测其对胃癌细胞的作用。结果 SGC7901细胞在感染以上两种质粒表达载体后均有yCDglyTK mRNA表达,Hela细胞在转染纳米-pcDNA3.1(-)CMVyCDglyTK复合物后有yCDglyTK mRNA表达,对5-FC的敏感性增强,而在转染纳米-pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK复合物后则没有yCDglyTK mRNA表达,5-FC对其亦无杀伤作用。在体外实验中,经纳米转染pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK筛选的阳性克隆组细胞存活率为8.0%,纳米-pcDNA3.1(-)CVyCDglyTK转染组为25.4%,而对照组的细胞存活率为99.0%。结论本实验构建的由CEA启动子、CMV增强子驱动的融合自杀基因yCDglyTK靶向性基因治疗载体,能使融合自杀基因在CEA阳性的胃癌细胞中专一性表达,从而达到靶向治疗胃癌的目的 。
- 龚育凡刘霆陈选民张鸽文冷爱民彭杰张桂英
- 关键词：自杀基因胃癌
- 表达血管内皮生长因子-siRNA及双自杀基因yCDglyTK的联合基因载体构建及其应用研究被引量：2
- 2010年
- 构建了新型联合基因载体pcDNA3.1(-)VEGF-siRNA/yCDglyTK,研究其在人胃癌细胞系SGC7901细胞中的表达和杀伤作用.构建靶向血管内皮生长因子(VEGF)的干扰质粒pGenesil-VEGF-siRNA,采用PCR法从中扩增siRNA表达框(含U6启动子),亚克隆至双自杀基因载体pcDNA3.1(-)CV-yCDglyTK,构建联合基因质粒pcDNA3.1(-)VEGF-siRNA/yCDglyTK;通过酶切、测序等鉴定重组质粒;以磷酸钙纳米颗粒为载体,将干扰质粒、双自杀基因质粒及联合基因质粒转染SGC7901细胞,RT-PCR、Western-blot验证目的基因表达;MTT法检测转染细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性.结果表明:酶切及测序证实联合基因载体pcDNA3.1(-)VEGF-siRNA/yCDglyTK构建成功;SGC7901细胞转染联合基因质粒后,RT-PCR、Western-blot证实融合自杀基因表达,而VEGF基因表达下调;在前体药物5-FC作用下,转染联合基因组细胞存活率最低,与其他组比较有统计学差异.成功构建联合基因载体pcDNA3.1(-)VEGF-siRNA/yCDglyTK,初步验证靶向VEGF的RNA干扰与双自杀基因系统具有协同效应.
- 叶玲张桂英刘霆陈选民易红肖志强冷爱民彭杰
- 关键词：RNA干扰自杀基因联合基因治疗
