湖南省自然科学基金(05jj30174)
- 作品数：3 被引量：13H指数：3
- 相关作者：李强翔王敏钟惠菊李果盛杰更多>>
- 相关机构：中南大学娄底市中心医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- rAAV2／1-Acrp30病毒的纯化、扩增与活性检测被引量：3
- 2009年
- 目的将大鼠脂联素基因（Acrp30）克隆到腺相关病毒（AAV）载体中，经包装、纯化、扩增后获得rAAV2／1-Acrp30病毒，并进行活性检测。方法筛选阳性克隆获得pSNAV2．0-Acrp30，EcoRⅠ／SalⅠ双酶切鉴定，并行测序。转染BHK21细胞，G418筛选培养，获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc／△UL2感染，包装此细胞株并收获病毒载体rAAV2／1-Acrp30。行DNA斑点杂交法测定病毒滴度，SDS-PAGE分析判断病毒纯度，Western blot法检测目的蛋白脂联素在HEK293细胞中的表达活性。结果PCR电泳及酶切鉴定表明，pSNAV2．0-Acrp30重组成功，基因测序显示装入pSNAV2．0质粒中的Acrp30基因正确。rAAV2／1-Acrp30病毒的大致滴度为1．0×10^12μg／ml，HEK293细胞分泌蛋白浓度为50ng／ml，病毒载体纯度在95％以上。结论实验获得的脂联素病毒载体滴度高、感染性好，可试用于GK（Cow—Kakizaki）大鼠脂联素转基因治疗。
- 李强翔钟惠菊欧阳石谭华清王敏龙国祥李果
- 关键词：扩增活性检测
- 2型糖尿病大鼠主动脉硬化模型的构建被引量：8
- 2008年
- 目的:建立自发2型糖尿病大鼠主动脉硬化动物模型。方法:用2型糖尿病大鼠主动脉硬化动物模型。44只GK大鼠随机分为正常GK对照组、建模组,每组22只,正常Wistar大鼠组22只。期间观察大鼠血糖、尿糖及一般情况变化,8周后,测定各组动物空腹血糖、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein choleste rol,LDL-C),同时光学显微镜观察主动脉结构。结果:模型组大鼠的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇明显升高,出现主动脉肥大,病理显示明显的主动脉及动脉内膜病变。结论:通过高脂、一氧化氮合成酶抑制剂,可成功构建自发2型糖尿病大鼠主动脉病变,用作2型糖尿病大鼠大血管病变研究的动物模型。
- 钟惠菊李强翔张颖李果王敏盛杰王仕龙李琼
- 关键词：糖尿病动脉硬化高脂血症动物模型
- 重组腺相关病毒介导的大鼠脂联素载体的构建与鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:克隆大鼠脂联素基因(Acrp30),并对载有脂联素的重组腺相关病毒(AAV)载体进行构建及鉴定。方法:根据Acrp30的基因序列设计引物,上游引入EcoRⅠ位点,下游引入SalⅠ位点,以EX-A0242-M01-Acrp30为模板扩增目的基因。将Acrp30基因克隆入pUC19载体中,获得重组质粒pUC19-Acrp30。然后用EcoRⅠ与SalⅠ酶切pUC19-Acrp30及质粒pSNAV,回收酶切片段,T4DNA连接酶16℃过夜,转化大肠杆菌DH5α感受肽细胞,筛选阳性克隆获得pSNAV-Acrp30,EcoRⅠ/Sal双酶切鉴定,并行全基因测序。结果:PCR电泳及酶切鉴定表明,pSNAV-Acrp30重组成功,基因测序显示装入pSNAV质粒中的Acrp30基因正确。结论:脂联素病毒载体成功构建,可以满足脂联素基因研究和治疗的需要。
- 李强翔钟惠菊盛杰李果张颖申道君王敏
- 关键词：基因脂联素腺相关病毒
