广东省自然科学基金(06020005)
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
- 相关作者：李旺林曹杰杨平王辉孙政更多>>
- 相关机构：广州医学院广州市第一人民医院中山大学附属第六医院更多>>
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- FHIT基因在结直肠癌组织中的异常表达被引量：2
- 2006年
- 目的：探讨FHIT基因与结直肠癌发生之间的关系。方法：采用逆转录巢式酶链免疫反应，对41例结直肠癌组织及其配对的癌旁正常组织和25例良性腺瘤的FHIT基因进行检测。结果：在15例（38．9％）结直肠癌组织中检测到异常FHIT转录本，配对正常组织和良性腺瘤均未检测到异常转录本；测序证实异常转录本缺失3～5个FHIT外显子。异常FHIT转录本与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清癌胚抗原（CEA）的水平、组织学类型均无相关性（P〉0．05）；与分化程度、病理分期、淋巴转移、远处转移相关（P〈0．05）。结论：异常FHIT转录本的表达是结直肠癌发生中的常见事件，FHIT基因异常与结直肠癌的发生发展有关。
- 李旺林曹杰唐伟镖王辉陈熙文肖焕擎
- 关键词：结直肠癌FHIT基因基因表达
- FHIT mRNA在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡的相关性被引量：2
- 2007年
- 目的研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT mRNA)在结直肠癌组织中的表达以及与结直肠癌细胞凋亡的相关性。方法应用组织芯片技术制作正常直肠痔组织、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例石蜡标本,采用原位分子杂交检测FHIT mRNA,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)正常直肠组织平均FHIT mRNA阳性细胞率为45.67%±9.39%,腺瘤组织平均阳性细胞率为23.45%±5.06%,结直肠癌组织平均阳性细胞率为15.1%±4.11%,三者比较,差异有统计学意义(P<0.01),结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的FHIT mRNA阳性细胞率无统计学差异(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移的FHIT mRNA阳性细胞率有统计学差异(P<0.05);(2)FHIT mRNA表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)间存在显著性差异(P<0.01);(3)FHIT mRNA阳性细胞率高患者平均生存期为42.7个月,阳性细胞率低患者为29.8个月,前者的年累计生存率(88.10%,37/42)显著低于阳性细胞率低者(74.19%,23/31)(P<0.01)。结论FHIT基因可能参与结直肠癌细胞凋亡的调节,FHIT基因表达下降可能与结直肠癌的发生密切相关。
- 杨平曹杰王辉李旺林谭明华
- 关键词：结直肠癌脆性组氨酸三联体细胞凋亡
- 脆性组氨酸三联体基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：5
- 2010年
- 目的 探讨脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480（实验组）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞作为阴性对照,以正常SW480细胞作为空白对照.应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 转染96 h后,实验组和阴性对照组细胞生长抑制率分别为71.7%和16.9%,G0/G1细胞比例分别为（63.3±3.5）%和（50.6±2.1）%,细胞凋亡率分别为（40.5±3.1）%和（18.6±2.6）%,caspase-8 mRNA条带光密度积分值分别为107和41,caspase-8蛋白相对活性分别为0.43和0.25;上述差异均有统计学意义（P＜0.05）.当加入FHIT抑制剂后,caspase-8蛋白相对活性恢复至对照组水平（0.22）.结论 FHIT基因转染能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G0/G1期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达及活性上调有关.
- 曹杰梁立源杨平钱跃军王辉孙政李旺林谭明华
- 关键词：结肠肿瘤脆性组氨酸三联体基因结肠癌细胞株SW480
- 脆性组氨酸三联体基因转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响
- 2009年
- 目的观察脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响。方法将重组真核表达质粒pRc／CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480，筛选稳定转染的细胞并扩增培养，以转染了空质粒pRc／CMV2的SW480细胞（SW480-pRc／CMV2）和正常SW480细胞为对照。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测FHIT基因的mRNA转录水平。以奥沙利铂作用于3组细胞，用噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞的生长抑制率，用流式细胞仪检测奥沙利铂处理前后各组结肠癌细胞的凋亡率及细胞周期的变化。结果SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带，而对照组则无；经奥沙利铂处理后，转染FHIT基因的SW480细胞的凋亡水平与空质粒转染组及结肠癌细胞株组比较明显增高（第2、3、4天A值比较P〈0．05），并且FHIT基因与奥沙利铂有轻度的协同促进凋亡作用；同时奥沙利铂处理前后实验组结肠癌细胞的生长周期较对照组均出现了明显的G0／G1期阻滞，且细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性。结论外源性FHIT基因表达与奥沙利铂协同促进SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞，FHIT基因可增加结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性。
- 曹杰钱跃军杨平孙政李旺林王强谭明华陈伟陈新岐
- 关键词：结肠肿瘤奥沙利铂组氨酸基因转染
- TRAIL联合奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响被引量：3
- 2008年
- 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合奥沙利铂(oxaliplatin)对结肠癌细胞株SW480凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用MTT法分别检测TRAIL组、奥沙利铂组及联合组的细胞抑制率,AnnexinⅤ-FITC/PI染色,流式细胞仪检测SW480细胞的凋亡率。结果SW480细胞对TRAIL不敏感,对奥沙利铂相对敏感,TRAIL与亚毒性浓度的奥沙利铂联用对细胞的杀伤作用显著增强;亚毒性浓度的TRAIL、奥沙利铂及联合组作用SW480细胞24h的抑制率分别为8.62%,60.51%,81.28%;凋亡率分别为2.43%,11.76%,18.37%,流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。结论TRAIL能显著提高奥沙利铂对结肠癌细胞的杀伤作用,此协同作用主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现。
- 谭明华曹杰王辉杨平孙政李旺林
- 关键词：结肠肿瘤TRAIL奥沙利铂细胞凋亡
- FHIT基因转染对人结肠癌细胞系SW480增殖和侵袭力的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT对结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭活性的影响。方法将携有FHIT基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-FHIT体外转染SW480细胞(SW480-FHIT),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞(SW480-pRc/CMV2)和正常SW480细胞为对照,用RT-PCR检测FHIT的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和细胞侵袭实验分别检测FHIT基因转染前、后SW480细胞增殖和侵袭活性的变化。结果pRc/CMV2-FHIT的酶切鉴定证实含有目的基因FHIT;SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT实验结果显示重组质粒转染组SW480细胞的增殖明显受到抑制;Transwell体外侵袭实验显示转染pRc/CMV2-FHIT能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力(P<0.01)。结论应用基因转染技术重表达FHIT基因能有效抑制细胞的生长、增殖及侵袭活性,为以FHIT为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。
- 钱跃军曹杰杨平王辉孙政李旺林陈熙文王强
- 关键词：结肠肿瘤脆性组氨酸三联体基因
- 过氧化物酶体增殖因子活化受体γ在直肠癌组织中的表达及其意义
- 2007年
- 目的应用组织芯片技术探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPAR-γ）在直肠癌中的表达状况及其意义。方法利用组织芯片技术构建直肠癌组织芯片，采用免疫组织化学SP法检测80例直肠癌组织、16例良性腺瘤组织和16例正常直肠组织中PPAR-γ蛋白的表达并分析其与分化程度等临床和病理指标以及生存率的关系。结果80例直肠癌标本中PPAR-γ表达阳性57例（71．3％），16例良性腺瘤中4例（25．0％）、16例正常直肠标本中l例（6．3％），差异有统计学意义（x^2=29．76，P〈0．01）。直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的PPAR-γ表达程度差异无统计学意义（P〉0．05）；不同分化程度、病理分期、淋巴转移、3年生存率的PPAR-γ表达程度差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PPAR-γ蛋白在直肠癌组织中呈高表达，其表达与直肠癌临床病理特征和生物学行为有密切关系，检测PPAR-γ蛋白，对诊断直肠腺癌、判断其恶性程度及预后均有一定参考价值。
- 曹杰杨平汪建平王辉李瑜元杜洪唐伟镖夏杰李旺林
- 关键词：直肠肿瘤PPAR-Γ免疫组织化学
- 奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中caspase-8的活化被引量：15
- 2007年
- 目的探讨奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中半胱天冬酶亚类8(caspase-8)的变化。方法以不同浓度(0,0.03,4.0,100μg/ml)的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24,36,48h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8mRNA水平的改变,肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性。结果奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;奥沙利铂浓度为0,0.03,4.0,100μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.15±0.09)%、(0.43±0.17)%、(6.92±0.81)%、(11.76±1.25)%。用不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24h,caspase-8酶原的表达随药物浓度的增加而减少,caspase-8mRNA水平呈浓度依赖性的增加(P<0.01)。用4.0μg/ml奥沙利铂分别处理细胞0.5,2,6,12,24,36h,caspase-8活性于2h开始升高,12h达高峰(P<0.01);用不同浓度的奥沙利铂处理细胞12h,caspase-8活性呈浓度依赖性的升高(P<0.01)。结论奥沙利铂能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达上调有关。
- 杨平曹杰王辉孙政李旺林谭明华
- 关键词：奥沙利铂
- 人FHIT基因的克隆及其真核表达质粒的构建
- 2009年
- 目的克隆人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因,构建其真核表达质粒pRcCMV-FHIT。方法提取人外周血总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增人FHIT cDNA全长开放阅读框序列,PCR产物与中间载体pGEM-T连接后转化到大肠杆菌DH5α,然后对单菌落进行菌落PCR、限制性内切酶酶切鉴定和测序。用EcoR Ⅰ将目的片段切下。插入真核表达载体pRc/CMV2的相应位点,构建表达质粒pRc/CMV2-FHIT,将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α后进行菌落PCR、酶切鉴定。结果测序结果表明从正常人外周血单个核细胞中所获得的FHITcDNA含有781个碱基,与Genbank(NM_002012.1)序列完全一致。pRc/CMV2-FHIT经酶切鉴定与预期结果一致。结论成功构建重组真核表达质粒pRcCMV-FHIT,为进一步研究脂质体转染FHIT基因对结肠癌细胞株SW480凋亡作用的影响奠定基础。
- 杨平曹杰钱跃军彭燕孙政李旺林王强谭明华
- 关键词：脆性组氨酸三联体真核表达载体基因克隆
