国家自然科学基金(81271691)
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 相关作者：刁勇林俊生王晓黄晓平王馨更多>>
- 相关机构：华侨大学厦门市医药研究所教育部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目福建省科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NF-κB-p65信号分子参与重组蛋白药物Kallistatin抑制人脐静脉内皮细胞侵袭作用被引量：1
- 2015年
- 通过构建NF-κB-p65真核表达质粒,研究NF-κB-p65在重组Kallistatin(rh Kal)抑制内皮细胞侵袭中的作用及其分子机制。利用基因重组技术构建NF-κB-p65真核表达质粒载体,转染入HUVEC细胞,检测NF-κB-p65蛋白表达变化;Transwell小室观察重组Kallistatin对转染NF-κB-p65真核表达质粒HUVEC细胞侵袭的影响;Western blotting检测过表达p65对重组Kallistatin对内皮细胞侵袭相关蛋白抑制作用的影响。人脐静脉内皮细胞转染NF-κB-p65真核表达质粒载体后,细胞内p65蛋白表达明显升高;p65过表达可以逆转rh Kal对HUVEC细胞体外侵袭的抑制作用;过表达p65可以明显抵抗rh Kal对NF-κB信号通路下游相关靶基因的抑制作用。研究表明重组Kallistatin明显抑制HUVEC细胞体外侵袭,其分子机制可能与NF-κB信号通路相关。
- 黄恺飞
- 关键词：KALLISTATINHUVECNF-ΚB
- 下调间隙连接蛋白43表达对血管内皮细胞生物功能的影响被引量：3
- 2015年
- 间隙连接蛋白43(Cx43)在伤口愈合过程中发挥重要作用。血管生成也是创伤修复的一个重要特征,但目前很少有关Cx43对血管内皮细胞功能影响的研究。本文采用小干扰RNA(si RNA)特异性减少Cx43在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的表达,研究Cx43的表达下调对HUVEC细胞间信号传递、活力、增殖、迁移以及血管生成活性的影响。结果表明,经si RNA处理后,HUVEC内Cx43的表达降低约80%(P<0.05),HUVEC细胞间信号传递功能减少约65%(P<0.05),细胞活力、增殖和迁移活性显著降低(P<0.05)、血管生成速度减缓。推测在创伤早期维持Cx43的低水平表达,抑制渗透性和炎性等异常血管的生成速度,是保证伤口愈合过程中各关键步骤协调进行的前提条件之一。
- 张才臻母晓凤徐先祥邱飞林俊生刁勇
- 关键词：间隙连接蛋白43伤口愈合内皮细胞血管形成
- 嵌合抗原受体T细胞肿瘤免疫治疗的风险与对策被引量：1
- 2016年
- 近年来,嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)在肿瘤治疗领域表现出前所未有的疗效,对恶性B细胞肿瘤更是颠覆性突破。然而,临床研究发现,CAR-T输入体内后,经常因活性过度或活性失控而导致严重的毒副作用,如细胞因子风暴、靶点毒性和肿瘤溶解征等。构建CAR-T所采用的病毒载体也可能因基因组整合引起插入突变毒性。如何将CAR-T转化为安全有效的肿瘤治疗生物制品,且适用于更多类型的肿瘤,仍面临众多挑战。针对CAR-T治疗潜在的毒性,本文讨论了一系列可行的技术措施,包括使用自杀基因、组合靶向多抗原识别、正调控系统和非病毒载体等,希望为解决CAR-T制品的临床安全问题提供切实保障。
- 张苗苗贾东方刁勇
- 关键词：肿瘤免疫治疗基因治疗
- 重组腺相关病毒基因药物临床前评价方法的回顾与展望
- 2023年
- 重组腺相关病毒(rAAV)基因药物在临床应用过程中长期疗效不确定,甚至存在安全性风险,是制约其广泛应用的主要障碍.对现有rAAV基因药物临床前评价方法进行分析和梳理.结果表明:仅进行药效学评价不能揭示rAAV转导的细胞和分子机制,而基于转导过程分析的物理转导与功能转导评价存在结果不一致,不能反映rAAV转导的细胞异质性和靶细胞的空间分布特征等问题,难以准确预测rAAV基因药物的临床疗效和安全性,需要从单分子、单细胞水平开展rAAV载体胞内命运评价的新方法,以切实保障新型rAAV基因药物的临床有效性和安全性.
- 李佳莘黎玲黄艺峰刁勇
- 关键词：基因治疗临床前评价重组腺相关病毒
- 重组人VEGF165蛋白在毕赤酵母中高效表达与多克隆抗体的制备被引量：1
- 2014年
- 构建pPIC9K-VEGF165分泌型载体,线性化后电击转化至GS115(his4)中,经最小葡萄糖培养基(MD平板)筛选出阳性表达菌株并进行聚合酶链式反应(PCR)验证.菌株发酵上清液经Sephadex G-25,Heparin Sepharose FF和Sephacryl S-100层析介质分离纯化,目的蛋白纯度达到95%,相对分子质量约为24ku.结果表明:重组人VEGF165蛋白能诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖,提高HUVEC细胞的活性;重组人VEGF165蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测抗体效价达1:51 200.
- 王晓黄晓平周宇刁勇
- 关键词：多克隆抗体毕赤酵母
- 长效人促卵泡激素CHO细胞株的构建及其体内活性
- 2014年
- 促卵泡激素(FSH)是具有促进卵泡与睾丸发育作用的一种垂体糖蛋白激素。因其体内半衰期较短,临床上需要连续10 d以上每天注射,病人使用非常不方便。本文旨在通过提高糖基化程度,研制一种长效FSH。通过一段含有两个N-糖基化位点的连接序列,将人FSHα链与β链cDNA融合,并插入pcDNA3.1(+)表达载体。表达载体转染CHO-K1细胞后,通过G418筛选得到阳性单克隆细胞,并经PCR和Western blotting证实。该重组FSH为单链蛋白,分子量约为49 kDa。经无血清培养,工程细胞株培养上清液中重组FSH的表达量可达3 mg/L。单次注射该重组FSH能够促进大鼠卵巢发育与卵泡成熟,且药效与连续8次注射Folltropin-V的相近。实验结果显示,本研究已成功获得一种长效重组FSH。
- 黄晓平王晓杨春雪贾东方林俊生刁勇
- 关键词：促卵泡激素无血清培养
- 腺相关病毒的受体研究进展被引量：1
- 2017年
- 腺相关病毒的安全与长效特点,使其成为基因治疗中最有前景的病毒载体之一。虽然第一个以该病毒为载体的基因药物Glybera已在欧盟获批上市,然而如何进一步提高载体的靶向性与产品纯度仍是当务之急。腺相关病毒的受体是介导病毒与靶细胞结合的分子基础,其与病毒的结合具有很强的特异性,因此相关受体的研究不仅有助于改善基因治疗的靶向性,亦能为高纯度病毒的亲和纯化带来希望。目前已有11种腺相关病毒的受体被发现,本文就其受体的发现过程、结构特点、功能应用等方面展开综述,为今后相关研究提供一些思路。
- 王立振侯莹成志云郭思佳许瑞安唐明青
- 关键词：受体特异性靶向治疗
- Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用
- 2016年
- 多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.
- 饶华春滕继云刁勇宋沁馨王立强杨会勇周国华
- 关键词：焦磷酸测序禽流感病毒
- 质粒介导的组织激肽释放酶结合蛋白在肺癌相关细胞内的表达及其生物学活性研究被引量：4
- 2013年
- 研究裸质粒能否转染肺癌相关细胞,且有效表达具有血管形成抑制活性的组织激肽释放酶结合蛋白(Kal),以及Kal的表达对体内外肺癌及相关细胞的生物学影响。采用Lipofectamine 2000介导质粒对肺癌相关细胞的转染,ELISA法检测Kal浓度,并考察Kal对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。瘤内直接注射质粒后,观察NCI-H446皮下移植瘤内CD34、Ki-67和E-钙黏蛋白水平变化,以及肿瘤细胞凋亡的情况。转染质粒后,所有受试细胞均可表达Kal,其中HUVEC的增殖和迁移受到抑制;3种肺癌细胞NCI-H446、NCI-H460和A549的增殖被不同程度地抑制,并出现凋亡现象。体内研究显示,Kal可以抑制新生血管生成及肿瘤细胞增殖,肿瘤生长速度显著降低。因此,可介导Kal表达的裸质粒可以作为肺癌治疗的候选药物。
- 汪宁卿邹金刁勇
- 关键词：新生血管形成肺癌
- 重组人组织激肽释放酶结合蛋白的高密度毕赤酵母表达、纯化和生物学活性被引量：4
- 2013年
- 研究重组人组织激肽释放酶结合蛋白(rHKal)的高密度毕赤酵母表达、纯化以及生物学活性。以质粒pPIC9-Kal/GS115(His4)转化毕赤酵母细胞,在7.5 L培养罐内高密度细胞发酵,以1%～2%的甲醇诱导表达rHKal。发酵上清液经疏水层析、亲和层析和凝胶层析分离rHKal。通过MTT及小管形成实验评价rHKal对HUVEC的生物学活性。收获发酵上清液内rHKal的表达水平为50 mg.L 1,纯化后rHKal原液的纯度达98%以上。rHKal对HUVEC的增殖抑制活性呈剂量依赖性,但对其小管形成抑制作用的量效关系呈U型曲线。rHKal具有新生血管形成抑制活性,本研究为rHKal的生产提供了有效方法。
- 张倩邢永梅刘嘉刁勇
- 关键词：高密度发酵纯化生物学活性
