国家自然科学基金(39570544)
- 作品数：7 被引量：90H指数：5
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- 伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)某些生物学特性研究被引量：17
- 2000年
- 本试验测定了伪狂犬病ｇＥ－／ｇＩ－／ ＴＫ－／ ＬａｃＺ＋基因缺失疫苗株（ＳＡ２１５）的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和免疫期等生物学特性。试验结果显示，该疫苗株能在Ｖｅｒｏ细胞上适应生长，并形成典型的蚀斑。其对１日龄仔猪、怀孕母猪、牛、羊以及家兔安全，无不良接种反应，接种动物不向体外散毒。ＳＡ２１５疫苗接种猪能抵御高剂量（１０７ＰＦＵ）Ｆａ株强毒感染，攻毒后试验猪的发热期、增重受阻天数、散毒滴度均低于Ｂａｒｔｈａ株疫苗接种猪，远远低于对照组猪。ＳＡ２１５接种猪能维持长时间的高水平中和抗体滴度，免疫期可达半年以上。试验结果表明，ＳＡ２１５株是一株安全、免疫原性好、免疫期长的疫苗株。
- 陈陆郭万柱徐志文徐静王小玉
- 关键词：伪狂犬病生物学特性免疫原性
- 伪狂犬病病毒Fa株gp63(gI)基因核苷酸序列测定及分析被引量：4
- 2001年
- 对我国最早分离的伪狂犬病病毒 ( pseudorabies virus,PRV) Fa株糖蛋白 gp6 3( g I)基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列作了测定与分析。完整的 gp6 3( g I)结构基因从起始密码子 ATG到终止密码子 TGA共有1 0 50个核苷酸残基 ,编码由 34 9个氨基酸残基构成的多肽链。 4种核苷酸残基的构成比分别为 :G35.9% ,A1 1 .33% ,T1 1 .81 % ,C4 0 .95% ,G+C含量达 76 .85%。PRV Fa株 gp6 3基因核苷酸序列与 Nice株的相比 ,两者同源性达 98.1 3% ,仅存在 3个核苷酸残基的缺失变异 ;氨基酸推导序列分析表明 ,糖蛋白 gp6 3具有典型膜蛋白特征 ,与 Nice株相比 ,同源性为 97.4 2 %。 gp6 3基因起始密码子由 3个连续的 ATG组成 。
- 周煜郭万柱汪铭书颜其贵
- 关键词：伪狂犬病病毒核苷酸序列重组质粒
- 伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析被引量：2
- 2000年
- 根据已发表的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）的基因序列，在ＰＲＶｇＥ基因阅读框外的上、下分别设计一对引物Ｐ１和Ｐ２，在引物的 ５’端分别加上 ＫｐｎＩ和 ＥｃｏＲＩ位点。以 ＰＲＶ Ｆａ株的 ＤＮＡ为模板成功地扩增得到一条长的 １．７ｋｂ的片段，经酶切鉴定，初步确定为ｇＥ基因。将此ＰＣＲ产物经ＫｐｎＩ、ＥｃｏＲＩ消化后与同样酶切的ＰＵＣ１８质粒连接、转化，得到了明显大于载体的重组质粒ＰＰｇＥ。重组质粒ＰＰｇＥ经酶切鉴定确定为含有ＰＲＶ 的 ｇＥ基因，测序ＰｐｇＥ得到完整的ｇＥ基因片段，并与４株不同来源的毒株进行了比较分析。在对 ＰＲＶ Ｆａ（来自福建）、Ｒｉｃｅ（来自俄国）、ＴＮＬ（来自台湾）、Ｅａ（来自武汉）、ＳＨ（来自上海）的ｇＥ同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达９７％，这一定程度上也体现ｇＥ基因组的保守性。分析还表明Ｆａ与ＴＮＬ同源。同时９９％的高同源性也显示 Ｆａ、Ｅａ、ＳＨ可能是同一毒株。本实验认为 ｇＥ序列在 １０４０－ １４１０碱基的高同源性区域作为ＰＣＲ检测或核酸探针是非常有用的。
- 王勤郭万柱徐志文汪铭书王小玉
- 关键词：伪狂犬病毒GE基因PCR扩增克隆
- 伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析被引量：14
- 2003年
- 根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经酶切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。
- 王勤郭万柱徐志文汪铭书王小玉
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因克隆PCR扩增
- 猪伪狂犬病基因缺失活疫苗(SA215)免疫母猪后仔猪母源抗体消长规律及首免日龄被引量：19
- 2004年
- 在研究猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA 2 15 )免疫接种母猪所产仔猪母源抗体消长规律 ,并绘制其消长曲线的基础上 ,确定了仔猪首免日龄。对免疫母猪所产仔猪于不同日龄进行抗体检测结果表明 ,全部仔猪均获得了高水平母源抗体 ,7日龄高达 2 8.56 ,6 0日龄降至 2 2 .56 ;随着日龄增长 ,抗体水平呈逐渐降低趋势 ,2次大幅下降出现在 14～ 2 1日龄、30～ 6 0日龄。对免疫母猪所产仔猪分别于不同日龄免疫接种 1头份剂量疫苗 (SA2 15 ) ,7d后采血进行抗体检测 ,结果表明 ,7日龄、14日龄、2 1日龄免疫接种仔猪均未引起明显抗体水平升高 ,反而较同期仔猪略有降低 ,30日龄和 6 0日龄免疫接种仔猪则出现了抗体水平的升高 ,其中以 6 0日龄仔猪升高幅度为大。结合母源抗体消长规律 ,确定猪伪狂犬病基因缺失活疫苗 (SA2 15 )免疫母猪所产仔猪的首免日龄为
- 朱玲郭万柱徐志文
- 关键词：伪狂犬病母源抗体免疫
- 伪狂犬病基因缺失疫苗株(SA215)生物学特性研究被引量：9
- 2005年
- 测定了伪狂犬病gE-/gI-/ TK-/ LacZ+基因缺失疫苗株(SA215)的致细胞病变效应、安全性、免疫原性和接种动物抗体消长规律等生物学特性。试验结果显示,该疫苗株能在 Vero细胞上适应生长,并形成典型的蚀斑。其对1日龄仔猪、妊娠母猪、牛、羊以及家兔安全,无不良接种反应,接种动物不向外散毒。SA215 疫苗接种猪能抵御高剂量(107 PFU) Fa株强毒感染,攻毒后试验猪的发热期、增重受阻天数、散毒滴度略低于 Bartha株疫苗接种猪,低于对照组猪。SA215接种猪能维持长时间的高水平中和抗体滴度。试验结果表明,SA215 株是一株安全、免疫原性好的疫苗株。
- 陈陆郭万柱徐志文王小玉王印
- 关键词：基因缺失疫苗伪狂犬病生物学特性研究强毒感染疫苗株
- 新型伪狂犬病病毒基因缺失株的构建及生物学特性研究(初报)被引量：36
- 2000年
- 以伪狂犬病病毒Fa株为起始材料 ,构建的 pp6 3LacZ转移载体质粒与PRVFaDNA经磷酸钙转染 ,在MDBK细胞内同源重组获得PRVFagE-/gI-/LacZ基因缺失株。以PDTK3 - 6 ,5 - 6TK缺失质粒与上述基因缺失株在TK-143细胞内同源重组 ,获得PRV -SA2 15等三基因缺失株。经核酸杂交证实构建是成功的。生物学特性观察显示 ,该基因缺失株对多种动物安全 ,具有良好的免疫原性 ,有望成为一株优秀的PRV疫苗候选株。
- 郭万柱徐志文王小玉程陆王印汪铭书
- 关键词：伪狂犬病病毒基因缺失疫苗生物学特性
