湖南省自然科学基金(09JJ5031)
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 针对不同靶位点的siRNA对HepG2人肝肿瘤细胞株FOXO3a表达的抑制作用
- 2013年
- 目的探讨针对FOXO3a的小干扰RNA(siRNA)对HepG2 FOXO3a的表达、细胞增殖的抑制及细胞凋亡的作用。方法利用RNA干扰(RNAi)效应设计针对FOXO3a的不同siRNA,构建表达载体质粒并转染HepG2细胞系。RT-PCR和Western Blot分别检测FOXO3a mRNA及蛋白的表达,细胞生长实验和流式细胞观察转染前后细胞增殖及细胞凋亡的变化。另设一无意义RNA载体质粒为阴性对照。结果P2、P3实验组,细胞核绿色荧光明显减淡,有细胞核的排出。特异性siRNA对FOXO3a mRNA及蛋白的表达具有抑制作用(P<0.05),细胞凋亡减少,增殖明显增加(P<0.05)。结论抑制FOXO3a基因的表达能够减少HepG2细胞的凋亡,并增加细胞的增殖。FOXO3a有望成为治疗肝癌的有效的靶基因。
- 熊清芳杨永峰谢玉桃黄平钟艳丹冯晓宁
- 关键词：FOXO3A肝肿瘤RNA干扰
- 自由脂肪酸依赖CASPASE3诱导人肝肿瘤细胞株HepG2凋亡
- 2009年
- 目的利用体外脂肪变性的模型，探讨不同自由脂肪酸（FFA）的细胞毒性和诱导细胞凋亡的机制。方法分别采用DAPI棱染剂和借助半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）荧光分析试剂盒检测人肝肿瘤细胞株HepG2在不同脂肪酸在不同时间后（12h、24h、48h）TG和细胞凋亡率和Caspase3活性的变化，以及Z-VAD-FMK在不同时间对棕榈酸（PA）诱导的细胞凋亡和Caspase3的活性的抑制作用。结果亚油酸（LA）组、油酸（OA）组在各时间段的TG的积累高于PA组，但凋亡率和Caspase3活性均低于PA组，并呈时间依赖性。加入Z—VAD-FMK后PA导致的凋亡率和Caspase3活性均显著性降低。结论棕桐酸以Caspase3蛋白酶依赖的方式诱导脂凋亡。油酸和亚油酸通过形成甘油三酯。防止肝细胞脂凋亡。
- 熊清芳谢玉桃谭德明候环荣
- 非酒精性脂肪性肝病FOXO1的表达及意义
- 2010年
- 目的研究非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者分叉头框家族转录因子1(forkhead box-containing protein O subfamily-1,FOXO1)表达的变化,以及转录因子和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)之间的关系。同时探讨FOXO1在NAFLD发病机制中的作用。方法对临床与病理确诊的NAFLD患者,用免疫组化法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝组织FOXO1的表达以及FOXO1、PEPCK和G6PC的mRNA水平。结果非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)组、非酒精性单纯性脂肪肝(simple steatosls,SS)组的胰岛素抵抗指数(insulin resistance index.IR)显著高于健康对照组(P<0.001);NASH组的血清丙氨酸转氨酶(AI.T)显著高于SS组、对照组(P<0.001或P<0.05),而SS组与对照组之差异无显著性(P>0.05);3组的FOXO1阳性细胞数、FOXO1 mRNA、PEPCK mRNA、GBPC mRNA随病情的加重逐渐增加,组间差异有显著性(P<0.001)。FOXO1 mRNA水平与IR、炎症评分和脂肪变性评分、PEPCK mRNA和(G6PC mRNA表达正相关。结论不能根据ALT正常与否决定是否肝穿刺活检。NASH患者的FOXO1表达和活性增强,FOXO1转录因子调节PEPCK和G6PC的表达,并与胰岛素抵抗有关。推测脂肪变性和炎性反应参与了FOXO1的调节。
- 熊清芳谢玉桃谭德明候环荣
- 关键词：脂肪肝非酒精性脂肪性肝病
