浙江省自然科学基金(LY12H19004)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 家用微波炉对弓形虫PRU株包囊的杀伤作用
- 2013年
- 目的:探寻微波炉杀灭弓形虫包囊的最佳条件。方法:将含有等量弓形虫包囊的小鼠脑组织匀浆液利用微波炉的不同功率、不同时间处理后灌饲小鼠,于感染后第42天检测小鼠脑组织包囊数、血清IgG抗体效价和SAG1基因,以评价经微波处理后的包囊是否仍具有感染性。结果:镜检出未处理组与微波炉低温处理1 min组的包囊数分别为(833.33±274.03)个、(655.56±363.79)个,其余各组均未查出包囊。ELISA法检查结果显示未处理组与微波炉低温处理1 min组呈阳性,其余各组均为阴性。PCR技术检测结果证实未处理组与低温处理1 min组均扩增出弓形虫SAG1基因片段,但中温与高温各组亦有部分样品扩增出目的基因片段。结论:低温处理1 min不能有效杀灭弓形虫包囊,其他条件能否有效杀灭弓形虫包囊还有待进一步验证。
- 陈丹黄飞飞曹杰黄少宇章梦奇谭峰
- 关键词：刚地弓形虫包囊微波炉杀伤作用
- 刚地弓形虫自噬相关蛋白8(TgAtg8)多克隆抗体制备及初步应用被引量：1
- 2014年
- 目的制备、评价特异性抗刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)自噬相关蛋白8(autophagy protein 8,TgAtg8)多克隆抗体。方法生物信息学方法分析弓形虫基因组中自噬相关蛋白的基因序列和氨基酸序列。以刚地弓形虫RH株速殖子cDNA为模板,PCR扩增TgAtg8编码基因,克隆入pGEX-6p-1载体,构建pGEX-6p-1-TgAtg8重组质粒,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签亲和层析法纯化表达产物。以纯化的TgAtg8蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,获得特异性抗TgAtg8多克隆抗体。以制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western blotting分析和间接免疫荧光(IFA)检测。结果双酶切和测序结果证实,原核表达质粒pGEX-6p-1-TgAtg8构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果表明,TgAtg8蛋白在E.coli BL21中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约40 000,与理论值相近。Western blotting结果证实,所制备的多克隆抗体能特异性识别融合蛋白TgAtg8和虫株体内天然的TgAtg8蛋白。IFA实验表明,TgAtg8均匀分布于虫体胞浆中,但在自噬诱导培养后,TgAtg8逐渐聚集成颗粒状。结论制备的特异性抗TgAtg8多克隆抗体可用于检测虫体内TgAtg8蛋白在弓形虫自噬形成过程中的变化情况。
- 谭峰华倩倩李星潘李相志梁韶晖
- 关键词：刚地弓形虫细胞自噬多克隆抗体
