国家自然科学基金(39900082)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- ZNF268基因启动子区的克隆及功能分析(英文)
- 2004年
- 锌指基因家族是人体中最大的基因家族 ,它参与细胞分化、胚胎发育 ,并与许多疾病的发生相关。人类ZNF2 68基因是一个在人胚肝中特异性表达的C2 H2 型锌指基因 ,并可能在人的早期肝脏发育中起重要作用。为了研究ZNF2 68基因表达调控的分子机制 ,以正常人总基因组为模板PCR扩增了ZNF2 68基因的 5′调控区 2 53 3bp片段 ,并将此片段插入启动子缺失的EGFP(增强型绿色荧光蛋白 )载体构建了重组质粒pZNF2 68 EGFP。用脂质体介导的方法将pZNF2 68 EGFP转染NIH 3T3、COS7、K562、HeLa 4个细胞系。在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光的表达 ,发现在每个细胞系中 ,转染了重组质粒pZNF2 68 EGFP的细胞均有荧光表达 ,但其起始表达时间均晚于转染了阳性对照质粒pEGFP C1的细胞且荧光较弱。这表明ZNF2 68基因的 5′调控区 2 5kb片段是一个有功能的启动子 ,但该启动子与CMV启动子相比活性较弱。选择易培养的HeLa细胞系用于缺失研究。将一系列 5′端 -2 456bp至-2 0bp缺失、3′端均为 + 77bp的缺失片段插入启动子缺失的CAT(氯酶素酰胺转移酶 )载体构建了一系列重组质粒。将这些重组质粒转染HeLa细胞系进行缺失分析 ,并通过共转染pCMV Sport βgal质粒校正转染效率。结果表明 ,ZNF2 68启动子 -2 456～ -163
- 彭晓孙燕刘辉苟德明李文鑫
- 关键词：启动子克隆转录调控
- 一种新的人端粒相关锌指蛋白cDNA的克隆及鉴定被引量：1
- 2000年
- 为了从早期胚胎寻找与发育分化有关的新基因,本文构建了3周龄人胚cDNA文库,并应用EST技术对该文库中随机挑选的47个低丰度克隆进行测序,结果发现了一个与人亚端粒DNA和锌指基因同源的cDNA克隆(L30),该基因长约3.8kb,5′端序列有明显的阅读框架(ORF),3′端序列有加尾信号(AAUAAA)和有39个A组成的Poly(A)尾巴;通过Northern杂交确认在早期人胚胎中有表达,应用地高辛染色体原位杂交技术将其定位于人第12号染色体长臂端部。
- 苟德明李文鑫冯耀东夏总平高立蒋达和
- 关键词：人早期胚胎锌指蛋白EST基因克隆
