上海市科学技术委员会资助项目(0752nm019)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：中国科学院兰州大学更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种基于酶标纳米金探针的蛋白质检测方法被引量：3
- 2009年
- 目的研究酶标纳米金探针的制备条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测。方法首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的纳米金探针(AuNPprobes)进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液发生酶促显色反应,最后在450nm处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量。结果通过一系列优化实验建立检测体系,具体为:纳米金探针重悬液确定为50mmolTris(pH7.8,1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15%Tween20);检测体系中纳米金的最适加入量为3μl;2步孵育最适时间依次为1h和45min。使用该方法检测并绘制癌胚抗原(CEA)标准曲线,表明CEA浓度在250pg/ml^25ng/ml区间时线性关系良好,R2为0.991。通过灵敏度实验表明该检测体系的最低检测灵敏度为25pg/ml,而传统ELISA方法的检测灵敏度仅为1.65ng/ml。结论酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术。
- 钟晓琴刘美英黄云艳贾春平金庆辉赵建龙李凤民
- 关键词：辣根过氧化物酶免疫酶技术分光光度法
