国家自然科学基金(30972505)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
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- 纳米二氧化硅对HaCaT细胞谷胱甘肽还原酶表达及活力的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨经不同粒径纳米二氧化硅处理后,HaCaT细胞内谷胱甘肽还原酶(GR)的表达及其活力的变化。方法将对数生长期HaCaT细胞经15μg/ml的15、30、100nm纳米二氧化硅处理24h后,采用实时荧光定量PCR(RT-Q-PCR)检测GR基因mRNA的表达水平,采用Westernblotting检测GR蛋白的表达水平,采用试剂盒检测GR活力变化。结果不同粒径纳米二氧化硅对GR基因的mRNA水平具有明显影响,纳米二氧化硅粒径越小,mRNA表达水平越低,但均低于对照组;GR蛋白表达量随纳米二氧化硅粒径增大而增大,且15、30nm纳米二氧化硅抑制GR表达,100nm纳米二氧化硅促进GR表达;GR活力随纳米二氧化硅粒径的增大而升高。结论纳米二氧化硅可能通过影响GR的表达及酶活力的变化促进氧化应激反应。
- 张兵杨细飞王晓梅刘建军何浩伟龚春梅蒋英芝郑波庄志雄
- 关键词：纳米二氧化硅谷胱甘肽还原酶氧化应激
- 聚ADP核糖聚合酶1与DNA甲基化的关系及其可能的机制
- 2012年
- 聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶[poly（ADP—ribose）polymerase，PARP]是一类存在于多数真核细胞中的蛋白质翻译后修饰酶，主要存在于细胞核内，少量存在于细胞浆内，具有蛋白修饰和核苷酸聚合作用。尽管目前PARP家族至少有18名成员，但研究表明，PARP-1活力占所有PARP蛋白活力的90％以上。PARP-1在绝大多数组织中为组成型表达，但受到DNA链断裂等损伤激活后，其活力会立即上升500倍以上。
- 龚春梅庄志雄
- 关键词：DNA甲基化聚合酶核糖PARP-1ADPDNA链断裂组成型表达
- Methylation of PARP-1 promoter involved in the regulation of nano-SiO2-induced decrease of PARP-1 mRNA expression
- Nano silicon dioxide(nano-SiO) is becoming more and more widely applied in the fields of industry. The potenti...
- Chunmei GongGonghua TaoLinqing YangJianjun LiuQingcheng LiuWenjie LiZhixiong Zhuang
- 文献传递
- 短期暴露于纳米SiO2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10μg/ml组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用高效毛细管电泳(HPCE)定量分析纳米SiO2处理细胞24h后,基因组DNA总体甲基化的变化,用Q-PCR和Western Blot方法检测甲基化相关蛋白mRNA和蛋白的表达变化,并用DNA甲基化转移酶活性试剂盒检测DNA甲基化转移酶的活性。结果 HPCE定量分析结果显示纳米SiO2可引起HaCaT细胞总体甲基化程度降低,呈剂量依赖性关系;与正常细胞相比,微米SiO2以及2.5、5和10μg/ml纳米SiO2组分别降低37.8%、43.9%、54.9%和52.8%,差异有显著性(P<0.05);对照组5-aza-dC处理后使HaCaT细胞甲基化程度减少27.3%。各组酶的蛋白表达与mRNA表达水平及DNMTs活性变化具有相同的变化趋势,经纳米SiO2处理的HaCaT细胞,DNMT1、DNMT3a及MBD2表达随着纳米SiO2剂量的上升而下降,DAC组表达水平最低。结论纳米SiO2能引起HaCaT细胞整体基因组DNA甲基化水平降低,可能与DNA甲基化转移酶的酶活性降低有关。
- 龚春梅杨淋清陶功华刘庆成刘建军庄志雄
- 关键词：DNA甲基化纳米SIO2
- 纳米SiO_2对HaCaT细胞基因组DNA总体甲基化水平的影响被引量：1
- 2012年
- 目的检测纳米SiO2(nano-SiO2)暴露的体外培养的人皮肤表皮细胞(HaCaT)基因组DNA总体甲基化水平及DNA甲基转移酶DNMT1的表达改变。方法应用5-甲基胞嘧啶免疫荧光法和流式细胞定量分析法检测nano-SiO2(0、2.5、5和10μg/ml)和10μg/ml微米级二氧化硅(micro-SiO2)以及DAC组(10μg/ml nano-SiO2+3μm DAC)暴露后细胞基因组DNA整体甲基化变化趋势,以Real-time Q-PCR和Western blot方法检测DNMT1的mRNA和蛋白的表达变化。结果与对照细胞组相比,5-甲基胞嘧啶免疫荧光强度逐渐降低,在nano-SiO2致HaCaT细胞损伤的过程中,DNA的总体甲基化程度有随nano-SiO2浓度升高而降低的趋势,同剂量的纳米暴露组与溶剂对照组及微米级对照组相比具有更低的基因组DNA甲基化水平。流式细胞定量分析实验结果显示,溶剂对照组的平均荧光荧光强度为153.43,不同浓度的nano-SiO2处理细胞24 h(2.5,5和10μg/ml)后,其平均荧光强度分别为76.32,53.26和55.16,溶剂对照组和微米对照组(Micro-SiO2)的甲基化程度差异没有统计学意义。DNMT1的mRNA和蛋白表达水平一致,在细胞暴露于nano-SiO2过程中,DNMT1表达呈下降趋势。结论本试验条件下,基因组DNA甲基化水平的降低可能与DNMT1水平降低有关。
- 龚春梅杨淋清陶功华刘庆成刘建军庄志雄
- 关键词：HACATDNA甲基化DNMT1
- 短期暴露于纳米SiO2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响
- 目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/LDNA甲基化...
- 龚春梅杨淋清陶功华刘庆成刘建军庄志雄
- 关键词：DNA甲基化纳米SIO2
- PARP-1基因过表达的HaCaT细胞生物学性状分析
- 2012年
- [目的]探讨人皮肤表皮细胞(HaCaT)聚-ADP核糖聚合酶-1基因(PARP-1)过表达后的生物学性状变化。[方法]设试验组、空载体对照组、正常HaCaT对照组,运用真核表达载体使PARP-1基因在HaCaT中过表达,在光学显微镜下观察转染重组子的试验组细胞、转染空质粒的对照组细胞及正常对照组细胞的形态学特征。绘制细胞生长曲线,并运用流式细胞技术分析细胞周期。以苯并芘(BaP)恶性转化的细胞作为阳性对照,采用软琼脂克隆形成试验对细胞的恶性程度进行鉴定。[结果]光镜下试验组细胞与空载体组细胞及正常对照组细胞相比,除体积稍有缩小外,其他形态学特征没有明显变化。3组细胞的生长曲线均呈相似的S型,但转染重组子细胞的生长速度加快。试验组、空载体组及正常细胞组的细胞周期分布为G1期(44.3%、78.1%、76.4%)、G2期(3.6%、13.3%、12.2%)和S期(52.1%、8.6%、11.4%)。正常对照细胞和空载体组分布相近,试验组S期明显增多;试验组细胞未见在双层软琼脂糖中生长出细胞集落,而阳性对照组细胞集落明显。[结论]PARP-1基因过表达后可以改变HaCaT细胞的生长速度,但并不影响细胞的恶性程度。
- 龚春梅杨淋清陶功华吴德生刘建军李文杰庄志雄
- 关键词：HACAT细胞
