国家高技术研究发展计划(2006AA02Z110)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：扈荣良唐青黄莹严家新陶小燕更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心军事医学科学院武汉生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 负链不分节段RNA病毒反向遗传系统中通用型真核表达载体的构建
- 2010年
- 本研究选择pVAX1作为供体载体,通过分子克隆方法,分别用人工合成的锤头型核酶、丁型肝炎核酶序列(用于获得转录后病毒基因组RNA的精确末端)和含有9个常用限制性酶切位点的linker序列(用于病毒基因组插入的多克隆酶切位点)取代真核表达载体pVAX1的多克隆酶切位点,将其改造成负链不分节段RNA病毒反向遗传系统的通用型表达载体。通过酶切鉴定和序列测定表明,pVAX1载体中插入的核酶及linker序列正确无误,并将CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA插入pVAX-R中,通过与辅助质粒的共转染成功拯救CTN株狂犬病毒,证明通用型真核表达载体构建成功,为快速建立负链不分节段RNA病毒反向遗传系统奠定基础。
- 黄莹唐青张守峰扈荣良
- 关键词：真核表达载体
- 狂犬病毒街毒株全长基因cDNA克隆的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 利用分子克隆的方法,将狂犬病毒街毒株的全基因组分为4个片段按照它们基因组上的顺序克隆到真核表达载体pVAX1上,并将G-L间隔区的非编码区替换为表达绿色荧光蛋白(GFP)的核苷酸,构建出表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组狂犬病毒HN10株全长基因组cDNA真核表达质粒,同时,在全长cDNA的两侧嵌入锤头状核酶(HamRz)和丁型肝炎病毒核酶(HdvRz)的序列,并置于CMV启动子的控制下,为下一步拯救出该嵌合病毒提供了可直接使用的全长cDNA真核表达质粒。
- 明平刚黄莹唐青杜加亮陶小燕严家新扈荣良
- 关键词：狂犬病毒全长CDNA克隆
- HEP-Flury株病毒辅助质粒包装CTN株病毒基因组拯救狂犬病病毒
- 2009年
- 目的以CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒（pCTN-GFP）和HEP-Flury株病毒N、P、L辅助质粒共转染拯救具有活性的CTN株重组狂犬病病毒（CTN-GFP）。方法将CTN株狂犬病病毒全长基因组分4段进行扩增，体外连接扩增片段并克隆人表达载体中，构建CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒，基因组ψ基因被标识基因GFP取代，通过与HEP-Flury株病毒N、P、L3个辅助质粒共转染BHK-21细胞，拯救能够稳定表达GFP的重组病毒CTN-GFP。结果成功扩增全长基因组的4个基因片段，并将其克隆入表达载体，构建了CTN株狂犬病病毒全长基因组cDNA重组质粒pCTN-GFP，经酶切鉴定和序列测定证明pCTN-GFP为正确克隆，可直接用于病毒拯救。将pCTN-GFP与HEP-Flury株病毒辅助质粒共转染BHK-21细胞4d后，成功拯救出CTN株重组狂犬病病毒，重组病毒能够表达标识基因GFP，荧光显微镜下可直接观察到标识基因GFP的表达，设计跨GFP和L基因的特性引物对重组病毒进行RT-PCR检测，结果证明此病毒是从克隆的质粒中拯救的重组病毒。结论HEP-Flury株病毒的结构蛋白能够包装并转录CTN株病毒的基因组RNA。
- 黄莹唐青扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒结构蛋白病毒拯救
