国家高技术研究发展计划(2006AA02Z113)
- 作品数：7 被引量：42H指数：3
- 相关作者：潘登科冯冲刘晓龙川冯书堂更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所中国农业大学甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国农业科学院院长基金更多>>
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- 运输温度与时间对猪孤雌胚胎发育的影响被引量：2
- 2009年
- [目的]比较不同运输温度与时间对猪孤雌胚胎发育的影响,确立猪克隆胚胎的最佳运输温度与时间。[方法]研究不同温度(37、38、39℃)对孤雌胚胎卵裂率、囊胚率的影响;不同时间(2、3、4 h)对孤雌胚胎卵裂率、囊胚率的影响。[结果]培养3 h后,在39℃运输时,孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率与37℃、38℃的卵裂率和囊胚率相比,差异显著(P<0.05);培养3 h后,孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率与培养2 h、4 h的卵裂率和囊胚率相比,差异显著(P<0.05)。[结论]在39℃,3 h内进行孤雌胚胎的运输,能获得较高的卵裂率、囊胚率。
- 张卫红闫军冯冲龙川张兆旺潘登科
- 关键词：运输时间孤雌胚胎卵裂率囊胚率
- 猪前脂肪细胞为核供体生产表达绿色荧光蛋白的转基因克隆胚胎被引量：2
- 2007年
- 分离培养了成年猪前脂肪原代细胞,并对前脂肪细胞向成熟脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法鉴定了脂肪细胞。利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染前脂肪细胞,经过G418筛选获得了阳性细胞株。然后分别以前脂肪细胞、转绿色荧光蛋白(GFP)前脂肪细胞及胎儿成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植,结果表明:前脂肪细胞(8.8%)和胎儿成纤维细胞(8.3%)的囊胚发育率无显差异著(P>0.05);与前脂肪细胞相比,转基因前脂肪细胞的囊胚发育率降低,但差异不显著(3.7%vs.8.8%,P>0.05)。前脂肪细胞为核供体生产转基因克隆胚胎,能够获得转基因囊胚。虽然囊胚发育率不高,但为生产脂肪细胞转基因克隆猪奠定了基础。
- 潘登科万荣刘吉牟玉莲张莉李奎冯书堂
- 关键词：前脂肪细胞绿色荧光蛋白
- 实验用小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞为核供体生产转基因克隆胚胎
- 2007年
- 目的比较不同类型体细胞对生产转基因克隆胚胎效率的影响。方法利用脂质体介导的方法将质粒pEGFP-N1转染到五指山小型猪胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞,经过G418筛选后均获得了阳性细胞株。然后分别以两种类型转基因细胞以及未转基因细胞为核供体进行体细胞核移植,比较不同类型供体细胞克隆胚胎的囊胚发育率。结果胎儿成纤维细胞和骨髓间充质细胞克隆胚的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,8.3%vs.7.1%);转基因胎儿成纤维细胞(9.6%)和转基因骨髓间充质细胞(9.9%)克隆胚胎的囊胚发育率差异不显著(P>0.05,9.6%vs.9.9%);每一种类型供体细胞转基因与否对克隆胚的囊胚发育率无影响(P>0.05)。结论通过体细胞核移植技术,小型猪骨髓间充质细胞与胎儿成纤维细胞均可有效地生产转基因囊胚。
- 潘登科潘求真牟玉莲万荣刘吉郑茂恩刘晓张莉冯书堂
- 关键词：小型猪骨髓间充质细胞体细胞核移植绿色荧光蛋白
- 曲古抑菌素(Trichostatin)A对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育能力的影响被引量：5
- 2008年
- 曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化抑制剂,用TSA处理鼠核移植胚胎可显著提高胚胎的囊胚率。检验TSA对猪卵母细胞体外成熟以及孤雌胚胎发育的影响。在猪卵母细胞体外成熟液及胚胎培养液中添加TSA,比较不同浓度TSA对卵母细胞成熟的影响,不同浓度TSA对孤雌胚胎发育能力的影响以及TSA处理不同时间对孤雌胚胎发育能力的影响。结果发现:(1)5 nmol/L TSA处理对卵母细胞体外核成熟无显著影响,却显著提高了卵母细胞孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(P<0.05);(2)50 nmol/L TSA处理显著提高了孤雌胚胎的卵裂率及囊胚率(P<0.05);(3)50 nmol/L TSA处理24 h能显著提高胚胎的卵裂率及囊胚率(P<0.05,82.1%±2.6%和37.4%±3.1%)。结果表明TSA对猪卵母细胞的体外成熟及孤雌胚胎发育具有显著的促进作用。5 nmol/L的添加量对卵母细胞的体外胞质成熟具有促进作用;胚胎培养基中添加50 nmol/L TSA处理24 h能提高孤雌胚胎的发育能力。
- 刘晓潘登科陈扣扣冯冲张卫红郑茂恩龙川冯书堂杨博辉
- 关键词：TSA卵母细胞体外成熟孤雌胚胎
- 电融合仪BLS在猪卵母细胞孤雌激活中的应用被引量：1
- 2007年
- 目的建立并优化BLS细胞融合仪在猪孤雌胚体外生产中的使用条件,同时为克隆胚的生产提供数据参考。方法以体外成熟的猪卵母细胞为研究对象,研究了不同的电场强度、脉冲时程和脉冲次数对猪卵母细胞电激活效果及其对孤雌胚发育率的影响。结果电激参数(1.2 kV/cm、100μs、2次脉冲)能够得到较高的卵裂率和囊胚率(70%、30%左右);BLS细胞融合仪是一种经济高效的胚胎激活仪。
- 刘晓张庆桥潘登科陈扣扣张卫红冯冲冯书堂
- 关键词：孤雌激活
- 体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪被引量：26
- 2009年
- 转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用．本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪．将sFat—1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞，获得转基因阳性细胞克隆，然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎，胚胎体外培养或进行移植．先后移植了1889枚1-4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内，28天B超检测9头受体母猪妊娠（90％），7头妊娠足月（70％）分娩产下21头仔猪，体细胞克隆猪的效率为1．1％（出生仔猪／移植胚胎）．体细胞克隆猪效率的提高，主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进，比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响．当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段，能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率（100％），而排卵后移植妊娠足月率为0％．对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测，证实13头为转基因猪，转基因阳性率为87％．RT—PCR检测13头转基因猪，12头表达sFat—1基因．以上结果表明，利用优化的体细胞转基因结合核移植技术，可以成功地批量生产转sFat-1基因的克隆猪．
- 潘登科张莉周艳荣冯冲龙川刘晓董恩球王树臣万荣张健陈红星
- 关键词：体细胞核移植转基因猪
- 体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)的猪胚胎被引量：7
- 2009年
- 本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C.Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)转染至大白猪胎儿成纤维细胞。采用600μg.mL-1G418药物浓度,经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定,获得11个转基因阳性细胞克隆。以体外成熟42 h的猪卵母细胞与转基因细胞构建重构胚。经体外培养后观察,转基因克隆胚胎与非转基因胚胎的卵裂率(76.6%±4.1%vs.81.6%±3.1%)和囊胚率(10%±1.97%vs.9.7%±1.4%)均无显著差异(P>0.05)。采用放线菌酮进行化学二次激活时,胚胎的囊胚率显著高于采用电二次激活胚胎(20.6%±0.89%vs.10%±1.97%,P<0.05),但二者的卵裂率并无显著差异(72.4%±4.96%vs.76.6%±4.1%,P>0.05)。研究表明,通过脂质体介导的方法,可以获得转sFat-1基因大白猪胎儿成纤维细胞系;以该细胞系为核供体构建的转基因克隆胚胎与非转基因克隆胚胎的发育能力无显著差异;二次激活采用放线菌酮进行化学激活能够显著提高胚胎的囊胚发育率。
- 冯冲周艳荣龙川刘晓陈红星潘登科杨博辉
- 关键词：胎儿成纤维细胞体细胞核移植
