国家自然科学基金(30972509)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
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- 铅对斑马鱼胚胎发育过程Fgf3基因表达的影响
- 2012年
- 目的研究铅暴露对斑马鱼胚胎发育过程Fgf3基因表达的影响，以探讨铅的胚胎发育毒性机制。方法野生型AB品系斑马鱼胚胎暴露醋酸铅浓度分别为0、0．1、0．5、2．5和12．5μmol／L，提取各组8、12、16、24、36、48及72hpf（受精后小时）斑马鱼胚胎总RNA，实时荧光PCR检测Fgf3基因定量表达；制备Fgf3基因RNA探针，整胚原位杂交方法检测Fgf3基因空间性表达。结果在胚胎发育全程中，各组Fgf3表达高峰均在12hpf（与其他时段比较，P〈0．01），随着铅暴露浓度的升高，Fgf3 mRNA平均表达量也逐渐增加，以对照组堙移mRNA表达量为基准，各铅暴露组（0．1、0．5、2．5和12．5μmol／L）相对表达量分别为1．02±0．24、1．05±0．26、1．22±0．46和1．25±0．38，其中2．5和12．5μmol/L铅浓度组Fgf3表达量均显著高于对照组（P〈0．05）；整胚原位杂交结果显示Fgf3主要表达部位是胚胎早期的头、尾部和胚胎中后期的中脑、鳍芽及咽弓部，在胚胎发育至12hpf时Fgf3阳性杂交信号区域及强度最为明显，但各铅暴露组与对照比较，在Fgf3表达部位及强度上未见明显差异。结论胚胎期铅暴露能引起Fgf3表达水平上调，改变了胚胎发育过程Fgf3正常表达规律，其可能与铅胚胎发育毒性有关。
- 贾聪聪林林刘妮娅张小晶张佳佳杨新军黄陈平
- 关键词：铅胚胎发育基因表达
- 铅对斑马鱼胚胎发育的毒性作用被引量：5
- 2012年
- 目的探讨铅对斑马鱼胚胎发育的毒性作用。方法野生型AB品系斑马鱼胚胎,自受精后1h(1hpf)起,分别用醋酸铅质量浓度为0.1、0.5、2.5、12.5μmol/L胚胎培养液染毒至胚胎孵出或死亡,每组胚胎50枚,相差显微镜下观察胚胎发育全程并记录毒性反应,于4、8、16、24、48、72hpf进行胚胎活体摄片,以不含铅培养液孵养的胚胎作为对照。另取各组36 hpf胚胎,电镜下观察间脑神经细胞超微结构。结果铅暴露组胚胎死亡率明显升高(P<0.05),在胚胎发育早期有1个高峰,而且随着铅暴露浓度增高,胚胎死亡率总体呈上升趋势(P<0.01);铅暴露胚胎发育异常主要见于胚胎发育早期,多表现为胚胎发育迟缓;铅暴露胚胎在发育过程中出现少数畸形,但无统计学意义;除12.5μmol/L铅暴露组外,其他铅暴露组胚胎的平均孵出时间较对照组滞后(P<0.05);电镜观察显示,铅暴露可引起胚胎神经细胞核固缩,细胞水肿,细胞器结构受损。结论铅对斑马鱼胚胎发育有明显的毒性作用,在胚胎发育早期尤为敏感;即使较低水平的铅暴露,仍可引起胚胎神经细胞的损害。
- 张小晶贾聪聪林林郭小娟方周溪白承连黄陈平
- 关键词：铅胚胎发育毒性活体观察斑马鱼
- 斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因的表达被引量：5
- 2012年
- 为了解斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因的时空性表达情况,并探讨其对胚胎发育的调控作用,该研究分别提取2,4,8,12,24,36,48,72 hpf斑马鱼胚胎的总RNA,经逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR检测FGF3基因mRNA表达量;扩增FGF3基因特异片段,构建pGEM-T/FGF3基因片段重组质粒,经克隆及测序验证后,合成地高辛标记的反义RNA探针,以整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎FGF3基因的空间性表达。结果显示:FGF3基因在2 hpf胚胎就有表达,并持续至胚胎孵化,12 hpf胚胎FGF3表达量达到高峰(P<0.01);胚胎发育过程中FGF3表达部位以头、尾、咽弓为主。由此得出结论 ,FGF3主要在胚胎发育早期表达,其表达可能与胚胎脑、眼、耳、咽弓及尾部器官的发育调控有关。
- 贾聪聪张小晶黄陈平林林赵淑江靳大庆
- 关键词：斑马鱼胚胎发育整体原位杂交
- 胚胎期铅暴露对斑马鱼胚胎及幼鱼NMDA受体mRNA表达的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:了解胚胎期铅暴露对斑马鱼胚胎及幼鱼N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体mRNA表达的影响。方法:野生型AB品系斑马鱼胚胎醋酸铅暴露浓度分别为0、0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L,提取各组受精后24、48、72、96和120 h(hpf)斑马鱼胚胎或幼鱼总RNA,实时定量PCR检测NMDA受体亚基NR1.1、NR1.2和NR2B的mRNA表达量。结果:(1)对照组NR1.1和NR1.2及NR2B表达量在胚胎发育过程中逐渐升高,在孵化期(72 hpf)表达量增加明显,在幼鱼早期(96 hpf)时达到高峰(与24 hpf时比较,P<0.01),在120 hpf时仍处于较高水平。(2)随着铅暴露浓度增高,NR1.1表达量增加并有高峰前移的趋势,2.5μmol/L和12.5μmol/L铅暴露组NR1.1表达高峰期在72 hpf,并且显著高于对照组(P<0.05);铅暴露组NR1.2和NR2B动态表达也呈类似规律,但NR1.2表达高峰期呈平台化趋势,横跨72 hpf至120 hpf阶段,NR2B表达高峰期出现在72 hpf和120 hpf阶段。(3)NR1.1、NR1.2及NR2B mRNA表达量之间Pearson相关系数值分别为rNR1.1-1.2=0.681、rNR1.1-2B=0.637和rNR1.2-2B=0.514,均有统计学意义(P<0.01)。结论:在斑马鱼胚胎发育过程NR1.1、NR1.2及NR2B mRNA表达水平逐渐升高,在幼鱼早期达到高峰;胚胎和幼鱼阶段NR1.1、NR1.2及NR2B之间mRNA表达水平存在关联;铅有上调NR1.1、NR1.2和NR2B mRNA表达作用并使表达峰期前移,改变了正常的NMDA受体表达规律。
- 张小晶林林张佳佳贾聪聪何金彩黄陈平
- 关键词：斑马鱼胚胎
- 胚胎期铅暴露对斑马鱼行为发育的影响被引量：3
- 2017年
- 目的了解胚胎期铅暴露对斑马鱼胚胎及幼鱼行为的影响,以探讨铅的神经行为发育毒性。方法斑马鱼胚胎期暴露醋酸铅浓度分别为0、0.1、0.5、2.5和12.5μmol/L,观察24 hpf胚胎的自主运动,分析测试5 dpf幼鱼对光周期的刺激反应。结果各组胚胎自主运动观察结果依次为(5.22±1.02)、(6.25±1.46)、(6.12±0.92)、(5.46±0.92)、(4.62±0.81)次/min,与对照组比较,随着铅暴露浓度增加,胚胎自主运动次数呈高至低变化趋势,多组间差异有统计学意义(P<0.05)。幼鱼活力也随着铅暴露浓度增加呈现由高至低变化,明亮期12.5μmol/L铅浓度组及黑暗期2.5μmol/L铅浓度组平均活力均较对照组显著降低(P<0.05);12.5μmol/L铅浓度组亮转暗前后1 min活力改变量较对照组显著增高(P<0.05),并且暗刺激后活力动态变化呈易激惹、易衰退状态。结论胚胎期铅暴露能影响斑马鱼胚胎自主运动及幼鱼活力状态,低浓度铅暴露以兴奋作用为主,高浓度铅暴露则呈现抑制作用为主,但其内在机制尚有待进一步研究。
- 李瑞张小晶贾聪聪林林黄陈平
- 关键词：铅斑马鱼
- 斑马鱼胚胎发育过程中miR-9、miR-219及Dicer基因的时序性表达
- 2017年
- 目的探讨斑马鱼胚胎发育过程中miR-9、miR-219及Dicer基因时序性表达规律。方法取正常发育至受精后4、8、12、16、20、24、36、48和72 h(hpf)斑马鱼胚胎各约40枚,用Trizol法分别提取总RNA,茎环法反转录为c DNA,用Real-time PCR检测胚胎miR-9、miR-219及Dicer表达量。结果 miR-9、miR-219及Dicer表达水平在胚胎发育过程中呈现峰谷变化,不同发育阶段之间总的差异有统计学意义(P<0.05)。与胚胎发育全程的基因平均表达水平相比,miR-9在8 hpf之前表达量较低(P<0.05),36 hpf后表达量持续增高,48 hpf和72 hpf时表达量显著高于平均水平(P<0.01)。miR-219在8 hpf之前表达量也处于较低水平(P<0.05),20 hpf后迅速增高,24hpf时达到峰值,并持续到48 hpf(P<0.01)。Dicer在胚胎早期(4 hpf)就有明显表达(P<0.05),随后表达水平迅速下降,16 hpf时达到低点(P<0.05),然后逐渐回升,直至胚胎末期。结论斑马鱼胚胎发育过程miR-9、miR-219及Dicer时序性表达有一定规律,miR-9主要在胚胎后期表达,miR-219主要在胚胎中期表达,Dicer主要在胚胎早期表达,其次在胚胎后期,提示miR-9、miR-219及Dicer参与胚胎发育调控过程。
- 刘妮娅韩东笑崔浩亮李瑞林林黄陈平
- 关键词：DICER实时定量聚合酶链反应斑马鱼
- 斑马鱼胚胎发育过程成纤维细胞生长因子受体基因时序性表达被引量：1
- 2014年
- 目的探讨斑马鱼胚胎发育过程成纤维细胞生长因子(FGF)受体基因时序性表达规律。方法分别提取发育至4、6、10、12、18、24、48及72hpf斑马鱼胚胎总RNA并反转录为cDNA,用实时定量PCR方法检测FGF受体基因(fgfrs)mRNA的相对表达量。结果斑马鱼胚胎发育过程fgfrs mRNA动态表达水平有明显峰谷变化(P<0.01),胚胎fgfrs开始表达阶段依次为fgfr1a与fgfr1b(囊胚期)、fgfr4(原肠胚初期)、fgfr2(原肠胚期)及fgfr3(原肠胚后期),其表达高峰期分别在原肠胚期、原肠胚后期、体节期及胚胎发育中后期。旁系同源基因fgfr1a与fgfr1b动态表达趋势相似(r=0.830,P<0.05)。fgfr1a与fgfr3、fgfr1b与fgfr4、fgfr2与fgfr3 mRNA表达量之间相关分析也有意义(r值分别为-0.726,0.821及0.772,P<0.05)。结论斑马鱼胚胎发育过程fgfrs时序性表达有一定规律性,fgfr1、fgfr4主要参与胚胎早期发育调控,fgfr2、fgfr3主要参与胚胎中、后期发育调控。fgfr1a与fgfr1b共表达使其调控作用具有冗余能力。fgfr1和fgfr3之间在表达上可能存在相互制约关系。
- 张佳佳林林刘妮娅邬红梅何金彩黄陈平
- 关键词：成纤维细胞生长因子受体实时定量聚合酶链反应斑马鱼
