中国博士后科学基金(2005038005)
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 相关作者：顾大勇鲁卫平周元国王华张雅鸥更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院清华大学深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学交通运输工程更多>>
- 肽核酸探针技术及其在微生物检测中的应用被引量：2
- 2008年
- 肽核酸(Peptide Nucleic Acid,PNA)是近十几年发展起来的以中性酰胺键为骨架的脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid,DNA)类似物,它能够与DNA和RNA特异性地结合从而可以制备PNA探针。与DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加且能在低盐浓度下进行杂交。因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度。PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用。
- 赵欣李震顾大勇
- 关键词：核酸微生物学检测
- 纳米金基因芯片结合通用引物1次PCR法同时检测多个病原菌的研究被引量：7
- 2008年
- 目的基于基因分型技术构建通用引物1次PCR法的样品制备技术,并结合纳米金基因芯片检测系统实现1次对多个病原菌的检测分析。方法针对rDNA保守序列设计通用引物,实现1次PCR完成对各靶细菌ISR序列的扩增;设计针对各靶细菌的特异探针,构建纳米金新型基因芯片,并用芯片进行实际检测。结果设计的通用引物可实现对12种待检靶细菌的正确扩增;选用的各探针特异性强、可靠性好;芯片具有较好的灵敏度、特异性及可靠性;检测敏感性达到50 fmol/L;临床检测显示本方法准确可靠。结论与多重PCR样品制备法芯片比较,本芯片检测的步骤和复杂性大为减低,且有较好的检测性能,可用于各靶病原菌的检测。
- 顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金基因芯片病原菌16S-23S
- 潜艇舱室密闭环境中微生物检测的基因芯片技术的研究进展被引量：1
- 2008年
- 为了探索研究用于潜艇舱室大气环境中致病微生物的在线检测技术理论,结合目前国际先进的基因芯片技术,设计利用肽核酸作为探针来进行在线检测;理论证明,肽核酸探针与DNA探针相比,其杂交的稳定性和特异性增加,且能在低盐浓度下进行杂交,因此它能够大大提高微生物学检测和医疗诊断的效率和灵敏度。PNA独特的生化属性已逐渐为世人所瞩目,PNA探针技术也得到了迅速发展,尤其是其在微生物检测领域中的应用,在结合潜艇舱室密闭环境的主要特点和舱室内致病微生物的来源和危害的基础上,发展以肽核酸为探针的基因芯片技术。
- 赵欣李震顾大勇王为宗
- 关键词：表面等离子体共振肽核酸
- 表面等离子体共振芯片检测系统快速检测淋病奈瑟氏菌的研究
- 2007年
- 目的应用表面等离子体共振(SPR)芯片检测系统进行淋病奈瑟氏菌的快速检测。方法制备淋病奈瑟氏菌的SPR响应型基因芯片,并对最适的探针自组装时间,探针浓度,以及SPR检测的灵敏度,特异性等指标进行测定;对临床样品进行实际检测并与临床常规方法比较。结果当固定探针浓度为1500nM,自组装时间为4.5h时,构建的芯片具有较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10fM;临床检测结果与常规经典鉴定方法相比结果一致。结论本芯片检测系统具有良好的检测性能,检测方法准确可靠。
- 顾大勇石磊禹华伟梁冰鲁卫平周元国徐云庆史蕾张雅鸥
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片淋病奈瑟氏菌
- 纳米金新型基因芯片检测系统结合限制性酶切非PCR法同时检测多种病原性微生物的研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究将纳米金新型基因芯片检测系统与限制性酶切非PCR法结合以实现同时对多种病原性微生物进行检测的方法。方法以幽门螺杆菌、肺炎支原体、沙眼衣原体、白色念珠菌、解脲脲原体、EB病毒作为检测目标,选择HhaⅠ内切酶作为工具酶。对所有待检样本核酸进行HhaⅠ酶切,对酶切产物进行同聚A加尾处理,并结合纳米金新型芯片检测系统,分别与特异性探针及通用探针进行两次杂交以完成对目标微生物的检测。通过对168份临床样品的检测,考察新构建芯片的检测结果与荧光定量PCR检测结果的符合率;对构建芯片的稳定性及检测灵敏度进行测试。结果新构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术实现了对选定目标的检测。对168份临床样品的检测结果显示,该芯片检测与荧光定量PCR检测的结果有150例完全相符,符合率为89.2%;进一步芯片检测性能实验结果表明,该芯片检测稳定性为100%,检测敏感性为50pmol/L。结论本研究构建的基于限制性酶切非PCR法的纳米金芯片技术可以同时实现对细菌、真菌、支原体、衣原体及病毒等微生物的检测,适用性广且对大幅度提高检测通量有积极意义。
- 梁冰顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金寡核苷酸序列分析病原微生物
- 以纳米金为报告系统的病原体快速检测基因芯片的研制被引量：6
- 2007年
- 目的结合纳米放大芯片检测的专利技术,设计并制作适用于病原体快速检测的实用型基因芯片,以实现对临床常见感染病原体的快速、准确地检测和鉴定。方法分别针对各待检靶病原体特异性基因片段设计探针、构建芯片,并以纳米金为报告分子标志靶序列,通过杂交后与银的反应使得信号被放大,形成裸眼可见的褐色颗粒,从而实现芯片的检测。结果设计的探针具有很好的特异性、准确性和杂交条件的同一性;适当增加纳米金/核酸的比例能够减少标志时间,而轻微振荡明显加快标志反应的速度;在45℃杂交温度下,杂交反应盐离子浓度为0.8mol/L,杂交反应时间为8h,最后经过严格条件漂洗可以获得较佳的杂交效率,而轻微的旋转振荡则可以显著增加杂交的效率;37℃,3min×3的反应方式,可以获得较好的银染效果;本芯片系统具有较好的检测敏感性,可达到100fmol/L;与临床常规检测方法比,本芯片检测方法简单快捷,检测结果裸眼清晰可见,背景低。结论本芯片检测方法敏感性高,特异性好,操作方法简单,无需特殊设备,所设计的检测内容达到实用化水平,具有较好的临床应用前景。
- 顾大勇鲁卫平王华周元国
- 关键词：纳米金银基因芯片病原体
- 表面等离子体共振型基因芯片系统对临床常见病原微生物的检测被引量：1
- 2008年
- 目的研究表面等离子体共振（SPR）系统在临床病原微生物的基因芯片检测中的应用。方法对27份临床样本进行SPR的芯片检测。其中血液阳性标本8份，脓液阳性标本3份，白带阳性标本及生殖道脓液标本9份，活组织检查阳性标本1份，活组织检查阴性标本6份。采用生物信息学方法设计各靶病原体特异的引物和探针，并分别利用PCR技术以及酶标化学发光芯片技术对设计的引物和探针进行验证；制备的SPR响应型基因芯片，结合SPR芯片系统对临床标本进行检测。结果设计的引物和探针经验证均具有良好的特异性和准确性，能够顺利实施对各靶病原体的有效扩增和对芯片的检测应用；新构建的基因芯片结合SPR芯片系统对临床26份标本的检测结果与临床常规检测结果一致。结论SPR检测系统具有良好的检测性能，检测方法准确可靠，可应用于对临床病原微生物的芯片检测。
- 田玉峰顾大勇禹华伟梁冰张雅鸥
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片病原微生物
- 纳米金基因芯片表面原子排列构象的形貌研究
- 2009年
- 我们利用基于扫描隧道显微镜的原子力显微镜对纳米金基因芯片在不同检测阶段表面原子排列构象的变化状况进行扫描研究。结果显示芯片片基(醛基玻片)表面原子呈现规律的多孔状排列;结合探针后,多孔状的规律排列改变,呈现参差不齐;与目标核酸杂交后,表面原子又呈现出相对规整的、密集交叉平行的条索状排列。但银染后导致表面原子出现较大的高突起的聚团块状结构,排列严重的参差不齐。从这些结果我们可以直观地感知到芯片表面探针结合、核酸杂交、银染显色的过程和差异,也可以从微观层面上对相关的实验进行验证。
- 顾大勇梁冰禹华伟鲁卫平周元国张雅鸥
- 关键词：纳米金基因芯片原子力显微镜扫描隧道显微镜
- 基于表面等离子体共振检测原理的基因芯片的构建被引量：3
- 2008年
- 我们首先采用Frens法制备纳米金胶体液,然后以氯金酸/羟胺法铺制二维纳米金单膜层,进行单分子自组装层技术(Self-assembled monolayer,SAM)固定探针,从而制备出具有表面等离子体共振(Surface plasmon reso-nance,SPR)响应的基因检测芯片,并进一步对芯片的自组装时间、探针浓度、灵敏度、特异性等指标进行优化验证。结果表明2.5 nm胶体金所铺金膜芯片具有较好的SPR响应特性,且当固定探针浓度为1 500 nmol/L,自组装时间为4.5 h时,可以获得较好的SPR检测效率,能够准确识别碱基的错配,其检测灵敏度大约为10 fmol/L,可应用于SPR传感器的检测中。
- 顾大勇石磊禹华伟王华鲁卫平梁冰周元国张雅鸥
- 关键词：表面等离子体共振基因芯片
