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国家自然科学基金(30800971)
作品数:
2
被引量:1
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相关作者:
陈可
刘湘
苏怀彬
黄爱龙
胡接力
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2012
1篇
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硫酸类肝素-3-0-磺基转移酶B1对乙型肝炎病毒复制的影响
2011年
目的研究硫酸类肝素3O磺基转移酶Bl(HS3ST381)对HBV复制的影响。方法以HepG2细胞为阴性对照组,转染2.5ugpCH9HBV(HBV表达质粒)的HepG2细胞为阳性对照组;转染了2.5μgpCH9HBV、1.5μgpcDNA3.1(HS3ST3Bl表达质粒载体)和2.0μgpTZU6+1(干扰质粒构建载体)的HepG2细胞为对照组;转染了2.5μgpCH9HBV、1.5μgpCDNA3.1-HS3ST381和2.0μgpTZU6+1的HepG2细胞为实验组A;转染了2.5μgDCH9-HBV、1.5ugpCDNA3.1-HS3ST3Bl和2.0μgpshll26(HS3ST3Bl的干扰质粒)的HepG2细胞为干扰组A。转染了2.5μgpCH9-HBV和2.0μgpTzu6+1的HepG2细胞为实验组B;转染了2.5μgpCH9HBV和2.0μgpshll26的HepG2为干扰组B。采用Southernblot和实时聚合酶链式反应技术检测HS3ST381共转染处理及未共转染处理的细胞内HBV复制中间体含量和病毒总RNA表达量,用双荧光素酶报告系统检测这种变化与HBV启动子[核心启动子(cp)、x蛋白启动子(xp)、包膜蛋白启动子l(spl)、包膜蛋白启动子2(sp2)]活性的关系。采用SPSSl7.0统计软件进行单因素方差分析,P〈0.05为差异有统计学意义。结果以对照组HBVDNA含量为l,实验组A、干扰组AHBVDNA含量分别为10%±2%、31%±4%,对照组与实验组A比较,F=20.8,p=0.034,差异有统计学意义。实验组A与干扰组A比较,F=24.9,p=0.021,差异有统计学意义。与干扰组B比较,试验组BHBVDNA水平上升了130%±11%。在HBV稳定表达细胞株中转染pCDNA3.1-HS3ST381分别为0.5、1.0、1.5ug时,HBVDNA水平分别是对照组的90.0%±3.1%、82.0%±2.3%、21.0%±1.9%,与对照组比较,F值分别为22.7、20.3、26.5,尸值分别为0.029、0.041、0.015,差异均有统计学意义。实验组AHBV总RNA量为对照组总RNA量的17.0%±2.7%,两组比较,F=25.6,p=0.018,差异有统计学意义。干扰组AHBV总RNA的量恢复到对照组的74�
苏怀彬
罗强
张祯祯
胡接力
黄爱龙
关键词:
肝炎病毒
乙型
利用绿色荧光蛋白进行microRNAs靶点分析的研究
被引量:1
2012年
目的利用绿色荧光蛋白作为报告基因,研究微RNAs(microRNAs)与靶点相互作用。方法在pEGFP-C1下游非编码区插入含miR-122a作用靶序列HCV 5′UTR,构建pEGFP-UTR载体,将miR-122a与pEGFP-UTR共转染HEK293细胞,观察增强绿色荧光蛋白EGFP表达强度变化,并与双荧光素酶报告系统比对。结果 miR-122a能明显抑制含UTR靶序列的EGFP蛋白表达,与双荧光素酶报告系统相比,绿色荧光蛋白在检测灵敏度上与双荧光素酶相接近。结论利用绿色荧光蛋白作为报告基因,能够清楚直观反映miRNAs与靶点作用情况。
陈可
刘湘
关键词:
微RNAS
靶点
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