国家自然科学基金(39770314)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：第三军医大学川北医学院附属医院第三军医大学大坪医院更多>>
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- bcl-2基因对血管内皮细胞保护作用的研究被引量：2
- 2004年
- 目的探讨转染bcl-2基因对血管内皮细胞的保护作用。方法1.重组真核细胞表达载体:将含编码人bcl-2 cDNA完整开放阅读框的bcl-2 cDNA重组至逆转录病毒载体pLXSN的EcoR Ⅰ位点上,用脂质体包裹重组质粒导入PA317细胞株,并经G418筛选阳性克隆;收集含重组病毒的上清液。2.用含高滴度重组病毒的上清液感染内皮细胞;用PCR法检测转染细胞bcl-2基因和Neo基因,用免疫组织化学方法检测转染细胞bcl-2蛋白表达以证实转染成功。设pLXSN／s-bcl-2、pLXSN、未转染三组。3.观察各组血管内皮细胞在正常培养条件下的生长特征情况,以及在无血清、10％CO2以及10-7M的AngⅡ等不同刺激因素下各组培养血管内皮细胞的生存能力的变化。结果1.成功的重组含bcl-2的真核细胞表达质粒,并经碱基自动测序检测未发现重组的bcl-2基因有碱基丢失或错义配对;2.经PCR检测bcl-2片段和Neo基因片段以及免疫组织化学方法检测转染细胞的bcl-2蛋白表达证实转染成功并获得表达。3.在正常培养条件下各组血管内皮细胞间的形态和生存率无显著差异(p>0.05);4.转染bcl-2基因组血管内皮细胞在无血清、10％CO2以及10-7MAngⅡ等刺激因素下的存活率明显高于转染pLXSN组和未转染组(P<0.05)。结论转染bcl-2基因能显著提高血管内皮细胞的抗损伤能力。
- 胡厚祥祝善俊祝之明杨永健李治明陈光辉王海燕
- 关键词：BCL-2基因转染
- 转染血管紧张素Ⅱ受体反义核苷酸对心肌成纤维细胞的作用
- 2000年
- 目的 :评价转染血管紧张素 (Ang )受体 (AT1 )反义核苷酸 (AT1 A)对心肌成纤维细胞 (Fbs) Ang 受体亚型 m RNA、蛋白激酶 C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶 P38(P38MAPK)蛋白表达 ,及蛋白质合成的作用。方法 :RT-PCR克隆 AT1 c DNA片段 (4 76 bp) ,将克隆的 AT1 c DNA片段反向插入 Pc DNA 3.1(5 .4kb) ,构建一完整的含AT1 A的质粒 (PAT1 A)。转染培养的大鼠 Fbs,RT- PCR检测转染的 Fbs AT1 m RNA表达。 Ang 10 - 7m ol/ L 刺激 2 4h后 ,比较转染及非转染的 Fas Ang 受体 AT1 及 AT2 m RNA表达 (RT- PCR)、P38MAPK和 PKC蛋白表达(western blot)、蛋白质合成 (3H- L eu掺入 )。结果 :成功构建 PAT1 A。 RT- PCR显示转染 Fbs AT1 m RNA的水平降低 ,与对照 Fbs相比差异显著 (P<0 .0 1)。 Ang 10 - 7m ol/ L 刺激 2 4h后 ,与非转染 Fbs相比 ,转染 Fbs AT1m RNA明显减少 ,AT2 m RNA明显增加 (P<0 .0 1) ;但两组间 PKC和 P38MAPK蛋白表达、3H- L eu及 3H- Td R掺入量均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 :经 AT1 A封闭后 ,能显著地抑制 Fbs AT1 m RNA表达 ,同时上调 AT1 m RNA。单纯封闭 AT1 m RNA并不能有效阻断 Ang 介导的 Fbs蛋白质合成及 Fbs生长相关的信号转导。
- 杨永健祝善俊祝之明胡厚祥丁钢
- 关键词：反义核苷酸
