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猪细小病毒VP2基因核酸疫苗的构建及免疫原性被引量：5: 2009年; 将PPV VP2基因酶切后克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,构建pcDNA-VP2,经脂质体法转染IBRS-2细胞后,Western blotting检测pcDNA-VP2能正常表达。采用pcDNA-VP2肌注Balb/c小鼠,作间接ELISA抗体检测试验,并采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)法对小鼠的细胞免疫进行检测。结果表明,pcDNA-VP2能诱导小鼠产生细胞免疫和体液免疫应答。PCR扩增检测结果显示,未能从免疫小鼠各组织的基因组中扩增出VP2基因片段。; 王印王新郭万柱; 关键词：猪细小病毒 VP2基因核酸疫苗免疫原性

猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)株的构建及生物学特性研究被引量：9: 2005年; 采用磷酸钙转染系统,将伪狂犬病三基因缺失疫苗SA215株DNA与PP63LacZE2 DNA共转染Vero细胞,获得SA215(A)1、SA215(A)2和SA215(A)3等12个重组病毒株。以光生物素标记的HCV E2基因为探针进行初步鉴定后,挑选SA215(A)1株作BamHI酶切和southern转印杂交鉴定,结果表明构建是成功的,将其命名为SA215(A)。直接荧光抗体检测、SDS-PAGE电泳和western免疫印迹检测结果表明HCV E2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约51 ku的囊膜糖蛋白。对SA215(A)株进行部分生物学特性研究,培养特性观察试验表明该毒株可适应Vero、BHK21和鸡胚成纤维细胞等多种细胞,但对不同细胞系表现有一定的差异。SA215(A)株105PFU/mL接种21日龄健康仔猪(伪狂犬病和猪瘟检测阴性),接种后28 d用106PFU的PRV Fa强毒株滴鼻攻毒,42 d用猪瘟SM株血毒1 mL(105MLD/mL)肌肉注射攻击,结果表明接种猪能抵御2次病毒攻击,表明SA215(A)株具有良好免疫原性,是一株优秀的猪瘟、伪狂犬病二价疫苗候选株。; 徐志文郭万柱朱玲王印王晓玉; 关键词：重组病毒猪瘟伪狂犬病生物学特性

猪圆环病毒2型-细小病毒-伪狂犬重组病毒免疫小鼠试验研究被引量：3: 2008年; 为了研究表达猪2型圆环病毒ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的重组伪狂犬病毒疫苗株SA215(D)的疫苗价值,对该病毒株安全性、免疫原性、保护力及对PRVFa株定值进行了研究。研究结果表明重组病毒SA215(D)毒力显著低于PRVFa强毒株,可以抵御伪狂犬病强毒Fa株的攻击,并能抵御其在小鼠体内的定植;抗体检测显示SA215(D)免疫小鼠后第2周抗PRV、PCV2和PPV的抗体水平均很低,加强免疫后第4周抗体水平大幅上升,且显著高于阴性对照组,而与阳性对照组无明显差异,表明SA215(D)可诱导小鼠产生体液免疫反应。淋巴细胞增殖试验显示SA215(D)可诱导小鼠产生较强的淋巴细胞增殖反应,与亲本株SA215组相比,差异显著(0.01; 王新郭万柱周婷; 关键词：猪圆环病毒2型猪细小病毒猪伪狂犬病毒

含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建被引量：13: 2005年; 将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHⅠ酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93 ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。; 罗燕郭万柱徐志文刘艳丽殷华平王新王小玉苟琳; 关键词：伪狂犬病毒猪细小病毒 VP2基因 EGFP 重组病毒

伪狂犬病病毒3基因缺失株(SA215)的遗传稳定性研究被引量：9: 2004年; 测定了伪狂犬病病毒Fa株3基因缺失株(SA215)在鸡胚成纤维细胞上连续传代15代次,在非免疫仔猪体内连续传代5代次后,病毒毒价及对易感动物的安全性变化。并以核酸杂交、核酸酶切和gE-ELISA检测技术分别研究了缺失株(SA215)传代后不同代次病毒的外源插入基因(LacZ)、缺失基因(TK、gE、gI)遗传变异情况。结果表明缺失株(SA215)毒价及对易感动物安全性未发生变化,外源插入基因得到稳定遗传,缺失基因未见回复突变,证明缺失株(SA215)具有良好遗传稳定性。; 徐志文郭万柱朱玲唐善虎; 关键词：代次伪狂犬病病毒毒价易感动物缺失基因

伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gC基因全序列的克隆与分析: 根据伪狂犬病病毒Becker株的gC基因序列,设计并合成了1对特异性引物,通过PCR方法从我国伪狂犬病病毒代表毒株Fa株的基因组DNA中扩增到了1条约1.6 kb的片段。将PCR扩增产物纯化后克隆到pMD18-T载体中,...; 娄高明敖敬群廖筱萍王殉章; 关键词：伪狂犬病病毒 GC基因 PCR扩增基因克隆; 文献传递

伪狂犬病病毒Fa株gE基因在大肠杆菌中的表达及gE-ELISA鉴别诊断方法的建立被引量：5: 2007年; 试验以pPGE DNA为模板,用1对分别含有EcoRⅠ和Bam HⅠ酶切位点的伪狂犬病病毒gE基因特异性引物,扩增出约1.7kb的含完整gE基因的DNA片段;目的片段经EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切后,插入原核表达载体pBV220得到重组表达质粒pBVgE,并转化大肠杆菌DH5α;对温敏诱导表达所获产物进行SDS-PAGE、Western-Blot和琼脂双扩散检测。结果表明,gE糖蛋白得到了高效表达,表达产物约占总蛋白的17%。为了鉴别伪狂犬病疫苗免疫猪和自然感染猪,用表达纯化的gE蛋白为抗原,建立了GE-ELISA方法。选定的反应条件包括GE抗原包被浓度为6.6mg/L,血清最适稀释度为1∶40。测试结果:与PRV、HCV、PRRSV、JEV、SA215阳性血清呈阴性反应,而与PRV标准阳性血清呈阳性反应。这一结果表明该法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于猪伪狂犬病的临床诊断,尤其疫苗免疫猪和自然感染猪的鉴别。; 阳爱国郭万柱赵银丽徐志文王小玉; 关键词：伪狂犬病病毒 GE基因

伪狂犬病病毒闽A株糖蛋白gD基因去信号肽片段在大肠杆菌中的表达: 根据伪狂犬病病毒(PRV)Fa株糖蛋白gD基因序列,设计了1对特异性引物,应用PCR方法成功地从重组质粒pB13中扩增出了糖蛋白gD基因去信号肽片段。随后,将此片段克隆到大肠杆菌表达载体pThiohisA中,测序结果表明...; 娄高明杨承槐; 关键词：伪狂犬病病毒大肠杆菌免疫原性; 文献传递

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“十五”国家科技攻关计划(2002BA514A-16-7)