教育部留学回国人员科研启动基金(2002HG003)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：第四军医大学唐都医院更多>>
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- 不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR方法扩增基因型为1b型的HCV核心蛋白的全长及3种不同缺失突变的基因片段,对应氨基酸分别为C573:1-191aa,C510:1-59aa+81-191aa,C507:1-169aa,C444:1-59aa+81-169aa.将其克隆到高效表达载体pRSETA中构成重组质粒(pRSETAC573,pRSETAC510,pRSETAC507,pRSETAC444),转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.IPTG诱导表达6×His融合蛋白,表达产物经SDSPAGE及Westernblot检测和鉴定.结果:经酶切鉴定及测序证实全长及3种不同缺失突变的核心蛋白基因的原核表达载体构建正确.经SDSPAGE及Westernblot显示在Mr约为21×103,19×103,19×103,16.5×103处出现融合表达条带.融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的20%.结论:全长及3种不同缺失突变的丙型肝炎病毒核心蛋白基因均在大肠杆菌中得到有效表达.
- 沈才飞白雪帆牟丹蕾黄长形
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白突变原核表达
- 第60～80位氨基酸多肽片段缺失的HCV核蛋白在真核细胞中的表达被引量：4
- 2005年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)第6080位氨基酸多肽缺失核蛋白的真核表达载体,并在真核细胞中表达.方法:用RTPCR方法从西安地区丙型肝炎患者血清中扩增HCVC区及部分E1区基因并进行克隆、测序,以此为模板用重叠延伸拼接方法扩增第6080位氨基酸多肽基因缺失的核蛋白基因片段(C510),将其定向克隆入哺乳动物高效表达载体pCIneo中,通过Lipofectamine2000转染入p815细胞,经间接免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜和WesternBlotting方法检测细胞中目的蛋白的表达.结果:从患者血清中成功克隆出HCVC区基因,序列及系统发生树分析结果显示为1b型;测序结果显示构建的第6080位氨基酸多肽缺失核蛋白基因的重组真核表达质粒pCI510基因序列准确;免疫荧光和免疫印迹方法均证实目的蛋白p170可在p815细胞中表达.结论:重组体pCI510构建正确,其目的基因在p815细胞中可有效表达,为进一步的研究奠定了基础.
- 洪沙黄长形杨为松陈红梅李光玉王平忠陈伟红张岩李羽白雪帆
- 关键词：肝炎病毒病毒核心蛋白质类
