四川省科技厅科技支撑计划项目(2008GZ0150)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：韩学易陈惠王春梅胡云龙陈虹更多>>
- 相关机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：四川省科技厅科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因的克隆表达及酶学性质分析被引量：4
- 2012年
- 根据NCBI(GenBank Accession No.:D83732.1)中注册的米曲霉内切葡聚糖酶CelB基因序列设计引物,以本实验室自行筛选的天然米曲霉基因组DNA为模板,PCR高保真扩增出内切葡聚糖酶基因eg,将其定向插入到酵母表达载体pPICZαA上,转化酵母宿主菌X33,刚果红水解圈筛选结果表明已成功表达。SDS-PAGE分析表明,表达产物分子量约为65 ku。对酵母表达工程菌X33-eg进行发酵条件优化,结果显示最适甲醇诱导浓度为0.75%,用1 L三角瓶诱导培养5天达到最高酶活120 U/mL。对重组酶的酶学性质分析表明,其最适反应pH值和温度分别为pH4.0和45℃,在30～45℃和pH3.4～pH6.9范围内可保持内切葡聚糖酶最高酶活力70%以上。
- 韩学易王春梅陈惠
- 关键词：米曲霉内切葡聚糖酶酵母表达酶学性质
- 米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2012年
- 【目的】克隆米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因并检测其在大肠杆菌中的表达。【方法】以自行分离筛选出的天然米曲霉giF-10的基因组DNA为模板,PCR高保真扩增,扩增产物连接到pMD19-T克隆载体上,并构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】序列分析表明,其长度为1 251bp,编码417个氨基酸,序列比对发现与内切葡聚糖酶基因CelB序列相似性高达100%,将此基因注册GenBank(HQ739052)。刚果红水解圈筛选结果表明已成功表达。【结论】克隆了米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因,并在大肠杆菌成功表达,为纤维素酶工业化生产奠定基础。
- 韩学易王春梅陈惠
- 关键词：米曲霉内切葡聚糖酶基因克隆大肠杆菌
- 响应面法优化巨大芽孢杆菌产纤维素酶发酵条件被引量：5
- 2013年
- 【目的】为了解决纤维素酶发酵工业产量低、生产成本高等问题，加快纤维素酶工业化应用的步伐。【方法】采用5L发酵罐，利用响应面分析法（RSM）对基因工程菌WH320—pHIS1525-G7从接种量、木糖流速及流加时问进行产酶优化。【结果】确定其发酵工艺为：17．62％的接种量，温度37℃，pH7．0，罐压0．03～O．05Mpa，转速300r／rain，0．41g／（L·h）的速度流加木糖11．33h，发酵过程中控制溶氧浓度≥30％。【结论】在该发酵条件下测得纤维素酶活力为2．152U／mL，比优化前摇瓶发酵酶活力提高了2倍，可为工业化生产纤维素酶提供依据。
- 韩学易唐自钟胡云龙万玉军王琨陈虹陈惠
- 关键词：巨大芽孢杆菌中性纤维素酶发酵条件响应面分析法
