山东省自然科学基金(Y2008D12)
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
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- 鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
- 2012年
- 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5
- 苏倩倩李恩扩张海滨周霞胡敬东
- 关键词：原核表达蛋白纯化间接ELISA
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白的表达、纯化及其单克隆抗体的制备与特性鉴定被引量：1
- 2013年
- 将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin 18,mChIL-18)基因亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌中高效表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光(IFA)和Western blot等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了mChIL-18蛋白,并获得2株持续且稳定分泌抗体的杂交瘤细胞(1G9、2E6),其腹水ELISA效价分别为1:5.12×105和1:3.2×104,亚类鉴定结果均为IgM。Western blot结果显示,2株单抗均能特异性识别原核表达的mChIL-18蛋白,IFA分析表明它们均能与真核表达的mChIL-18发生特异性反应,ELISA叠加试验证实1G9与2E6针对2个不同的抗原表位。本研究所获单抗可以用于建立鸡IL-18的检测方法,为进一步开展其生物学功能研究奠定了基础。
- 苏倩倩王肖祎李恩扩彭志成胡敬东
- 关键词：鸡白细胞介素18单克隆抗体特异性鉴定
- 鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测被引量：1
- 2011年
- 首先将鸡白细胞介素18成熟蛋白(mature chicken interleukin-18,mChIL-18)基因亚克隆至杆状病毒转移载体pFastBac HTb上,然后转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌E.coli DH10BacTM中,构建重组Bacmid(rBacmid)。通过脂质体介导法将纯化的rBacmid转染sf9细胞,获得完整重组杆状病毒,将达到一定滴度的重组杆状病毒感染sf9,收获感染后不同时间段的培养上清和细胞,经SDS-PAGE分析、Western-blotting和间接免疫荧光(IFA)检测,结果表明,分子量约为23KDa的重组蛋白在昆虫细胞中获得了表达;鸡淋巴细胞转化试验和水疱性口炎病毒(VSV)抑制试验表明,表达产物具有良好的生物学活性。结论:在杆状病毒表达系统中成功表达了有活性的mChIL-18蛋白。
- 范忠玲王婷婷马凤龙胡敬东
- 关键词：昆虫细胞生物学活性
- 禽网状内皮组织增生症病毒感染肉鸡中鸡白细胞介素18的定量检测被引量：1
- 2011年
- 建立并利用鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染肉鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平在感染后7和14d均显著升高(P<0.05),在感染21、28、35和42d表达差异均有显著变化(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理奠定了一定基础。
- 孔斌陈雪锋唐德宏胡敬东
- 关键词：肉鸡禽网状内皮组织增生症病毒白细胞介素18荧光定量RT-PCR
- SPF雏鸡感染REV后IL-6和IFN-γ mRNA表达的动态变化
- 2013年
- 建立并利用鸡白细胞介素6和γ干扰素荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendo-theliosis virus,REV)感染SPF鸡后主要免疫器官的鸡白细胞介素6和γ干扰素基因转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和腔上囊中IL-6和IFN-γ的分泌水平在所有时间点均显著升高(P<0.05)或极显著升高(P<0.01)。本试验为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础。
- 陈雪锋李恩扩王肖祎陈静胡敬东
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒Γ干扰素实时荧光定量RT-PCR
- REV感染SPF鸡中白细胞介素18的定量检测被引量：2
- 2012年
- 建立并利用鸡白细胞介素18(chicken interleukin-18,ChIL-18)荧光定量RT-PCR方法,对于禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)感染SPF鸡后主要免疫器官的IL-18mRNA转录水平进行了初步研究。结果表明,与对照组相比,处理组脾脏、胸腺和法氏囊中IL-18的分泌水平除感染后14d脾脏外,在感染后7,14,21,28,35,42,49d均显著升高(P<0.05)。本研究为探讨REV感染的免疫抑制机理打下了一定基础。
- 陈雪锋孔斌唐德宏胡敬东
- 关键词：SPF鸡禽网状内皮组织增生症病毒白细胞介素18荧光定量RT-PCR
- SPF雏鸡感染REV后IL-2mRNA表达的动态变化
- 2013年
- 为研究SPF鸡感染禽网状内皮组织增生症病毒(REV)后白细胞介素2(IL-2)mRNA表达的动态变化,本研究应用荧光定量RT-PCR方法,对SPF鸡感染REV后主要免疫器官的IL-2 mRNA转录水平进行了初步研究。结果显示,与对照组相比,REV感染组鸡的脾脏、胸腺和法氏囊中IL-2基因的表达量在感染后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d、42 d和49 d均呈现升高,而且除21日龄、28日龄鸡的脾脏外,均为差异显著(p<0.05)。本研究表明REV感染后可以诱导鸡的机体表达IL-2。
- 李恩扩陈雪锋孔斌胡敬东
- 关键词：SPF鸡禽网状内皮组织增生症病毒白细胞介素-2
- 鸡白细胞介素18双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用
- 2014年
- 应用识别不同表位的鸡白细胞介素18成熟蛋白(Mature chicken interleukin-18,mChIL-18)的2株单克隆抗体(mAb)1G9和2E6,建立检测mChIL-18的双抗体夹心ELISA,并利用此方法对禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)人工感染SPF鸡体内mChIL-18的分泌水平进行检测。结果显示,捕获抗体的最佳质量浓度为8mg/L,检测抗体的工作效价为1∶800,待检样品的最佳稀释度为1∶400,检测敏感度可达31.5ng/L,与其他细胞因子等抗原蛋白无交叉反应;跟对照组相比,REV感染鸡体内mChIL-18的表达量在7、14、21、28、35、42、49d均呈现升高,但只有14日龄时表现差异显著(P<0.05)。结果表明,本试验成功建立了ChIL-18的双抗体夹心ELISA,为鸡传染病的细胞免疫学研究提供了可靠方法。
- 王肖祎苏倩倩李恩扩胡敬东
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
