“重大新药创制”科技重大专项(2011ZX09401-023)
- 作品数：10 被引量：56H指数：5
- 相关作者：童贻刚安小平米志强陈晨张志毅更多>>
- 相关机构：军事医学科学院军事医学科学院附属医院北京理工大学更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体IME-AB6的分离、生物特性及保存方法研究被引量：7
- 2013年
- 目的:分离并鉴定一株多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体,对其生物特性进行研究,为治疗多耐药鲍曼不动杆菌感染提供新的方法和实验依据。方法:以一株多耐药不动杆菌AB6为宿主菌,从医院废水中分离出噬菌体;用聚乙二醇6000对噬菌体进行浓缩和纯化,并就噬菌体的形态、一步生长曲线、裂解特性和不同保存条件对噬菌体活性的影响进行初步研究。结果:分离出一株噬菌体IME-AB6,电镜显示为肌尾噬菌体,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min,爆发量160 pfu/cell;IME-AB6能迅速使菌液变清晰,温度灵敏性强,并且发现在4℃保存是一种方便高效的方法。结论:噬菌体IME-AB6是一株新的有独特特点的噬菌体,用聚乙二醇能很好地提高滴度,其潜伏期和爆发期短且杀菌效能强,性能稳定易保存,这对于噬菌体制剂的开发和耐药性鲍曼不动杆菌的防治具有潜在应用价值。
- 彭帆童贻刚柏长青
- 关键词：鲍曼不动杆菌噬菌体生物特性
- 噬菌体浓缩方法的比较被引量：8
- 2013年
- 目的:对不同噬菌体浓缩方法进行比较。方法:采用PEG沉淀、PEG反透析、阴阳离子结合树脂、超滤等5种方法对T4、T7、N4等3类噬菌体进行浓缩对比试验;在此基础上,用浓缩效果较好的方法对土壤和河道污水样本中的噬菌体进行浓缩,观察浓缩效果。结果:上述5种方法对3类噬菌体均有浓缩效果;超滤的浓缩效果最好,其次是PEG反透析,PEG沉淀没有很好的浓缩效果;河水样本中噬菌体的回收率比土壤样本高。结论:可通过PEG反透析、超滤或两者相结合的方法,得到高浓度的有活性的噬菌体。
- 韩传银张飞雄童贻刚
- 关键词：噬菌体
- Autodock Vina与Discovery Studio在虚拟筛选耐药蛋白抑制剂中的比较被引量：16
- 2012年
- 随着大量与细菌耐药相关的基因的发现和其表达蛋白结构的成功测定,从已有的化合物中通过计算机模拟方法筛选对耐药蛋白靶点有作用的候选化合物,成为了药物发现的一个标准途径。虚拟筛选在耐药基因抑制剂的发现中可以提高效率、降低实验成本。本文介绍了Autodock Vina和Discovery Studio在基于分子对接法的虚拟筛选中的使用,并对比分析其对β-内酰胺酶活性位点的筛选结果。希望通过这种比较促进虚拟筛选在药物设计领域中的应用,提高耐药基因抑制剂的发现速度。
- 黄勇陈晨张志毅童贻刚赵勇
- 关键词：分子对接AUTODOCKVINADISCOVERYSTUDIO抑制剂
- 阿尔茨海默症的诊断与治疗研究进展被引量：8
- 2013年
- 阿尔茨海默症(AD)即老年痴呆症,是以老年斑和神经元纤维缠结为主要病理特征的神经退行性疾病。AD的发病机制是多种发病因素、多种通路和分子机制的相互参与,例如信号异常、炎症和免疫系统、脂质转运、细胞内吞作用、细胞凋亡、氧化损伤和应激反应、tau病理学、神经元和突触的损失、能量代谢等。目前没有一种AD治疗方法能从根本上停止其病理的退行性改变,但仍有多种治疗策略。我们从生物标志物、遗传、神经影像、药物治疗、β淀粉样蛋白免疫治疗方面,对阿尔茨海默症的治疗研究进展进行了简要综述。
- 尹雅菲童贻刚庆宏
- 关键词：阿尔茨海默症生物标志物基因神经影像免疫治疗
- 含有CRISPR序列的噬菌体耐受菌的筛选被引量：1
- 2014年
- 人工设计合成规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)序列特异性引物,将从临床分离的大肠埃希菌株作为模板,采用PCR扩增方法筛选含有CRISPR系统的大肠埃希菌;利用噬菌斑法从医院未经消毒处理的污水中分离大肠埃希菌噬菌体,经过PEG沉淀的方法浓缩得到高滴度的噬菌体,再用该筛选噬菌体感染上述含有CRISPR的大肠埃希菌以筛选耐受该噬菌体的大肠埃希菌菌株。最后从70株大肠埃希菌中筛选到42株含有CRISPR序列的菌株,然后采用噬菌斑法分离到1株大肠埃希菌E.coli 147-30的裂解性噬菌体IME-EC1,在此基础上利用E.coli 147-30筛选到1株耐受噬菌体IME-EC1的大肠埃希菌菌株,命名为E.coli 147-30R1。
- 滑玉会黄勇张志毅安小平米志强尹秀云陈建魁童贻刚
- 关键词：大肠埃希菌噬菌体
- 采用高通量测序技术分析尾病毒目噬菌体基因组末端序列特点被引量：3
- 2013年
- 证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序技术分析N4样噬菌体的全基因组序列。加接头的序列与无接头序列中的高频序列完全一致,证明了高通量测序过程中得到的高频序列就是加接头的基因组末端序列,同时证明T4样噬菌体的末端具有序列特异性而非完全随机,此外我们还发现N4样噬菌体基因组左侧末端具有唯一序列,而其基因组右侧末端不均一。高通量测序技术方便快捷,可用于噬菌体基因组末端和全基因组序列的同时测定。
- 李莎莎范航安小平范华昊姜焕焕米志强童贻刚
- 关键词：高通量测序
- 新广谱大肠杆菌噬菌体IME11的分离及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的 分离广谱大肠杆菌噬菌体并对其进行种属的鉴定。方法 以不同种临床致病性大肠杆菌为指示菌，从未经处理的污水样品中分离噬菌体；采用蛋白酶K/SDS的方法提取噬菌体基因组，制备重组载体，将阳性重组质粒进行测序；将测序结果进行BLAST，推测该噬菌体种属分类位置。结果 分别以大肠杆菌E1 ～ E17共17种细菌作为指示菌，成功分离出一种广谱噬菌体，可裂解31株临床分离致病性大肠杆菌中的13株，并将其命名为IME11；由噬菌体基因组限制性酶切片段分析表明其遗传物质为dsDNA；将噬菌体IME11基因组的2个随机片段测序结果进行BLAST，推测其属于N4-like噬菌体属。结论 分离出了一种广谱噬菌体，在分类学上属于N4-like噬菌体属。
- 尹雅菲张乐庆宏童贻刚
- 关键词：噬菌体大肠杆菌基因克隆
- 利用高通量测序快速检测H7N9禽流感病毒及基因组序列分析被引量：6
- 2014年
- 目的探索用高通量测序技术检测咽拭子样本中H7N9禽流感病毒的方法。方法分别提取编号为106、089及024 3份样本RNA,反转录,cDNA扩增,用Ion Torrent进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果 3个咽拭子样本的测序结果中均能检测出禽流感病毒,拼接出的基因组序列可以进行生物信息学分析。结论利用高通量测序技术可以快速地检测H7N9禽流感病毒,并可用生物信息学软件拼接基因组序列及进行序列分析。
- 裴广倩范航安小平王伟徐晓蒙史套兴童贻刚
- 关键词：高通量测序生物信息学分析
- 快速从医院废水中大规模分离铜绿假单胞杆菌噬菌体被引量：4
- 2012年
- 目的:从医院废水中快速分离多株不同的铜绿假单胞杆菌噬菌体,研究其生物学特性,为建立铜绿假单胞杆菌噬菌体库做准备。方法:利用噬菌斑法从未经处理的医院污水中分离和鉴定铜绿假单胞杆菌噬菌体,根据感染谱的不同确定它们为不同的铜绿假单胞杆菌噬菌体;重点研究其中一株宿主谱较广的噬菌体的生物学特性,采用负染法电镜观察噬菌体的形态和大小,提取该噬菌体的基因组并进行酶切电泳分析,测定噬菌体感染复数并观察其一步生长曲线。结果:通过噬菌斑法分离出90株铜绿假单胞杆菌噬菌体。电镜观察显示,噬菌体Pa27P1头部呈立体对称,有一长尾;酶切结果显示,噬菌体Pa27P1的基因组为双链DNA;生长曲线表明噬菌体Pa27P1感染宿主菌的潜伏期为25 min,爆发时间为25 min,裂解量为514。结论:90株铜绿假单胞杆菌噬菌体中有5株具有较广的噬菌谱,其组合能裂解所有18株铜绿假单胞杆菌,为深入研究铜绿假单胞杆菌噬菌体的生物学特性及其功能提供了依据。
- 范华昊范俊芬滑玉会裴广倩张文惠张博陈晨李建彬王晓娜安小平米志强王琳尹秀云陈建魁童贻刚
- 关键词：细菌耐药生物学特征
- 基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光技术特异定量检测金黄色葡萄球菌被引量：1
- 2014年
- 基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法建立特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法。优化设计合成溶葡球菌酶序列,构建重组表达载体pQE30-Lys,转化至大肠杆菌M15并诱导表达,镍柱纯化得到目的蛋白。利用重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法特异定量检测金黄色葡萄球菌并与平板计数对比。成功表达了重组溶葡球菌酶,并建立了特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法,与平板计数具有显著线性关系。本研究建立的将重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法相结合的检测方法操作快捷简单,具有良好的应用前景。
- 李玉元米志强安小平周育森童贻刚
- 关键词：金黄色葡萄球菌
