国家高技术研究发展计划(2006AA02Z196)
- 作品数：47 被引量：63H指数：5
- 相关作者：谢鹏展群岭徐鸣明张英英何丰更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学宁夏医科大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 牧羊犬外周血和脑组织博尔纳病病毒检测结果的比较被引量：6
- 2010年
- 目的检测同一牧羊犬外周血和脑组织博尔纳病病毒(BDV)p24片段,比较两者阳性率的差异。方法采用改进的荧光定量套式RT-PCR,对新疆伊犁地区圈养的100只牧羊犬外周血单核细胞(PBMC)和脑组织(BT)同时进行BDV p24基因片段的检测,并对阳性标本采用GFP-p24、pMD-19扩增后电泳验证,排除质粒污染,并克隆测序,用Fisher精确检验和χ2检验分析两者阳性率的差异。结果牧羊犬外周血单核细胞和脑组织BDV p24检测的阳性率分别为5%和9%;PBMC组和BT组BDV p24检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论BDV在脑内持续感染,但以RT-PCR对外周血单核细胞BDV p24片段的检测有可能替代脑组织BDV检测,作为大规模流行病学调查的手段。
- 何丰冯裕星孙后超展群岭谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒外周血脑组织
- 重庆三峡库区部分地域猪博尔纳病病毒自然感染状况调查被引量：6
- 2009年
- 博尔纳病病毒（Borna disease virus,BDV）是一种非细胞溶解的单股负链嗜神经RNA病毒,可引起人畜共患病博尔纳病。目前研究表明,BDV几乎可感染所有的温血动物,但其流行现况尚不完全清楚。本研究采用改进的巢式逆转录酶聚合酶链反应（nRT-PCR）检测重庆三峡库区部分地域健康猪外周血单核细胞（PBMCs）BDVP24基因片段，对阳性产物进行测序分析，了解该地域BDV自然感染状况。
- 朱丹张英英展群岭余建萍曾志磊徐鸣明胡永波陈晓彭丹霍康谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒巢式RT-PCRTAQMAN探针
- 新疆伊犁地区动物脑组织博尔纳病病毒p24基因片段的检测被引量：2
- 2010年
- 目的了解新疆伊犁地区动物脑博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）感染现状，分析该病毒的种系来源，预防我国BDV大规模暴发流行。方法采用巢式逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）的方法，对新疆地区200匹马、75头驴和100只牧羊犬脑组织标本进行BDVp24基因片段的检测。并对阳性标本进行BDV p40基因片段扩增电泳，同时排除GFP—p24和pMD-19质粒污染，最后克隆测序，进行基因同源性和氨基酸序列分析并分析BDV种系发生。结果3例伊犁马、4例伊犁驴和9例牧羊犬的脑组织标本BDV p24检测阳性，阳性率分别为1．5％、5．3％、9．0％；BDV p40基因片段检测和质粒标准品GFP—p24、pMD-19检测均为阴性；BDV pPA扩增产物序列与He／80株的同源性为100％。结论新疆伊犁地区马、驴和狗可能存在BDV脑内的自然感染，该地区BDV流行株与He／80株存在同源性。
- 何丰冯裕星孙后超胡子成徐红波徐鸣明展群岭胡永波金戈张英英李雷雷谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒脑组织
- Nipah病毒一步法Real-time RT-PCR检测方法的建立被引量：1
- 2010年
- 目的建立针对Nipah病毒N基因的一步法Real-time RT-PCR检测方法,用于Nipah病毒感染样本的快速准确检测和定量。方法针对Nipah病毒的保守基因N设计引物和探针,建立一步法Real-time RT-PCR反应方法并分析敏感性和特异性。结果所设计的引物经Blast检索可以用于检测所有已知的Nipah病毒株。本研究建立的一步法Real-time RT-PCR方法可以特异性检测出Nipah病毒,不与Hendra病毒产生交叉反应。检测灵敏度为1.1×100～1.1×101copies/μl。标准曲线的线性范围为1.1×102～1.1×106copies/μl。结论本研究建立的一步法real-time RT-PCR方法敏感性和特异性较高,且不易出现污染引起的假阳性结果,适合用于Nipah病毒感染样本的检测。
- 曾志磊谢鹏刘妍汐翟红朱丹彭丹陈晓
- 关键词：NIPAH病毒REAL-TIMERT-PCR一步法TAQMAN探针
- 病毒性脑炎的诊断及博尔纳病病毒p24基因片段的检测被引量：5
- 2009年
- 目的探讨脑脊液(CSF)、脑电图(EEG)、MRI对于病毒性脑炎的诊断价值,并检测病毒性脑炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)中博尔纳病病毒(BDV)p24基因片段,探讨病毒性脑炎与BDV感染的关系。方法回顾性分析病毒性脑炎患者的CSF、EEG、MRI的阳性检出率并进行比较,用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)方法检测病毒性脑炎患者及对照者PBMCs中BDVp24基因片段,并总结阳性患者的临床特征。结果CSF、EEG、MRI检查结果比较,CSF高于MRI检查结果阳性率(χ2=9.6,P<0.01);CSF高于EEG检查结果阳性率(χ2=7.58,P<0.01);MRI检查阳性率高于EEG(χ2=5.82,P<0.01)。PBMCs中BDVp24基因片段检测结果显示实验组4例阳性,对照组均为阴性。4例BDVp24基因片段阳性患者主要以发热、头痛、颅内压增高症状为主。结论脑脊液、MRI对病毒性脑炎的诊断价值优于EEG,部分病毒性脑炎的发生与BDV感染有关,主要以发热、头痛、颅内压增高为临床特征。
- 马彦王振海孔繁元
- 关键词：病毒性脑炎脑脊液博尔纳病病毒
- 新疆伊犁地区马群中博尔纳病病毒自然感染调查被引量：6
- 2008年
- 目的了解新疆伊犁地区马群中博尔纳病病毒（BDV）的流行状况，分析该病毒的种系来源。方法采用改进的巢式反转录PCR（nRT-PCR）方法对新疆伊犁地区120匹马的外周血单个核细胞（PBMC）及脑组织中的BDV p24基因片段进行检测，对阳性产物进行基因序列测定和同源性分析。结果有3匹马外周血和脑组织中同时检测到BDV，阳性率为2．5％（3／120）。扩增产物序列与其他国外马源BDV分离株同源性〉93％，与标准株He／80同源性达到98％以上。结论新疆伊犁地区马群中存在BDV的自然感染。该地区BDV流行株与标准株He／80存在高度的同源性。
- 朱丹曾志磊彭丹陈晓赵立波张英英徐明呜展群岭余建平谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒巢式RT-PCRTAQMAN探针
- 新疆伊犁地区马和驴博尔纳病病毒自然感染的调查被引量：5
- 2009年
- 目的调查新疆伊犁地区伊犁马和伊犁驴博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）流行现状，分析BDV种系来源。方法采用荧光定量巢式实时逆转录聚合酶链反应（fluorescence quantitative nested RT—PCR，FQ—nRT—PCR），对新疆伊犁地区518匹伊犁马和206头伊犁驴外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）进行BDVp24基因片段检测。对检测阳性结果的标本通过BDVp40和质粒标准品的检测进行进一步验证并测序，对其进行基因同源性、氨基酸序列和系统发生分析。结果5例伊犁马和4例伊犁驴血标本BDVp24检测阳性，阳性率分别为0．97％和1．94％；9例标本BDVp40片段检测均阳性，质粒标准品检测均阴性；BDV024扩增产物序列与He／80株的同源性为100％。结论新疆伊犁地区伊犁马和伊犁驴中可能存在BDV的自然感染，该地区BDV流行株与He／80株存在同源性。
- 张英英展群岭徐鸣明余建萍曾志磊翟红刘妍汐陈晓彭丹朱丹胡永波霍康谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒TAQMAN探针伊犁马
- 新疆部分地区动物Nipah病毒和Hendra病毒感染的调查被引量：6
- 2009年
- 拟建立一步法实时RT-PCR检测Nipah病毒(Nipah virus,NiV)、Hendra病毒(Hendra virus,HeV)的方法,对采集自中国新疆部分地区动物外周血样本进行NiV和HeV检测,以获得我国新疆地区的NiV和HeV的病毒流行病学资料。采用NiV和HeV一步法实时RT-PCR检测方法,对2007年9-12月采集的新疆伊犁河谷地区以及巴音布鲁克草原放养的500匹马、100匹驴和160只犬外周血单个核细胞RNA进行NiV和HeV N基因片段检测。结果:对采集的动物血样本进行NiV和HeV核酸检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,没有发现阳性样本。初步流行病学研究提示我国新疆部分地区天然牧场放养的动物中可能不存在NiV和HeV感染,该地区出现NiV和HeV爆发的可能性较小。
- 彭丹曾志磊陈晓朱丹余建萍展群岭翟红谢鹏
- 关键词：NIPAH病毒核酸检测技术流行病学
- 病毒性脑炎患者外周血和脑脊液西尼罗病毒E基因的检测
- 2010年
- 西尼罗病毒（WNV）是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科黄病毒属,其传播媒介和储存宿主是蚊虫[1].人感染WNV会出现感冒样症状,部分患者为脑膜脑炎、坏死性脑干炎等神经系统症状.本研究对重庆地区不明病因的78例病毒性脑炎（VE）患者血液和脑脊液进行wNV E基因片段检测.
- 何丰冯裕星胡子成徐红波孙后超展群岭雷阳徐鸣明胡永波谢鹏
- 关键词：病毒性脑炎西尼罗病毒实时荧光定量PCR
- BDV核蛋白FQ RT-PCR试剂盒的评价与应用
- 2010年
- 为评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)核蛋白荧光定量PCR(FQRT-PCR)试剂盒的各项指标,比较分子信标探针相对普通探针的优势,并了解其实际检测效果,本课题组使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,对BDVRT-PCR试剂盒的敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评估,同时检测部分临床病人和动物外周血液RNA。实验结果显示:试剂盒可以检测出的病毒RNA最低浓度为2.5×101,相当于1个病毒拷贝数,无非特异检出;不同批次的试剂盒的检测结果变异系数小于0.7;加速破坏的试剂盒和正常试剂盒检测结果之间变异系数在2以内;对临床病人检测阳性率为3.6%,对动物检测阳性率为4.2%(猪)和1.5%(马)。可见该试剂盒重复性和稳定性均好;敏感性、特异性优于普通探针试剂盒,是BDV基础研究、流行病学调查和临床检测的良好工具。
- 徐鸣明展群岭张英英张亮宋武琦张凤鸣谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒实时荧光定量PCR核蛋白
