黑龙江省自然科学基金(C200620)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 香菇gpd启动子引导的云芝漆酶基因真核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 根据Genbank中提交的云芝(Coriolus versicolor(L.)Quel.)漆酶(lcc1)基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR获得云芝漆酶基因cDNA完整编码框,与GenBank中云芝漆酶基因同源性为96%;以pCAM-BIA1381xb为初始载体,利用引物两端的酶切位点,将克隆得到的云芝漆酶基因cDNA序列分别连接到香菇gpd启动子Lg1和Lg2的下游,构建成香菇启动子引导的云芝漆酶基因真核表达载体pC-XG1-YZ-Lac和pC-XG2-YZ-Lac,利用冻融法将其转到了农杆菌EHA105中。
- 邓勋宋瑞清宋小双闵凯孙海珍
- 关键词：白腐菌漆酶表达载体构建
- 毛栓菌漆酶基因克隆及其酵母表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- [目的]研究毛栓菌漆酶基因克隆及其酵母表达载体的构建,为研制高品质酶制剂,实现其工业化生产和规模化应用奠定了基础。[方法]以毛栓菌总RNA为模板,通过RT-PCR克隆去信号肽的漆酶基因;通过BLAST比对,对毛栓菌漆酶基因序列的同源性进行分析;对质粒pPIC9K进行EcoRⅠ和NotⅠ进行酶切,构建其酵母表达载体p9K+Lac。[结果]去信号肽的漆酶基因编码框全长为1 512bp,编码506个氨基酸,分子量为54 KDa;毛栓菌漆酶基因与NCBI中提交的毛栓菌基因序列同源性达到了99%。[结论]通过RT-PCR得到了漆酶基因全长,重组毕赤酵母表达载体p9K+Lac的构建是完全正确的。
- 闵凯宋瑞清邓勋
- 关键词：毛栓菌漆酶基因克隆表达载体构建
- 黑木耳YBS-3菌株ras启动子的克隆与分析被引量：1
- 2011年
- [目的]从黑木耳(Auricuralia auricular)基因组中克隆内源ras启动子,为黑木耳利用基因工程培育优良品种提供启动子元件材料。[方法]利用PCR技术,以黑木耳菌株YBS-3基因组DNA为模版,克隆得到4条ras启动子片段。采用启动子序列分析软件Place、Promoter prediction和TFSEARCHver.1.3对其进行序列结构分析。[结果]4条启动子片段均含有核心启动子序列,除典型的基本作用元件TATAbox和CAATbox外,还有许多其他重要作用元件如GATABOX、GCGCBOX和CCAATBOX1等,同时每条片段中均至少具有1个转录起始位点,且检测到HSF、AP-1、GCN4等多个转录因子结合位点。[结论]4条目的序列在理论上具有较强的启动子活性功能。
- 张霞宋瑞清邓勋
- 关键词：黑木耳克隆
- 姬松茸(Agaricus blazei Murrill.) gpd启动子的克隆及其序列分析被引量：4
- 2009年
- [目的]对姬松茸中分离的gpd启动子片段进行序列分析。[方法]根据报道的gpd启动子序列设计合成1对引物,以姬松茸基因组DNA为模板,采用PCR扩增法克隆得到了2条DNA特异性片段,并利用启动子信号扫描和启动子预测程序对2条序列的片段启动子区和转录结合位点进行分析。[结果]测序结果表明,2条序列分别为372 bp和614 bp,分别命名为J-gpd1和J-gpd2,GenBank登陆号分别为:EU220746和EU220747;J-gpd1有3个,J-gpd2有4个核心启动子区;2条序列不仅具有基本启动子作用元件CAATBOX和TATABOX外,还具有多个重要作用元件,如CGCGBOX、GATABOX、ASF-motif、W-BOX、TGACGT-motif和GTGA motif等。利用TFSEARCH ver.1.3分析表明,2条序列还含有多个转录因子结合位点,包括GCR1、ADR1、HSF、ABF1和RAP1等。[结论]研究推测,2条序列所启动的基因具有较高的多样性和准确性。
- 邓勋宋小双宋瑞清
- 关键词：姬松茸克隆
- 高效选择性降解稻草木质素的菌株及其产酶特性的研究被引量：6
- 2009年
- 采用变色圈试验和木质素降解试验,对19株木材腐朽菌对稻草生物降解能力进行定性及定量筛选,获得了毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、东方栓菌(Trametes orientalis)、彩绒革盖菌S2(Coriolus versicolor)和白干酪菌(Tyromyces albidus)4株高效降解稻草木质素的菌株。在15 d的培养中,各菌株对稻草木质素的降解率分别为36.71%、33.59%、22.46%和21.90%。在基础培养基发酵培养中,4菌株的漆酶活性分别在8 d和14 d达到峰值,其中白干酪菌的漆酶活性最高,为147.73 U/L,毛革盖菌、东方栓菌和彩绒革盖菌S2的漆酶活性最高分别为113.00,133.65,122.65 U/L;4菌株的木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶的酶活性均不高,可能与缺少必要的诱导剂有关。4菌株的胞外蛋白含量和菌丝重增加变化曲线基本一致,只是峰值略有提前。4株不同来源的彩绒革盖菌在木质素降解能力上存在一定的差异,这与菌株的地域差异和菌株的多次转接有直接的关系。
- 邓勋宋瑞清闵凯宋小双孙海珍
- 关键词：白腐菌木质素降解酶
