博士科研启动基金(无)
- 作品数：1 被引量：8H指数：1
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- 兜兰ITS-PCR反应体系的建立及优化被引量：8
- 2012年
- 为优化兜兰ITS-PCR反应体系,以兜兰属植物为试材,用改进的CTAB法提取总DNA,并采用单因子试验设计,对影响兜兰DNA ITS-PCR扩增反应的主要因素即Taq DNA聚合酶的用量、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物退火温度、模板DNA用量和引物浓度等进行优化研究,建立兜兰最佳ITS扩增反应体系。结果表明:最佳反应体系为25μL体系中,添加10×PCR buffer 2.5μL、Taq DNA酶1.25U、Mg2+1.5mmol/L、dNTP 0.15mmol/L、引物0.6μmol/L和模板DNA 40ng,反应程序为94℃预变性4min,1个循环;94℃变性30s,54℃退火45s,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸7min后终止反应,4℃保存。利用此反应体系可得到预期大小的ITS基因片段。
- 陈业张玉晶李娅迪江辉沈文华关萍
- 关键词：兜兰基因组DNA
