重庆市自然科学基金(2007BB5288)
- 作品数：6 被引量：6H指数：1
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- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VEGF165质粒转染对骨髓内皮祖细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2019年
- 目的探讨脂质体介导pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染骨髓血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对EPCs增殖的影响。方法体外分离、培养EPCs、免疫组织化学及细胞流式仪鉴定EPCs,转染VEGF165后,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮祖细胞中VEGF165mRNA的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测EPCs培养上清液中VEGF蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测VEGF165质粒转染后对EPCs的影响。结果EPCs表达CD34、CD133及KDR细胞表面标志,PCR后凝胶电泳显示pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组在576bp处可见有明显条带,pcDNA3.1(+)空质粒转染组和未转染组可见微弱的电泳带。ELISA检测结果表明pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组VEGF165水平较其他两组高,MTT显示VEGF165质粒转染可促进EPCs增殖。结论EPCs可成功转染VEGF165基因,并促进EPCs增殖,为治疗勃起功能障碍提供实验依据。
- 杨钰兴肖明朝
- 关键词：内皮祖细胞转染
- pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染骨髓内皮祖细胞后VEGF165的表达
- 2010年
- 目的:培养和鉴定大鼠内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs),观察pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染大鼠骨髓内皮祖细胞后内皮细胞生长因子165(Vascular endot-helial growth fator-165,VEGF165)的表达。方法:体外培养内皮祖细胞,以免疫细胞化学法检测其表面抗原(CD34、CD133、KDR)的表达。通过pcDNA3.1(+)质粒转染VEGF165后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测内皮祖细胞培养上清液中VEGF蛋白的水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮祖细胞中VEGF165 mRNA的表达。结果:免疫细胞化学检测表明培养的细胞为大鼠内皮祖细胞,PCR后凝胶电泳显示pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组在576bp处可见有明显条带,pcDNA3.1(+)空质粒转染组和未转染组可见微弱的电泳带位于500bp与600bp之间,约576bp大小。ELISA检测结果为pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组上清液中VEGF165水平为(175.8±10.7)pg/ml,pcDNA3.1(+)空质粒组为(10.5±1.6)pg/ml,未转染组为(9.3±1.3)pg/ml。结论:内皮祖细胞体外培养有微量VEGF165表达,应用pcDNA3.1(+)/VEGF165载体转染,可使SD大鼠内皮祖细胞高效表达VEGF165。
- 杨钰兴肖明朝苟欣邱明
- 关键词：内皮祖细胞转染
- pcDNA3.1(+)-VEGF165载体的构建及表达蛋白特性分析
- 2010年
- 构建含人VEGF165基因的重组真核表达质粒,并对其表达蛋白特性进行初步分析。将合成的VEGF165基因序列克隆至pCR2.1-TOPO载体,测序鉴定证实基因碱基序列无误后,再克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建成pcD-NA3.1(+)-VEGF165重组质粒。利用DNAstar软件分析基因序列并翻译成氨基酸序列,再用ExPASy protscale和Protean软件分析其疏水特性、蛋白二级结构。经基因测序、酶切鉴定和PCR鉴定证实pcDNA3.1(+)-VEGF165重组质粒构建成功。Ex-PASy protscale和Protean软件分析表明VEGF165蛋白具有较好的水溶性。本研究为VEGF165的基因治疗应用和VEGF165蛋白直接治疗勃起功能障碍奠定了基础。
- 邱明肖明朝苟欣杨钰兴
- 关键词：血管内皮生长因子基因克隆
- 糖尿病性勃起功能障碍基因治疗研究进展被引量：3
- 2009年
- 勃起功能障碍（erectile dysfunction，ED）是指多种原因造成的阴茎海绵体血液充盈不足，致阴茎不能正常增大勃起，完成满意的性交，是糖尿病常见的并发症之一。有报道糖尿病性勃起功能障碍（diabetic erectile dysfunction，DMED）发病率高达75％，比非糖尿病者高3倍，并随年龄和病程增长明显增加。患有10年以内糖尿病病史者，50％以上合并有ED，且DMED患者比普通ED症状更严重。
- 邱明肖明朝苟欣杨钰兴
- 关键词：糖尿病性勃起功能障碍基因治疗阴茎海绵体ED患者非糖尿病者充盈不足
- 勃起功能障碍的干细胞治疗研究被引量：1
- 2009年
- 勃起功能障碍（erectiledysfunction，ED）是指阴茎不能持续勃起或虽能勃起但不能维持勃起而无法达到满意性生活的状况，病程至少3个月以上。定义中的性生活“满意”，指阴茎不仅能勃起足以插入阴道而且还要维持一定的时间。ED发病率较高，1995年全世界约有1．52亿男性患者，估计2025年将有3．22亿。
- 杨钰兴肖明朝苟欣邱明
- 关键词：勃起功能障碍干细胞治疗持续勃起发病率阴茎
- 体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞及其生物学特性鉴定被引量：1
- 2009年
- 背景:现阶段急需建立一种稳定的体外分离培养内皮祖细胞的方法,骨髓中内皮祖细胞的含量丰富,增殖能力强,而且容易获得,操作简单。目的:拟在体外分离培养大鼠骨髓内皮祖细胞,并对其生物学特性进行鉴定。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-08/12在重庆医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料:清洁级2周龄SD大鼠20只,由重庆医科大学实验动物中心提供。方法:无菌条件下分离大鼠股骨和胫骨,用预冷至4℃的0.01mol/L磷酸盐缓冲液冲洗骨髓腔,以密度梯度离心法收集单个核细胞层,含体积分数为20%胎牛血清的M199培养液重悬细胞,制成单细胞悬液后进行细胞计数,按1×109L-1浓度接种到预先用纤维连接蛋白包被的培养瓶中,37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度恒温培养。主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,免疫细胞化学检测内皮祖细胞表面特异性抗原CD133、内皮祖细胞表面抗原CD34和血管内皮生长因子受体KDR的表达,并进行流式细胞仪定量分析和细胞生长曲线分析。结果:新分离获得的骨髓单个核细胞为小圆形,培养4d后贴壁细胞呈"集落"样生长,中间为圆形贴壁细胞,外周梭形细胞较多,传代后梭形细胞首尾相连,呈"毛细血管"样排列。培养第4,7,10,14天贴壁细胞CD34,KDR,CD133均呈阳性表达,CD133阳性细胞第10天时开始减少。流式细胞仪检测结果显示,CD133/KDR双阳性细胞率逐渐升高,10d时达峰值,随后下降。KDR阳性细胞率随培养时间的延长而逐渐升高。原代细胞生长曲线显示细胞在第3～6天处于指数生长期,贴壁细胞大量增殖,呈"集落"样生长。结论:采用密度梯度离心法可成功从SD大鼠骨髓中分离获得内皮祖细胞,加入M199培养液后能够贴壁增殖,并可以分化为内皮细胞。
- 邱明肖明朝苟欣杨钰兴
- 关键词：内皮祖细胞生物学特性
