国家公益性行业科研专项(200903005)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 相关作者：柳学周徐永江王珊珊王妍妍史宝更多>>
- 相关机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所上海海洋大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家鲆鲽类产业技术体系建设项目国家公益性行业科研专项留学人员科技活动项目择优资助经费更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 半滑舌鳎膜孕激素受体基因克隆与组织表达分析被引量：8
- 2013年
- 采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,首次获得全长为1319bp的半滑舌鳎膜孕激素受体(mPRα)的cDNA序列;将推断的氨基酸序列与其他物种mPRα氨基酸序列进行多重比较分析,发现存在7个跨膜区域。使用MEGA4.0临位相联法和ClustalX方法对mPRα的氨基酸序列进行聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎mPRα与漠斑牙鲆、大西洋绒须石首鱼以及青鳉等鱼类的mPRα聚为一支,亲缘关系较近,相似度较高,分别为94%、93%和90%;而与高等哺乳动物人和牛相似性均为53%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析了mPRαmRNA在性成熟雌性半滑舌鳎不同组织的表达,结果表明,mPRαmRNA组织表达具有广泛性,但表达量存在差异,在脑、肾、脾和卵巢等组织表达丰富,在肝、胃和肌肉组织表达较弱。
- 史宝李晓晓柳学周徐永江王珊珊刘芝亮王妍妍
- 关键词：半滑舌鳎基因克隆
- 半滑舌鳎促性腺激素α亚基cDNA的克隆及组织表达特征被引量：5
- 2013年
- 采用同源克隆和末端快速扩增（RACE）方法,从半滑舌鳎脑垂体中克隆了促性腺激素α亚基（CGα）全长cDNA（GenBank序列登录号：JQ364953）.半滑舌鳎CGα基因全长685bp,其开放阅读框384bp,编码含127个氨基酸的蛋白,N端33个氨基酸为信号肽.半滑舌鳎CGα成熟肽与其他脊椎动物CGα成熟肽结构特征相似,具有10个半胱氨酸残基和两个N-糖基化位点.CGα成熟肽序列分析表明,半滑舌鳎CGα与鲽形目和鲈形目鱼类CGα同源性为60％～70％,与鲤形目鱼类CGα同源性为55％～60％.实时荧光定量RT-PCR结果表明,半滑舌鳎CGα mRNA在被检测的12个组织中均有表达,除头肾和脾脏、脾脏和肝脏间表达量差异不显著外,其他组织间表达量差异显著（P＜0.05）;CGα mRNA在垂体组织中大量表达,其次是鳃、肾脏、肌肉、卵巢和脑组织,而在心脏、头肾、肝和脾等组织中表达量很低.本研究为进一步探讨促性腺激素在半滑舌鳎繁殖生理中的作用机制奠定基础.
- 李晓晓柳学周史宝徐永江王珊珊刘芝亮王妍妍
- 关键词：半滑舌鳎CDNA克隆
- 真鲷精子诱导漠斑牙鲆减数雌核发育被引量：5
- 2011年
- 采用紫外线（UV）灭活的冷冻真鲷（Pagrosomus major）精子激发漠斑牙鲆（Paralichthys lethostigma）卵子发育。冷冻真鲷精子适宜的UV灭活剂量为72 mJ/cm^2, 随着处理时间延长, 胚胎的孵化率呈现哈特维希效应, 其中40s灭活组胚胎孵化率达到最高[（29±1.9）%], 单倍体率100%。利用冷休克法抑制卵子第二极体排出, 成功获得雌核发育二倍体仔鱼。冷休克处理温度为0-2℃, 处理起始时间3min、持续时间45min时, 雌核发育二倍体胚胎的孵化率最高, 达（9.4±0.71）%, 获得批量雌核发育仔鱼。雌核发育仔鱼经流式细胞仪和染色体倍性鉴定, 均为二倍体（2n=48）, 未发现单倍体和非整倍体现象。雌核发育二倍体组和单倍体组与正常二倍体组组孵化时间差异显著, 分别历时64h59min和55h49min。雌核发育二倍体仔鱼与正常二倍体仔鱼形态特征差异不显著（P〉0.05）, 单倍体仔鱼明显畸形。研究表明, 采用适宜的紫外线剂量灭活的冷冻真鲷精子可成功诱导漠斑牙鲆雌核发育, 获得雌核发育二倍体后代, 研究结果可为漠斑牙鲆全雌化苗种生产提供技术和理论依据。
- 柳学周宁鑫徐永江赵明李春广李军
- 关键词：漠斑牙鲆雌核发育冷休克胚胎发育
- 半滑舌鳎促滤泡激素基因全长cDNA的克隆与组织表达分析被引量：2
- 2013年
- 从半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis Günther脑垂体中提取总RNA，利用RT-PCR和RACE技术首次克隆得到半滑舌鳎促滤泡激素（FSH）基因全长cDNA序列。半滑舌鳎FSHcDNA全长为541bp，开放阅读框为393bp，编码130个氨基酸（GenBank序列登录号：JQ277933）。发现一个N-糖基化位点：24～27NTT。与其他脊椎动物的FSH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明，半滑舌鳎FSH与鲽形目和鲈形目鱼类FSH同源性为42％～49％，与鲤形目和高等脊椎动物FSH同源性为27％～319/5。用MEGA4．0软件构建了NJ树，获得的进化树表明，半滑舌鳎FSH与其他鱼类FSH聚类，亲缘关系较近。实时荧光定量组织表达分析表明，FSHmRNA除在垂体中大量表达外，其他组织也有表达，尤以脑、性腺表达量较高。半滑舌鳎FSHmRNA在垂体以外组织中的广泛表达，暗示FSH可能具有广泛的生理功能。
- 王珊珊柳学周史宝温海深徐永江李晓晓刘芝亮王妍妍
- 关键词：半滑舌鳎CDNA克隆实时荧光定量PCR
