北京市自然科学基金(6052014)
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
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- 相关机构：中国农业大学军事医学科学院中央民族大学更多>>
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- 利用SYBR Green检测衣原体Real-Time PCR方法的建立被引量：2
- 2006年
- 利用SYBR Green建立了检测种特异性衣原体的Real-Time PCR方法。本方法应用衣原体种特异性的高度保守特异引物，能够扩增627bp特异片段；使用定量标准基因组DNA，本方法能准确检测最少250fg衣原体DNA。Real-TimePCR方法与免疫荧光方法的检测结果表明：检测4种衣原体临床样本，Real-TimePCR敏感性均在96％～98%；特异性均为100％；这两种方法符合率达97％以上（n=60）；批内和批间重复性试验结果表明，本方法具有良好的准确性。本方法的建立对于快速、准确检测临床样本种特异性衣原体提供了一种切实有效的方法。
- 杨建民郝永新赵德明何诚
- 关键词：SYBR衣原体REAL-TIMEPCR
- 猪流产嗜性衣原体POMP90蛋白的原核表达及反应原性分析被引量：1
- 2008年
- 设计特异性引物进行PCR扩增,获得猪流产嗜性衣原体CP/12株的pomp90基因,将其定向克隆到原核表达载体pGEX-KG中。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌E.coliBL21,用IPTG进行诱导表达,获得高效表达的融合蛋白。采用Western-blot和间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的反应原性,初步选择其最佳包被浓度为1μg/mL。
- 梅仕林孟宪荣栗绍文何诚杨琪喻翠翠张望毕丁仁
- 关键词：流产嗜性衣原体原核表达反应原性
- 猪流产衣原体CP/12株omp-1基因的克隆与表达被引量：4
- 2005年
- 为观察重组MOMP蛋白的免疫活性,揭示omp1基因(编码MOMP蛋白)在猪流产衣原体诊断和防治中的作用,用PCR法扩增猪流产衣原体omp1基因,将特异性扩增片段克隆入pMD18T载体,测序比较分析序列后确认为目的基因,与GenBank中4株流产衣原体omp1基因和氨基酸序列的相似性均达99%,与其他各型衣原体代表株的相似性为71%～88%,氨基酸序列也有较大差异。将omp1基因亚克隆到pET32a表达载体上,再对重组表达载体转化BL21(DE3)表达宿主菌,以IPTG诱导该重组菌,结果显示该重组菌表达了融合蛋白;用猪流产衣原体多克隆抗体对表达的重组MOMP蛋白进行Westernblot试验,结果显示该重组MOMP蛋白具有结合特异性抗体的活性。
- 杨琪何诚雷鸣杨利朱虹端青
- 关键词：主要外膜蛋白克隆
- 猪流产嗜性衣原体间接ELISA抗体检测方法的建立
- 目的在于获得重组猪流产嗜性衣原体(CA)POMP903蛋白,并以此作为包被抗原初步建立间接ELISA抗体检测方法,为开发猪CA ELISA诊断试剂盒奠定基础。根据国外研究结果和GenBank登录的CA S26/3株pom...
- 梅仕林何诚栗绍文孟宪荣毕丁仁喻翠翠张望
- 关键词：流产嗜性衣原体原核表达间接ELISA
- 文献传递
- 猪流产嗜性衣原体omp-1基因的重组质粒与重组蛋白免疫组合效果被引量：3
- 2007年
- 为增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫措施进而筛选出高效新型分子疫苗,本实验将猪流产嗜性衣原体omp-1基因克隆入pcDNA3.1(+)载体构建DNA疫苗,初次和二次免疫分别以核酸/重组蛋白(DNA/r-MOMP)、重组蛋白/核酸(r-MOMP/DNA)、重组蛋白+核酸/重组蛋白+核酸(r-MOMP+DNA/r-MOMP+DNA)、核酸+核酸(DNA/DNA)和重组蛋白+重组蛋白(r-MOMP/r-MOMP)5种组合接种BALB/c小鼠,同时以载体和弱毒为对照。二次免疫后14 d以ELISA和T淋巴细胞增殖实验检测特异性体液免疫和细胞免疫应答水平。结果显示核酸与重组蛋白同时免疫可以诱导产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,而DNA/r-MOMP组合的细胞免疫和体液免疫水平高于r-MOMP/DNA组合,单独免疫DNA组或r-MOMP都不能获得好的细胞和体液免疫。
- 杨琪李建平杨建民李军杨利何诚
- 关键词：重组质粒重组蛋白免疫小鼠
- 猪流产嗜性衣原体omp-1基因噬菌体疫苗免疫效果评价被引量：4
- 2008年
- 本试验对猪流产嗜性衣原体omp-1基因噬菌体DNA疫苗进行了免疫效果评价。将猪流产嗜性衣原体omp-1基因插入λNM1149噬菌体载体构建成DNA疫苗,筛选获得阳性噬斑;使用重组的噬菌体疫苗按250 ng/只分别在第2、16和30天三次免疫Balb/c小鼠,以1B弱毒活疫苗(10μg/只)、噬菌体空载体(250 ng/只)为对照组。免疫后分别以ELISA法测定小鼠抗体以及MTT法检测淋巴细胞刺激指数。结果表明重组λ-MOMP噬菌体疫苗虽然未能在短期内(免疫第29天)激发高水平的抗体(1B组免疫第29天抗体D450=0.347,重组噬菌体组免疫第29天抗体D450=0.19;1B组免疫第43天抗体D450=1.12,重组噬菌体组免疫第43天抗体D450=0.38),但能诱导抗体水平逐渐升高(重组噬菌体组免疫前D450=0.086,免疫第29天抗体D450=0.19,免疫第43天抗体D450=0.38),而且显著性诱导T淋巴细胞的增殖(1B组免疫第29天SI=11.67,重组噬菌体组免疫第29天SI=15.8)。相反弱毒疫苗1B株能激发高水平的抗体,但细胞增殖指数显著低于噬菌体疫苗(1B组免疫第29天细胞增殖指数SI=11.67,重组噬菌体组免疫第29天细胞增殖指数SI=15.8)。试验显示λNM1149噬菌体载体具有潜在增强猪流产嗜性衣原体omp-1基因的免疫效果。
- 刘伟张畅张发明李应超杨君敬凌勇袁吉磊何诚
- 关键词：主要外膜蛋白免疫流产嗜性衣原体DNA疫苗
