转基因生物新品种培育专项(2011ZX08005-004)
- 作品数：5 被引量：24H指数：3
- 相关作者：叶武威吴燕民田亮亮郭琪王晋成更多>>
- 相关机构：中国农业科学院生物技术研究所中国农业科学院棉花研究所深圳市农科集团有限公司更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 杜氏盐藻甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因在棉花中的转化及分子检测被引量：2
- 2015年
- 根据NCBI核酸数据库中杜氏盐藻耐盐基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(dunaliella salina glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,Ds GAPDH)的c DNA全长序列信息,本研究利用RT-PCR技术扩增克隆该基因,获得完整全长为1 131 bp并编码376个氨基酸的多肽的ORF序列。生物信息学分析表明:Ds GAPDH编码的蛋白与拟南芥、蒺藜苜蓿、玉米和葡萄等物种高度同源,分别达到90%、92%、96%和97%。构建的系统发育树结果显示,该基因编码的蛋白与团藻中该蛋白的亲缘关系最为接近。该蛋白主要由四种二级结构即α-螺旋、β-折叠、转角和无规则卷曲等组成。构建p BI121-Ds GAPDH植物表达载体,以非抗虫棉F12A、F12B和HU-749513为材料,利用基因枪活体技术转化棉花花粉,并对T0代种子进行分子检测和相关序列验证,成功获得两株阳性转基因植株,为基因枪活体转化技术研究奠定了一定的实践基础,同时也为棉花耐盐机制的研究提供了新材料。
- 孔静静陆许可赵小洁阴祖军王帅王德龙王俊娟樊伟丽张德超张天豹叶武威
- 关键词：杜氏盐藻陆地棉分子检测
- 利用植物生产药用蛋白的进展、局限及应对策略被引量：6
- 2013年
- 以植物作为生物反应器生产药用蛋白具有廉价、安全、易于存储和运输等优点。越来越多的动物实验及临床试验研究结果显示,植物表达的外源药用蛋白,比如抗体、抗原、细胞因子等都能诱导机体产生免疫应答反应,但目前实现商业化的却极少。限制其推广应用的主要原因是外源蛋白在植物中的表达量较低,免疫原性较差。通过表达系统的选择,载体优化,使用免疫佐剂等方法可以突破这些障碍。本研究综述了近年来利用植物表达药用蛋白的进展,讨论了限制其推广应用的因素及解决策略,并对利用植物生物反应器生产药用蛋白的前景进行了展望。
- 袁蓓李京生吴燕民
- 关键词：植物生物反应器药用蛋白表达量免疫原性
- 亲本未知的棉花F_1杂种及其F_2单株的SSR分子鉴定被引量：5
- 2012年
- 在棉花品种区域试验中,杂交种纯度的分子检测一直是比较困难的课题,尤其是在亲本未知的情况下,杂交种的纯度的分子检测研究尚未见报导。本研究利用17对SSR核心引物对参试品种邯6402的F1进行纯度检测,SSR标记纯度达100%,17对引物中有12对呈现共显性,5对引物为非共显性。同时,构建了F1的SSR指纹图谱,以此可以鉴定邯6402的真实性。继续用这些引物对F2的44株棉苗进行检测,F2群体棉苗均有不同程度的分离,绝大部分基因型为杂合体,许多位点显示共显性,且共显性位点互不相同,在分子水平上验证了F2群体的杂合状态。应用这一套SSR核心引物,能够在室内鉴定棉花杂交种的真实性和纯度,还能够鉴别是F1杂交种还是F2分离群体,比对杂交种的指纹图谱能检测出F1中掺杂成分。
- 付小琼叶武威
- 秋茄ERF抗逆转录因子的克隆及其功能分析被引量：1
- 2013年
- 利用RACE(Rapid-Amplification of cDNA Ends)技术,以深圳红树林的秋茄(Kandelia obovata)作为材料,克隆一个ERF类转录因子基因cDNA全长序列,命名为KcERF(Genebank,序列号:GU593721)。序列分析结果表明,该基因完整开放阅读框873bp,编码290个氨基酸。比对结果显示,有一个典型的AP2结构域,空间结构具有1个α螺旋和3个β折叠,属于AP2/EREBP家族中的ERF类转录因子。KcERF亚细胞定位在细胞核中,其编码蛋白在酵母中有转录激活活性。此外,KcERF受到高盐胁迫后,转基因型烟草(Nicotiana tabacum)的株高和叶面积、含水量、MDA含量、可溶性糖含量、电导率均表现出对盐的耐受作用,暗示本研究结果可以为转基因耐盐棉花(Gossypiumspp.)和牧草的培育提供新的基因来源。
- 刘博欣赵杨敏庞俊峰孙占敏尉亚辉吴燕民
- 关键词：秋茄ERF转录因子基因克隆逆境
- 过量表达棉花GhSAP1提高转基因烟草的耐盐性被引量：10
- 2014年
- 【目的】SAP(stress-associated protein)是一类涉及胁迫应答和调控的锌指蛋白。克隆并分析其对逆境胁迫应答的反应,为棉花抗逆育种提供候选基因。【方法】通过电子克隆方法并经RT-PCR验证获得棉花锌指蛋白基因GhSAP1,将带有目的基因的载体质粒通过PEG介导转化棉花叶肉原生质体细胞,瞬时表达分析其编码蛋白的特性及亚细胞定位信息。通过qRT-PCR技术分析目标基因的组织表达特征及非生物胁迫条件下的表达特性。通过农杆菌介导叶盘转化法,经组织培养获得转基因烟草进行异位表达,检测其与抗逆相关的生理指标,证明其提高植物抗逆能力。【结果】GhSAP1 ORF长度为543 bp,编码一条含180个氨基酸残基的多肽。其理论等电点8.97,分子量19.3 kD,具有典型的A20/AN1锌指结构域。亚细胞定位显示该基因编码的蛋白定位于细胞核上。不同组织器官表达分析显示,GhSAP1在根、茎、叶中的表达量高,而在开花后5 d的胚珠中表达量很低。GhSAP1受盐胁迫诱导,高盐处理2 h后表达量最高。利用含100μg·mL-1 Kan的培养基进行抗性筛选转基因后代,结合目标基因的PCR与RT-PCR验证,获得转GhSAP1的转基因烟草阳性株系10个。目标基因GhSAP1均能在烟草基因组中整合并异位过量表达。随机选择3个转基因烟草株系,盐胁迫处理显示,发芽一周的种子在含200 mmol·L-1 NaCl培养基上胁迫12 d,转基因植株幼苗平均成活率为81.7%,比非转基因对照植株增加近3倍,其平均根长为3.05cm,极显著高于非转基因对照。利用GhSAP1表达较高的L2纯系进行成株期烟草盐胁迫处理30 d,转基因烟草后代的SOD活性和可溶性总糖含量增幅分别为23.89 U·g-1 FW和8.37%,均显著高于非转基因对照;与未胁迫处理相比,转基因植株的叶绿素含量降低幅度仅为0.17 mg·g-1 FW,而非转基因对照降低了0.39 mg·g-1 FW;盐胁迫处理后,转基因植株的MDA含量增幅为7.42
- 丁林云张微王晋成田亮亮李妮娜郭琪杨淑明何曼林郭旺珍
- 关键词：棉花超表达转基因烟草盐胁迫
