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家兔IL-10基因启动子多态性与免疫指标相关性探讨: 2014年; 利用PCR-SSCP技术对4个家兔群体IL-10基因启动子序列进行遗传多样性研究,并探讨其与部分血清免疫指标的相关性。根据克隆的IL-10基因启动子序列设计2对特异性引物,采用PCR-SSCP技术对新西兰白兔(NZW)、福建黄兔(F-Y)、新西兰白兔(♂)×福建黄兔(♀)(简称新黄兔,N-F)、福建黄兔(♂)×新西兰白兔(♀)(简称黄新兔,F-N)这4个家兔群体IL-10基因的启动子序列进行多态性检测。结果表明:在IL-10基因启动子序列上检测到3对等位基因,5种基因型,存在3个SNP位点;4个家兔群体在IL-10基因启动子序列内存在遗传多样性,不同家兔群体在遗传基础上存在一定差异。4个家兔群体除了福建黄兔外,其他均处于哈代温伯平衡。经研究发现,福建黄兔作为父本的杂交后代更能够遗传优势性状。; 秦立志万小颖施丽娟王文洲朱慈根潘雨来吴信生; 关键词：IL-10 基因启动子多态性家兔

白细胞介素-10研究进展被引量：11: 2013年; 白细胞介素-10(IL-10)是一种重要的抑炎性细胞因子,主要由Th2类细胞产生,抑制IFN-γ等细胞因子的产生。IL-10对机体的免疫功能和炎症过程均具有重要的调节活性,并且国内外最新研究均表明IL-10基因的多态性与多种疾病相关。本文综合近年来国内外有关IL-10的应用研究状况作一综述,阐述其在不同疾病方面的应用。; 万小颖李挺秦立志吴信生; 关键词：IL-10 免疫多态性疾病

兔IL-10重组基因表达及其亚细胞定位的研究被引量：1: 2013年; 本研究旨在克隆新西兰白兔白细胞介素10(IL-10)基因的cDNA,并探讨其生物信息学功能,进一步通过增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白实现该基因亚细胞水平的表达定位。实验采用RT-PCR方法克隆兔IL-10基因的cDNA,初步进行生物信息学分析,构建含有EGFP报告基因的融合表达载体pEGFP-IL-10。脂质体(LTX)介导基因转染NIH-3T3细胞,48 h后在荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。结果表明:实验成功克隆出兔IL-10基因537 bp长的完整编码区(CDS),共编码178个氨基酸,GenBank登录号为NM_001082045;IL-10蛋白的分子量为20.15 ku,理论等电点为8.20;信号肽区域预测结果显示,IL-10蛋白含有一小段信号肽序列,属于分泌型蛋白,并且信号肽酶的切割位置在第21和第22个氨基酸之间;荧光倒置显微镜观察结果发现,融合蛋白在细胞质中表达,而转染pEGFP-C1后荧光蛋白均匀分布于整个细胞;RT-PCR检测mRNA表达明显。结果显示,融合表达载体pEGFP-IL-10构建成功,并在细胞中明显表达,为进一步研究IL-10的生物学功能奠定基础。; 万小颖李挺王文洲施丽娟李碧春吴信生; 关键词：绿色荧光蛋白亚细胞定位

兔IL-10基因外显子4突变对蛋白结构和功能的影响被引量：1: 2014年; 本研究针对兔IL-10基因外显子4中的碱基突变,运用生物信息学比较分析野生型和突变型蛋白的理化性质和结构。结果表明,外显子4中碱基T的插入并未改变IL-10蛋白的理化性质、二硫键、跨膜结构、信号肽、糖基化位点以及二级结构,但是导致磷酸化位点减少、三级结构改变,从而影响IL-10蛋白的功能并可能对机体疾病的抗病性产生影响。; 万小颖冒留留沈杰秦立志施丽娟王文洲潘雨来吴信生; 关键词：IL-10基因碱基突变

兔白细胞介素-10基因的克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：5: 2013年; 白细胞介素-10(IL-10)是一种多功能的细胞因子,参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达IL-10基因,以制备兔IL-10多克隆抗体。运用RT-PCR技术从新西兰白兔脾脏总RNA中扩增IL-10基因,将该基因亚克隆入原核表达载体pET-32a并转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,融合蛋白经纯化后免疫豚鼠制备多克隆抗体,最后分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果表明:克隆得到了兔IL-10基因,大小为537bp,经核苷酸测序与GenBank已登录的基因序列(NM_001082045)相似性为99%;重组载体pET-IL-10构建成功;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶56 000,且具有很高的特异性。成功实现了兔IL-10基因的原核表达,并制备了豚鼠抗兔IL-10多克隆抗体,为深入研究兔IL-10基因的功能奠定了基础。; 万小颖秦立志施丽娟王文洲李挺李碧春吴信生; 关键词：克隆抗体制备

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江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(CXLX111027)