国家高技术研究发展计划(2002AA217021)
- 作品数：18 被引量：81H指数：6
- 相关作者：张嗣良储炬叶勤庄英萍李志敏更多>>
- 相关机构：华东理工大学军事医学科学院中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 重组人载脂蛋白AI米兰突变体在大肠杆菌中的可溶性表达
- 2005年
- 载脂蛋白AI米兰突变体(apoliproteinA_I_Milano ,AIM)是载脂蛋白AI的天然突变体,具有比载脂蛋白AI更强的抗动脉粥样硬化症的作用。将AIM基因N_末端的氨基酸密码子优化后,克隆至表达载体pET2 2b ,重组质粒转化BL2 1(DE3)宿主菌,用IPTG诱导表达。AIM以可溶形式表达,约占菌体总蛋白的38%。表达产物经ButylSepharose 4F .F疏水层析和QSepharoseH .P .阴离子交换层析后,再用Vivaspin2 0 (30 0 0 0MW)进行超滤,AIM单体的纯度达95 %以上。AIM单体与脂结合活性表明,AIM单体结合脂的速度比apoA_I慢,但结合脂的量比apoA_I高。这项研究为AIM的结构和功能,特别是临床应用研究奠定了基础。
- 黎明赵洪亮薛冲张伟张士猛刘志敏
- 人血清白蛋白-睫状神经营养因子突变体融合蛋白基因在毕赤酵母中的表达及表达产物的纯化和活性鉴定被引量：11
- 2005年
- 为了延长人睫状神经营养因子突变体的体内半衰期 ,将人血清白蛋白 (HSA)的C 末端和人睫状神经营养因子突变体AX15 (R13K)的N 末端通过一个 11个氨基酸的连接肽融合在一起 ,构建了融合蛋白HSA AX15 (R13K)。HSA AX15 (R13K)融合蛋白基因在巴斯德毕赤酵母中进行表达后通过阳离子交换层析、反向层析和凝胶过滤对表达产物进行了分离纯化。体外TF 1细胞存活实验表明与HSA融合并未影响AX15 (R13K)的生物学活性。体内动物实验表明HSA AX15 (R13K)融合蛋白的疗效比AX15 (R13K)更为持久 :每 3天注射一次 4 8mg kg的HSA AX15 (R13K)融合蛋白的治疗效果优于每天注射一次 1 6mg kg的AX15 (R13K)的治疗效果。HSA AX15 (R13K)融合蛋白不但可以减少用药次数 ,提高病人的顺应性 ,而且还可以减少用药量和血药浓度的波动 ,从而降低副反应 ,在临床应用上具有一定的优势。
- 赵洪亮薛冲熊向华张伟杨秉芬刘志敏
- 关键词：睫状神经营养因子巴斯德毕赤酵母
- 重组人载脂蛋白A-I_((米兰变体))的复性及纯化
- 2004年
- 目的 从大肠杆菌中获得载脂蛋白A I(米兰变体 ) 的包涵体 ,对包涵体进行复性、纯化 ,最终获得具有生物活性的载脂蛋白A I(米兰变体 ) 。方法 包涵体以尿素溶解后 ,以疏水层析法复性重组蛋白 ;以离子交换层析对其进一步纯化 ,并对所得的蛋白进行生物活性分析。结果 经复性纯化的蛋白纯度达 95 % ,体外生物活性检测显示其具有生物活性。结论 本法能快速有效地对目的蛋白进行复性、纯化 。
- 汪利俊丁满生郭美锦储炬庄英萍张嗣良谭小钉刘大涛
- 关键词：大肠杆菌载脂蛋白复性纯化包涵体
- 不同拷贝数及间隔肽序列对毕赤酵母分泌表达EXA的影响被引量：6
- 2008年
- 通过多拷贝串联表达，以及在分泌信号序列和目的蛋白N端之间插入几个氨基酸的间隔短肽，以提高exendin-4类似物串联体EXA在重组毕赤酵母中的分泌表达水平。实验结果表明：2～5个EXA串联插入均比单个EXA插入有利于提高表达水平，而4拷贝EXA串联体的表达产物较多滞留在胞内。在EXA的N端增加间隔肽可促进蛋白分泌，与不合间隔肽序列的4拷贝EXA串联表达载体相比，含有糖基化住点（NTTEEGEPK）和肠激酶识别位点（DDDDK）间隔肽的插入，使蛋白表达水平分别提高了4倍和9倍。
- 王晖钱江潮庄英萍储炬张嗣良
- 关键词：毕赤酵母分泌表达
- 重组Pichia酵母(Mut^S)发酵过渡阶段关键酶活分析被引量：4
- 2004年
- 重组Pichia酵母表达系统的发酵存在从利用甘油为碳源生长到利用甲醇为碳源表达外源蛋白的发酵表达过渡阶段。Pichia酵母过渡阶段碳源代谢途径关键酶酶活分析表明:甲醇诱导3hAOX2酶活为0,4h时突然增加到0.05U,继续诱导,酶活缓慢增加;在过渡阶段甲醛脱氢酶和6-P-葡萄糖脱氢酶分别增加了6.1倍、2.5倍,而丙酮酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶分别下降为原酶活的29.4%及16.4%,表明甲醇诱导后甲醇完全氧化代谢途径得到强化,而糖酵解途径和三羧酸循环途径代谢作用减弱。
- 胡光星郭美锦储炬杭海峰庄英萍张嗣良
- 关键词：代谢途径植酸酶
- Production of Human Epidermal Growth Factor in Fed-batch Culture of Acetate-tolerant Escherichia coli被引量：3
- 2007年
- Escherichia 关口 i DH5 的醋酸盐容忍的异种， DA19，被用于其表情在 phoA 的控制下面的人的表皮的生长因素(hEGF ) 的能分泌的生产倡导者。recombinant 细胞在化学上定义的媒介是有教养的，并且葡萄糖在生长和表示阶段期间以不同特定的预备率被增加。pH 在细胞外的 hEGF 生产上有重要效果，这被发现。细胞外的 hEGF 集中是 75.5mg .L ? 1，在 pH 到达的水平的 5.2 褶层 7.0，尽管更多的醋酸盐被生产。氮来源在以后的生长阶段被限制。铵的补充支持了磷酸盐的消费并且减少了时间用尽磷酸盐，而是细胞外的 hEGF 生产没有铵的补充，类似于那。
- 韩云李志敏杜鹏甘人宝叶勤
- 关键词：人表皮生长因子
- 载脂蛋白A-Ⅰ抗动脉粥样硬化的研究进展被引量：14
- 2003年
- 载脂蛋白A Ⅰ是HDL最主要的结构成分 ,是卵磷脂胆固醇酰基转移酶的主要激活剂。它决定了HDL的代谢和在血浆中的浓度。实验已经证明 ,载脂蛋白A Ⅰ具有抗动脉粥样硬化症的功能。在这里阐述了载脂蛋白A Ⅰ的结构和制备 ;载脂蛋白A Ⅰ和HDL的关系以及它在抗动脉粥样硬化方面的作用和可能的机理 :胆固醇的逆向转运。
- 黎明刘志敏
- 关键词：载脂蛋白A-I动脉粥样硬化高密度脂蛋白卵磷脂胆固醇酰基转移酶
- 基因atpA、purHD和ndh的过量表达对大肠杆菌DH5α生长的影响被引量：2
- 2008年
- 【目的】理解大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株DA19在基本培养基中生长和乙酸积累差异的机理。【方法】根据前期针对两个菌株蛋白质组和培养中物料及能量平衡的分析,通过PCR分别扩增大肠杆菌DH5α及DA19的atpIBEFHAGDC基因、purHD基因和与NADH氧化代谢相关ndh基因及其各自的调节区,以及NADH脱氢酶Ⅰ基因(nuoA-N)的调节区。将atpA、purHD和ndh基因分别克隆到载体pTrc99a中,转化DH5α,研究基因过量表达对生长的影响。【结果】测序结果表明两个菌株的这些DNA序列与公布的大肠杆菌K-12的相应序列完全一致,在DH5α菌株中分别过量表达atpA、purHD或ndh基因可以在一定程度上改善菌体的生长。【结论】过量表达purHD或ndh基因比过量表达atpA基因的效果更好,但与DA19的生长相比仍然存在较大差距,反映了代谢全局调节的重要性。
- 张艳军张晓云李志敏叶勤
- 关键词：大肠杆菌ATPA
- 腺嘌呤对大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株DA19生长和代谢的影响被引量：3
- 2007年
- 大肠杆菌DH5α和DA19在碳源限制的基本培养基中进行分批培养和氮源限制的基本培养基中进行连续培养,发现添加腺嘌呤会使DH5α生长改善,乙酸产生减少;对DA19的生长和代谢影响不明显。连续培养细胞的蛋白质组分析结果显示:添加腺嘌呤后DA19 purH表达水平降低,而DH5α purH表达水平不变,表明DH5α嘌呤核苷酸从头合成能力差;DH5α yddS表达上调,gnd表达水平稍有提高,细胞生长改善。
- 张晓云张艳军李志敏夏月兰叶勤
- 关键词：腺嘌呤乙酸双向电泳
- 中心组合优化重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸用发酵培养基被引量：7
- 2006年
- 利用统计学实验设计方法优化了重组毕赤酵母生产S-腺苷甲硫氨酸（sAM）的发酵培养基。采用中心组合设计和响应面分析对诱导相培养基中硫酸铵、甲醇和L-甲硫氨酸三个关键因素的浓度进行了优化，使SAM在全合成培养基上的摇瓶产量提高了60％，达到1．9g／L，并考察了胞内SAM合成酶活性的变化与SAM积累的相关性。
- 朱闪储炬胡晓清庄英萍张嗣良袁中一
- 关键词：S-腺苷甲硫氨酸培养基优化重组毕赤酵母SAM合成酶
