陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项(2010ZDKG-71)
- 作品数：5 被引量：33H指数：3
- 相关作者：张彦明郭抗抗刘伟董玲娟程敏更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪圆环病毒2型疫苗研究进展被引量：9
- 2012年
- 猪圆环病毒2型(PCV-2)是一种猪疾病综合征的病原体,这种疾病综合征在欧洲被称为猪圆环病毒病(PCVD),在美国被称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD),可导致巨大的经济损失。基于PCV-2a的灭活疫苗和亚单位疫苗在市场上已有销售,这些疫苗为降低商品化猪群的死亡率、增加其生长指数提供了有力的技术支持。从2003年开始,伴随着临床症状的加剧,全球猪群中PCV-2流行亚型逐渐由PCV-2a变成PCV-2b。虽然现在市售的基于PCV-2a的疫苗可以提供对PCV-2b的交叉保护,但已研制出了基于PCV-2b的新型实验性疫苗,比如改良减毒活疫苗,这些新型疫苗可以提供更高的保护力,降低免疫成本。论文主要介绍现在市面上销售的PCV-2疫苗在实验和田间条件下的免疫效果,并对新型PCV-2疫苗的研究进行了展望。
- 徐磊宁蓬勃郭抗抗董平董福军张彦明
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪圆环病毒Ⅱ型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：8
- 2013年
- 【目的】建立一种能在临床上快速、准确检测猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)的TaqMan实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中已公布的PCV-2陕西分离株的全基因序列,在PCV-2的ORF2核苷酸序列的保守区域,设计合成1条TaqMan探针和1对特异性引物;利用设计的引物扩增ORF2部分基因并鉴定后,回收PCR扩增产物,连接pMD19-T载体,转化DH5α大肠杆菌,涂布Amp+琼脂平板,挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定后提取质粒,作为荧光定量PCR的标准品;以标准品为模板建立检测PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的灵敏度、稳定性和特异性进行评价;用建立的荧光定量方法对56份临床样品进行检测,并将检测结果与传统PCR方法进行比较。【结果】建立了PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线的斜率为-3.383,R2=0.998,具有良好的线性关系;重复性试验结果表明,该方法循环数阈值Ct的变异系数(CV)为0.86%～1.02%,具有良好的稳定性;敏感性检测结果表明,该方法的最低检测限度为5.06copies/μL;特异性检测结果显示,该方法对猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)的检测结果均为阴性,对PCV-2标准品的检测结果为阳性,说明该方法具有较好的特异性。临床样品的检测中,所建立的Taq-Man实时荧光定量PCR检测方法的检出阳性率较传统PCR方法高14.3%。【结论】成功建立了PCV-2的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,该方法可用于临床上对PCV-2的检测。
- 曹伟伟郭抗抗许信刚宁蓬勃刘伟程敏董玲娟徐磊高婉俊任敏
- 关键词：病毒检测
- 猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用被引量：3
- 2013年
- 根据PCV-1、PCV-2a和PCV-2b差异序列,设计了3对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以用于PCV检测及PCV-1、PCV-2a和PCV-2b分型的PCR方法。结果表明,三重PCR检测的最低敏感度可达4.87×107 copies/μL(PCV-1)、2.83×107 copies/μL(PCV-2a)和2.96×106 copies/μL(PCV-2b)。引物特异性良好,各引物之间没有交叉反应,对伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)检测均为阴性。应用该方法对采自陕西省的56份样品进行检测,PCV-1检出率57.14%(32/56),PCV-2a检出率1.78%(1/56),PCV-2b检出率42.86%(24/56),多重PCR检测结果与单PCR检测结果的符合率达99%以上,可用于猪圆环病毒的临床检测及流行病学监测等。
- 徐磊郭抗抗陈恒曹伟伟吕其壮宁蓬勃张彦明
- 关键词：猪圆环病毒1型三重PCR
- 猪瘟病毒实时定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2012年
- 为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方法。该方法的检测灵敏度可达每微升10个拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高出1个数量级;对标准品质粒检测的线性范围是1.0×109～1.0×101μL-1。对1.0×107、1.0×105、1.0×103μL-13种稀释度的标准品质粒进行重复试验,批内变异系数分别是0.30%、0.85%、0.43%,批间变异系数分别是0.81%、1.36%、0.63%,具有良好的重复性。应用该方法对45份临床样品进行检测,检出26份阳性样品,而常规PCR只检测出19份阳性样品,说明该实时定量PCR方法的敏感性高于常规PCR。可见,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可用于检测病料中的猪瘟病毒。
- 程敏郭抗抗张彦明何雷董玲娟李维维刘伟曹伟伟张渭东
- 关键词：猪瘟病毒实时定量PCRTAQ
- 猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：11
- 2012年
- 【目的】建立一种能检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)含量的荧光定量RT-PCR方法,为猪传染性胃肠炎(TGE)的诊断和防治提供技术支持。【方法】根据TGEV TH98株的N基因序列设计1对特异性引物,扩增出目的片段,连接克隆载体后构建质粒标准品;对荧光定量的循环条件进行优化,建立猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法,对其重复性、特异性进行检测,并与普通PCR检测方法进行比较,最后应用该方法对采自陕西杨凌周边的30份临床样品进行检测。【结果】成功构建了质粒标准品,建立了检测猪传染性胃肠炎病毒的荧光定量RT-PCR方法,该方法特异性高、重复性好、敏感性比普通PCR检测方法高2个数量级,对质粒标准品的线性检测范围为1.0×107～1.0×101拷贝/μL。用建立的检测方法对从陕西杨凌周边猪场采集的30份样品进行检测,检出4份阳性,与普通PCR检测方法符合率为100%。【结论】建立的TGEV荧光定量RT-PCR方法敏感性高、特异性好、省时省力,可以对猪传染性胃肠炎病毒进行快速检测。
- 董玲娟张彦明何雷程敏刘伟林鸷
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR
