中国博士后科学基金(20080430855)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 相关作者：杨俊兴陈兵花群义吕建强阮周曦更多>>
- 相关机构：深圳出入境检验检疫局华中农业大学云南出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 蓝舌病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2009年
- 用将纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了3株(1F5、4E5和6A1)可以稳定分泌抗BTV VP7特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的BTV免疫家兔,按常规方法制备BTV多抗。选用抗VP7单抗(1F5)包被ELISA板,用兔抗BTV多抗作为捕获抗体,建立了BTV双抗体夹心ELISA检测方法。用该ELISA方法分别检测BTV、鹿流行性出血病病毒、水疱性口炎病毒、赤羽病病毒、小反刍兽疫病毒阳性样品。结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性。用该ELISA和RT-PCR同时检测259份临床样品,ELISA的特异性和敏感性分别为99.1%和85.7%,两种方法的符合率为97.7%。该方法的建立为BTV的检测及蓝舌病的流行病学调查提供了有效工具。
- 杨俊兴花群义陈焕春卢体康吕建强秦智峰陶红林庆燕陈兵徐聪郭莹洁
- 关键词：蓝舌病病毒双抗体夹心ELISA单克隆抗体
- 鹿流行性出血病病毒VP7-ELISA抗体检测方法的建立被引量：2
- 2009年
- 以原核表达的鹿流行性出血病病毒(epizootic hemorrhagic disease virus of deer,EHDV)VP7蛋白为包被抗原,用HRP标记的兔抗羊IgG作为二抗,建立了检测EHDV群特异性抗体的间接ELISA方法(VP7-ELISA)。用VP7-ELISA方法检测EHDV阳性血清、其他病毒阳性血清及健康羊血清,结果表明,VP7-ELISA方法具有良好的特异性;用VP7-ELISA和琼脂扩散试验(AGID)检测EHDV阳性血清抗体效价,结果表明,VP7-ELISA的敏感性相当于AGID的8～16倍。用VP7-ELISA和AGID同时检测临床样品188份,VP7-ELISA的特异性和敏感性分别为95.9%和100%,两种方法的符合率为96.3%。表明VP7-ELISA可以代替AGID用于EHDV抗体检测。
- 花群义杨俊兴郭莹洁吕建强曾少灵秦智锋陈兵阮周曦董俊
- 关键词：酶联免疫吸附试验
- 鹿流行性出血病病毒双抗夹心ELISA方法的建立被引量：4
- 2011年
- 为建立鹿流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,用纯化的抗EHDV特异性单克隆抗体包被ELISA板,用兔抗EHDV IgG作为夹心抗体,IgG作为夹心抗体建立EHDV双抗夹心ELISA方法,并对该方法的特异性和敏感性进行了试验。用ELISA分别检测EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、水疱性口炎病毒(VSV)、赤羽病病毒(AKV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)样品,用RT-PCR作对照。结果表明,ELISA具有良好的特异性和敏感性。用夹心ELISA和RT-PCR同时检测128份参考样品,结果表明夹心ELISA的特异性和敏感性分别为100%和96.3%,两种方法的符合率为99.2%。本研究结果为EHDV检测及鹿流行性出血病流行病学调查提供了有效的工具。
- 陈兵李健波杨俊兴阮周曦孙洁张彩虹刘建利花群义周晓黎
- 关键词：双抗体夹心ELISA单克隆抗体
- 鹿流行性出血病病毒VP7基因的克隆及原核表达被引量：5
- 2009年
- 根据已经扩增的鹿流行性出血病病毒(EHDV)VP7基因序列,设计一对扩增VP7基因特异性引物,用RT-PCR从血清I型EHDV(EHDV-1)总RNA中扩增VP7基因,并将其克隆到原核表达载体pBAD/Thio中,构建了重组原核表达质粒pBAD/Thio-EHDV VP7。将表达载体转入大肠埃希菌(E.coliLMG194),用L-阿拉伯糖诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验结果表明,EHDV VP7基因在LMG194中得到了表达,其表达产物可以与EHDV阳性血清特异性反应,说明该融和蛋白具有免疫学活性。
- 杨俊兴花群义陈焕春陈兵吕建强曹琛福阮周曦张彩红
- 关键词：VP7基因基因克隆
