福建省教育厅科技项目(JB10201)
- 作品数：9 被引量：111H指数：4
- 相关作者：王艳君陈盛杨谦卓少玲谢建忠更多>>
- 相关机构：福建师范大学哈尔滨工业大学更多>>
- 发文基金：福建省教育厅科技项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学文化科学更多>>
- 角毛壳菌木聚糖酶基因xyn24在毕赤酵母中的高效表达及产酶的固定化研究被引量：2
- 2012年
- 以生防真菌角毛壳菌(Chaetomium cupreum)菌丝体时期的基因文库为基础,筛选得到编码木聚糖酶基因的片段,经拼接及RT-PCR扩增得到全长690bp的编码β-1,4-木聚糖酶基因序列,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达的木聚糖酶重组载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,表达蛋白分泌到培养基中,分子质量约为19.4 ku;以水溶性壳聚糖为底物测得酶活为2.72 U/mL。SDS及金属离子Mn2+对酶活性具有较强的激活作用;转化子经10代传代培养后酶活性稳定。通过制备的壳聚糖微球对木聚糖酶进行了固定化研究,并与游离酶的性质进行了比较。结果表明:固定化酶的最适pH范围与游离酶相比向酸性方向偏移;固定化酶的最适反应温度、酸碱稳定性及热稳定性均有所提高。
- 王艳君杨谦
- 关键词：角毛壳菌木聚糖酶毕赤酵母固定化
- 生物化学教学改革的实践探索被引量：71
- 2012年
- 作为福建省省级精品课程,生物化学课的教学注重教学方法和教学手段的改革。课程教学改革围绕生物化学在食品、环保等多个领域的应用,以设计创新性实验为依托,构建具有专业特色的创新型教学模式。实施教学改革后,既激发学生对生物化学的兴趣,又培养了学生自主创新的能力。
- 王艳君陈盛
- 关键词：生物化学教学改革创新性实验
- 来源于角毛壳菌的木聚糖酶xyn24基因克隆及特性被引量：3
- 2011年
- 利用Blastx将角毛壳菌(Chaetomium cupreum)ESTs与GenBank的Nr数据库进行相似性比对,获得1条编码木聚糖酶基因的全长cDNA序列的EST(GenBank Accn:DV547992),依据该序列设计并合成引物,以角毛壳菌基因组为模板进行PCR扩增,获得角毛壳菌xyn24的全长DNA序列,该DNA序列全长875 bp,由1个内含子和2个外显子组成;cDNA序列全长690 bp,编码229个氨基酸,蛋白质的相对分子质量为24700,理论等电点为7.83。经BlastP分析,xyn24基因的氨基酸序列的保守性不高,与嗜热革节孢菌(Scytalidium thermophilum AB114442)中的木聚糖酶基因的同源性最高,为78%,故推测该基因可能是1条新发现的木聚糖酶家族基因,该序列已收录于GenBank,登录号为:DQ886937,EF026978。
- 王艳君杨谦
- 关键词：角毛壳菌木聚糖酶基因生物信息学
- 产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学特性分析被引量：23
- 2012年
- 【目的】利用筛选培养基,从福建沿海潮间带泥样中分离筛选产壳聚糖酶的菌株,并研究菌株的产酶特性。【方法】通过形态学观察,结合26S rDNA序列进行分类鉴定,采用DNS法测定酶活力。【结果】筛选得到产壳聚糖酶的菌株KQ-1002与草酸青霉(Penicillium oxalicum)的同源性为99%,并初步鉴定为青霉属的一种。发酵培养的最适温度为30°C,最适碳源为1.0%水溶性壳聚糖,最适氮源为1.87%(NH4)2SO4,最适pH为6.0。该菌株液体发酵培养72 h产壳聚糖酶活性最高,经优化后最高产酶量为18 U/mL。纯化后的壳聚糖酶经SDS-PAGE分析其分子量约40 kD。酶促反应最适pH为5.0,最适反应温度为55°C,Km值为1.293 g/L。在离子浓度为1.0×10 3mol/L时,金属离子Cu2+、Hg2+、Ag+对酶的活性均有强烈的抑制作用。壳聚糖酶对不同底物及脱乙酰度的壳聚糖具有不同的降解作用。【结论】筛选获得产壳聚糖酶的真菌菌株KQ-1002的壳聚糖酶活力经优化后提高了约7倍,是一株具有研究和应用潜力的产壳聚糖酶菌株。
- 王艳君卓少玲陈盛杨谦
- 关键词：壳聚糖酶产酶条件酶学特性
- 壳聚糖包衣对油菜种子萌发及幼苗耐盐性影响被引量：4
- 2012年
- 以不同浓度的壳聚糖对油菜种子进行包衣处理,考察其对油菜种子萌发及幼苗耐盐性的影响,并在不同盐浓度胁迫条件下对种子萌发时的发芽势、发芽率、生物量(鲜重、干重、根长、芽长)等指标进行测定,同时分析油菜幼苗叶绿素含量、可溶性蛋白及可溶性糖含量的变化。结果表明,一定浓度的壳聚糖包衣处理可提高油菜种子发芽率、发芽势、生物量、幼苗的耐盐指数、叶绿素含量、可溶性蛋白及可溶性糖的含量,其中浓度为0.25 g.L-1壳聚糖包衣处理对油菜种子萌发的促进效果较好,而浓度为0.50 g.L-1壳聚糖包衣处理对提高油菜幼苗耐盐性具有较好的促进作用。
- 王艳君王美燕黄荣荣
- 关键词：壳聚糖包衣油菜种子萌发耐盐性
- 产壳聚糖酶菌株的分离、鉴定及发酵条件优化被引量：4
- 2012年
- 从废弃食用菌培养基周围土壤中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株,结合形态学特征与26SrDNA序列进行了分类学鉴定,结果表明,该菌株与高山被孢霉(Mortierella alpina)的同源性较高,达99%,初步鉴定为被孢霉属的一种,命名为KB-1001。并对该菌株的产酶特性进行了研究,结果表明,该菌株液体发酵培养产酶高峰出现在第84h,最适碳源为1%的水溶性壳聚糖,最适氮源为1.87%的(NH4)2SO4,摇瓶培养的最适初始pH值为6.0,最适温度为28℃～30℃,接种量为4%,最佳装瓶量为70 mL/250 mL,150 r/min摇瓶培养,经优化培养后,该菌株发酵液中壳聚糖酶活力最高达到8.130 U/mL。比原始的未经发酵条件优化的产酶活性提高了12.78%。
- 王艳君陈盛杨谦谢建忠
- 关键词：壳聚糖酶菌株筛选
- 产壳聚糖酶菌株的单因素及复合条件诱变育种被引量：3
- 2012年
- 以产壳聚糖酶菌株M2为出发菌株,分别采用紫外线诱变、亚硝酸钠诱变及两者的复合诱变方式对其孢子悬液进行诱变处理,以获得高产壳聚糖酶的突变菌株为目的。结果表明,突变株的酶活力高达8.135 U/mL,比原始出发菌株提高了1.381倍。经比较分析验证,复合诱变的方法是寻找高活力突变菌株的较好方法,而单因素的紫外诱变方法也具有简单快捷的优势,复合诱变比紫外线诱变后的产壳聚糖酶菌株酶活力提高了25.15%,比亚硝酸钠诱变后的菌株酶活力提高了32.82%。
- 王艳君廖春林
- 关键词：壳聚糖酶紫外诱变复合诱变
- 被孢霉菌株产壳聚糖酶的诱变育种初探被引量：1
- 2012年
- 本研究以被孢霉菌株(Mortierella alpina)为出发菌株,分别采用紫外线诱变、亚硝酸钠诱变及紫外线与亚硝酸钠的复合诱变方式对孢子悬浮液进行诱变处理.结果表明,在紫外线处理6min后,酶活性高达8.657U/mL,比出发菌株提高2.354倍;在亚硝酸钠处理8min后,酶活性为6.081U/mL,较之出发菌株提高1.658倍;在复合诱变的紫外照射6min和亚硝酸钠处理8min的情况下,酶活性高达9.141U/mL,比出发菌株提高了2.493倍.
- 王艳君危晓琴
- 关键词：紫外线诱变复合诱变
- 纳米SiO_2改性壳聚糖载体的制备及固定化壳聚糖酶的研究被引量：6
- 2012年
- 利用壳聚糖与硅酸乙酯(TEOS)形成的溶胶-凝胶制备杂化载体,经戊二醛交联后固定化壳聚糖酶,结合扫描电镜观察、X射线衍射及红外光谱分析对杂化载体进行了表征,初步比较了固定化酶与游离酶的酶学特性。结果表明,以5%的戊二醛浓度交联载体时,固定化酶的活性最高;最大结合酶量为2mL(U=2.5);固定化酶的最适pH7.0,酶活曲线向碱性偏移;固定化酶的最适酶促反应温度比游离酶升高5℃,在更宽的温度范围内具有活性。通过Lineweaver-Burk作图得出固定化酶的K'm为10.64g/L,较游离酶1.29g/L有所升高。该固定化酶具有较强的热稳定性,重复使用10次后,酶活力损失小于30%;在4℃低温条件下,稳定性较好,半衰期约为28d。
- 王艳君卓少玲陈盛
- 关键词：壳聚糖酶固定化
