国家自然科学基金(30770793)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：韩雅玲闫承慧李杰于海波张效林更多>>
- 相关机构：沈阳军区总医院南京军区福州总医院第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- E1A激活基因细胞阻遏子蛋白在人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用被引量：2
- 2009年
- 背景:研究内皮细胞凋亡的机制及其与动脉硬化形成的关系将为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。而E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白在内皮细胞凋亡中的作用,目前尚未见报道。目的:探讨E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白在去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及其调控机制。时间及地点:实验于2007-10/2008-12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。材料:人脐静脉内皮细胞,Phoenixamphotropic293细胞,pLNCX-CREG和pLNCX-GFP反转录病毒真核表达载体。方法:采用持续去血清培养的方法诱导内皮细胞凋亡,用TUNEL染色和Westernblot检测去血清饥饿24,48,72h后各实验组细胞中cleave-caspase3表达;用pLNCX-CREG和pLNCX-GFP反转录病毒真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞,并筛选稳定表达的细胞克隆;应用Westernblot检测E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白的表达,并进一步应用流式双荧光染色分析E1A激活基因的细胞阻遏子蛋白过表达在去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。主要观察指标:cleave-caspase3表达量,人脐静脉内皮细胞凋亡率。结果:成功构建了E1A激活基因细胞阻遏子过表达的人脐静脉内皮细胞模型,证实内皮细胞E1A激活基因细胞阻遏子的表达随凋亡的增加而增加,E1A激活基因细胞阻遏子过表达的人脐静脉内皮细胞去血清饥饿后凋亡较对照组明显减少。结论:E1A激活基因细胞阻遏子过表达抑制了去血清诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,机制可能与调控PI3K蛋白表达有关。
- 陶杰闫承慧郭鹏吴光哲王占胜韩雅玲
- 关键词：凋亡人脐静脉内皮细胞PI3K
- 肿瘤坏死因子α通过RhoA-ERK信号通路调控人脐静脉内皮细胞单层通透性的实验研究被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）单层通透性改变的效应分子,以寻找内皮细胞损伤修复的有效治疗靶点.方法 应用TNF-α刺激体外培养的HUVEC,观察HUVEC骨架蛋白F-actin和细胞单层通透性的改变.应用荧光免疫组织化学和Western blot方法检测TNF-α刺激前后细胞中RhoA和MAPK信号通路的改变.并通过添加特异性分子抑制剂Y27632和PD98059阻断RhoA和ERK表达,观察细胞F-actin及细胞单层通透性的改变.进一步应用持续活化型RhoA和主导抑制型RhoA逆转录病毒分别感染改变人HUVEC,改变细胞中RhoA的活化状态,观察TNF-α刺激前后细胞骨架蛋白及单层细胞通透性的变化.并确定RhoA与ERK的相互作用.结果 TNF-α刺激引起HUVEC中F-actin快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强,呈现时间和剂量依赖性趋势.其中TNF-α（100 ng/ml）刺激2 h后细胞单层通透性最强,HRP-BSA渗漏最大浓度为40 ng/ml.同时,细胞中活化RhoA的表达明显增加.TNF-α刺激前后细胞中MAPK信号转导蛋白JNK、P38和ERK1/2总蛋白均无明显改变,但p-JNK、p-p38和p-ERK表达均显著增加.其中,应用Y27632抑制RhoA的活化或PD98059阻断p-ERK表达后,TNF-α刺激的HUVEC中F-actin重构现象消失,同时细胞单层通透性增加也受到明显抑制,HRP-BSA渗漏浓度从40 ng/ml下降至12.5 ng/ml（P〈0.05）.进一步应用持续活化型RhoA感染人HUVEC细胞,发现RhoA活化的HUVEC单层通透性明显高于GFP感染组,HRP-BSA在TNF-α（100 ng/ml）刺激2 h后渗漏浓度从达到50 ng/ml（P〈0.05）,同时p-ERK表达也明显增加.而应用TNF-α刺激后,抑制型RhoA感染的HUVEC的骨架蛋白与单层细胞通透性均无明显变化.同时,p-ERK活化也受到明显抑制.结论 RhoA-pERK通路的活化介导了TNF-α诱导的HUVEC通透性增加,特异性抑制RhoA-ERK通路可以阻断TNF-α引起的内皮细胞通透性增加.
- 闫承慧于海波黄明方李杰张效林韩雅玲
- 关键词：内皮细胞肿瘤坏死因子Α
- E1A激活基因阻遏子在动脉粥样硬化血管中的表达变化
- 2011年
- 为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发展中的作用,采用Western blot方法检测人AS血管中CREG的表达变化,用高脂喂养兔的方法模拟AS的自热进程,观察血管的形态学变化,同时观察血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖情况及CREG、SMα-actin和SM MHC的表达变化。结果表明,在人AS血管中,CREG表达明显下调;在动物模型中,高脂喂养1月的兔,血管内皮出现不光滑,内膜增厚,中膜VSMCs出现表型转换,收缩蛋白SMα-actin和SM MHC表达开始下降,细胞出现增生,此时CREG表达也开始下调;高脂喂养2月的兔,可见内皮有中断、破损现象,内膜增厚明显,增殖抗原PCNA表达阳性的细胞明显增多,CREG表达进一步下调,VSMCs中的收缩蛋白也进一步下降。结论:在AS进程中,血管中膜VSMCs由收缩表型向合成表型转化,细胞增生活跃,分化减弱;CREG随着AS的发展,在VSMCs中表达逐步下降,提示CREG作为维持VSMCs分化的蛋白与AS的发生发展密切相关。
- 杨桂棠张娜段岩王娜游洋李杰康建阎承慧韩雅玲
- 关键词：动脉粥样硬化血管平滑肌细胞
