湖南省自然科学基金(11JJ2047)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 核仁素对血管内皮生长因子介导的人脐静脉内皮细胞管型形成的影响被引量：1
- 2012年
- 目的核仁素是细胞核仁中含量最多的一种多功能磷酸蛋白质和RNA结合蛋白,其主要功能涉及核糖体RNA的合成、核糖体的装配、细胞生长、凋亡、炎症免疫等生理病理过程。然而细胞内核仁素在血管内皮生长因子(VEGF)诱导的血管新生中有何作用,尚不清楚。本研究拟探讨VEGF在诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管型形成过程中对核仁素蛋白表达的影响及核仁素在这一过程中的作用。方法采用免疫印迹和定量聚合酶链反应(PCR)技术检测VEGF对核仁素表达的影响;采用基质胶、细胞划痕试验分析核仁素过表达和抑制表达对VEGF诱导的HUVEC管型形成、迁移能力的影响;采用生物信息学分析血管新生相关基因mRNA序列中含核仁素特异性结合基序的数量和位点。采用RNA免疫沉淀结合RT-PCR分析核仁素与靶基因mRNA的结合。结果 VEGF促进HUVEC中核仁素蛋白和mRNA的表达,其表达量在100μg/L VEGF处理24 h时增加约3.5倍,并维持至48 h。核仁素过表达显著增强50μg/L VEGF介导的HUVEC形成管型的能力以及细胞迁移能力,而核仁素抑制表达则显著削弱100μg/L VEGF介导的HUVEC管型形成与细胞迁移能力。生物信息学分析发现,环氧合酶2(COX-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、endoglin(ENG)、整合素αV和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)等12个血管新生相关基因mRNA中含有核仁素结合基序"(T/G)CCCG(A/G)"。进一步采用RNA免疫沉淀结合RT-PCR分析初步发现核仁素可以与ENG、MMP-9和COX-2的mRNA结合。结论核仁素正性调节VEGF介导的血管新生,其机制可能是核仁素与血管新生相关基因mRNA结合,维持后者的稳定性,从而发挥在转录后水平对血管新生相关靶基因表达的调节作用。
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- 关键词：核仁素血管新生内皮细胞
- 自噬在血管内皮生长因子诱导的内皮细胞管型形成中的作用
- 目的:探讨自噬在血管内皮生长因子(VEGF)介导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)管型形成中的作用。方法:以VEGF处理培养的HUVECs为模型,采用DHR123染色分析活性氧产生,采用免疫印迹。RT-PCR技术检测自噬相...
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