“十五”国家科技攻关计划(2004BA719A13-05)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：郑州大学第一附属医院北京协和医院郑州市第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
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- 人类免疫缺陷病毒Tat融合蛋白后的修饰与生物学活性分析
- 2007年
- 目的分析HIV Tat融合后对融合蛋白生物学活性的影响,探讨HIV Tat的生物细胞膜穿透功能和意义。方法以胸腺激酶(TK)基因为报告基因,将不同长度的甘氨酸(Gly)密码子融合在HIV Tat与TK基因之间以及两种基因倒置融合,分别克隆至PBK原核表达载体,大肠埃希菌表达,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,超声波破碎后,经耦联Tat蛋白单克隆抗体的层析柱层析收集。融合蛋白与HepG2细胞共培养,24 h后间接免疫荧光检测。加用更昔洛韦,3 d后锥虫蓝染色计算细胞死亡率,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果克隆出含有不同甘氨酸密码子的HIV Tat-Gly(n)-TK(n=0,2,4,6)融合基因,成功表达Tat-TK系列融合蛋白和TK-Tat融合蛋白。间接免疫荧光检测发现Tat-TK系列融合蛋白与Tat蛋白、TK-Tat融合蛋白透过膜效率相似;但流式细胞仪检测表明,在培养基含有更昔洛韦的条件下,Tat-Gly(4)-TK、Tat-Gly(6)-TK、Tat-Gly(2)-TK、Tat-TK融合蛋白、HIV Tat组和TK-Tat致HepG2细胞凋亡率分别为14.77%、4.30%、12.69%、3.00%、1.03%和4.40%。锥虫蓝染色发现细胞死亡率也有类似结果,分别为80.2%、56.7%、65.4%、58.4%、9.1%和57.1%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),但TK-Tat和Tat-TK融合蛋白组之间差异无统计学意义(P=0.24)。结论Tat与TK基因之间融合甘氨酸密码子的数目对融合蛋白中Tat的细胞融合穿透功能不产生影响,而对TK的体外细胞致死作用有较大影响,其中间隔4个甘氨酸密码子对融合蛋白TK体外细胞致死作用的影响最小,同时TK基因与HIV Tat的倒置融合不影响两者生物学功能。
- 阚全程余祖江杨锦建江河清李晓菲
- 关键词：胸苷激酶基因产物TAT重组融合蛋白质类
- 丙型肝炎患者外周血丙型肝炎病毒载量自然衰减数学模式的初步分析
- 2007年
- 目的为研究HCV RNA载量在体外的衰减动力学变化规律，判断可能符合的数学函数关系，建立体外HCV RNA载量衰减的数学模型，模拟体内可能存在的HCV复制能力。方法抽取丙型肝炎患者外周全血4份，抗凝处理后，置于6孔无菌培养板中，在5％ CO2条件下，轻微震荡培养，间隔15min取血做HCV RNA定量分析（Real—time PCR）。HCVRNA定量检测结果通过计算机软件分析，建立HCV RNA载量体外衰减数学函数关系。结果HCV RNA定量结果显示类阻尼振荡下降趋势，计算机分析HCV定量值下降符合指数函数关系：Y=3E＋0．8e^-0.5467x（r=0．9547；其中Y为外周血HCV RNA拷贝变量，X为体外病毒载量衰减的时间变量，E为10的幂指数，e为自然常数；r为相关系数），半衰期约为45min。结论HCV体外病毒载量衰减呈幂指数而非线性下降，半衰期为45min，逐渐下降到很长时间。
- 余祖江阚全程何云江河清梁红霞李太生
