江苏省社会发展科技计划(BS99049)
- 作品数：8 被引量：32H指数：4
- 相关作者：谭谦林子豪陈曦梁志为周宏礽更多>>
- 相关机构：第二军医大学东南大学南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划铁道部科技基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脂质体介导血小板衍化生长因子-B基因转染成纤维细胞的表达被引量：5
- 2005年
- 目的用脂质体介导血小板衍化生长因子(PDGF)B真核表达质粒转染成纤维细胞,使PDGF-B基因在成纤维细胞中特异表达。方法构建PDGF-B真核表达质粒,用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞,G418筛选阳性克隆。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和细胞爬片免疫组织化学染色检测PDGF-B基因在成纤维细胞中的表达。结果RTPCR检测结果显示,转染组PDGFBmRNA的表达量较未转染组明显增加。免疫组织化学染色结果显示转染组成纤维细胞胞浆中有大量棕黄色阳性颗粒。结论脂质体介导PDGF-B基因成功转染成纤维细胞并表达,为PDGF基因治疗奠定基础。
- 谭谦陈曦周宏杨定文李宁生郑东风林子豪吴建明
- 关键词：脂质体基因转染成纤维细胞基因表达创面愈合
- 血小板源性生长因子基因修饰的人工复合皮移植大鼠创面效果观察被引量：9
- 2005年
- 目的观察血小板源性生长因子B(PDGFB)基因修饰的人工复合皮移植大鼠创面后的效果。方法构建PDGFB真核表达质粒,在脂质体介导下转染大鼠成纤维细胞。分别构建复合皮1(角质形成细胞+猪脱细胞真皮基质+PDGFB基因转染的成纤维细胞)和复合皮2(角质形成细胞+猪脱细胞真皮基质+未转染的成纤维细胞),移植于大鼠背部全层皮肤缺损创面,相应设为转染组、未转染组(各18只)。以不作皮肤移植的8只大鼠全层皮肤缺损创面为对照组。术后2周观察大鼠创面移植皮片存活情况。术后2、4、6周观察大鼠创面大体情况,计算创面收缩率,并取创面组织标本进行组织学观察。结果(1)术后2周,转染组大鼠中皮片完全存活者14只、部分存活者3只、未存活者1只;未转染组大鼠中皮片完全存活者10只、部分存活者4只、未存活者4只。(2)术后2周,对照组创面结痂。术后6周转染组移植皮片表面光滑,有弹性,抗磨擦性强,愈合效果优于其他两组。(3)术后2、4、6周,对照组大鼠创面收缩率均高于其他两组,转染组创面收缩率低于未转染组(P<0.05)。(4)术后2周转染组移植皮片内可见较多毛细血管分布;6周时表皮细胞分化达7～10层,纤维排列致密整齐,毛细血管分布均匀。结论用含PDGFB基因的人工复合皮移植修复创面,可明显提高创面愈合质量。
- 陈曦谭谦梁志为浦跃朴林子豪吴建明
- 关键词：创面存活者PDGF-B鼠成纤维细胞
- 组织工程化皮肤重建皮肤功能的研究进展被引量：3
- 2003年
- 随着组织工程学的兴起和发展,组织工程化皮肤的研究有可能成为解决这一难题的有效途径。自从Rheinwald和Green成功建立表皮细胞培养方法以来,表皮培养的技术方法有了很大改进;胶原海绵、无细胞异体或异种真皮基质等真皮替代物的研究使复合皮的建立成为可能;干细胞的研究、基因转染在皮肤组织工程学中的应用将使组织工程化皮肤的研究更加成熟;组织工程化皮肤的生产和应用,使其成为第一个商品化的、也时目前成功应用的组织工程化产品,并且可能成为皮肤缺损后愈合时间短、愈合后效果好、瘢痕轻的创面愈合方法,以达到皮肤结构和功能的恢复。
- 谭谦梁志为林子豪
- 关键词：组织工程化皮肤功能干细胞
- 人血小板衍化生长因子-B真核表达质粒的构建被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建含人血小板衍化生长因子 B(hPDGF B)基因的真核表达质粒 ,为深入研究hPDGF B在组织修复中的作用及其在皮肤组织工程中的应用提供物质基础。方法 :从原代培养的人脐静脉内皮细胞中提取总RNA ,通过逆转录 聚合酶链反应扩增出hPDGF B目的DNA片段。通过连接酶连入真核质粒pcDNA3 1中 ,经大肠杆菌DH5α扩增和筛选 ,构建出重组真核质粒pcDNA3 1 hPDGF B。结果 :重组质粒通过BamHⅠ和HindⅢ酶切后 ,电泳图显示 0 6kb的hPDGF B的目的片段和 5 5kb的载体片段 ,证明重组质粒连接正确。经测序显示核苷酸及相应氨基酸序列正确无误。结论 :含hPDGF B基因的真核表达质粒被成功构建。
- 谭谦陈曦林子豪梁志为赵耀忠
- 关键词：真核表达质粒皮肤组织工程逆转录-聚合酶链反应基因
- 血小板衍化生长因子-B基因转染对成纤维细胞生长增殖的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 研究血小板衍化生长因子 B(PDGF)基因转染成纤维细胞后对其生长增殖的影响。方法 构建PDGF B真核表达质粒 ,用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞。相差显微镜观察成纤维细胞生长状况 ,MTT法测绘成纤维细胞生长曲线。结果 PDGF B基因转染的成纤维细胞生长良好 ,细胞生长曲线显示PDGF B基因转染 3d后的成纤维细胞较未转染的成纤维细胞生长明显增快 (P <0 0 5 )。结论 PDGF B基因转染后可显著加速成纤维细胞的生长增殖。
- 谭谦陈曦梁志为邹忠桃周宏礽杨定文林子豪赵耀忠
- 关键词：基因转染成纤维细胞细胞生长细胞增殖PDGF
- PDGF-B基因表达在组织工程化皮肤移植后血管重建中的作用被引量：4
- 2004年
- 目的构建含有血小板衍化生长因子B(PDGFB)基因的组织工程化皮肤,进行动物移植实验,研究PDGFB基因表达在真皮血管重建中的作用。方法构建PDGFB真核表达质粒,用脂质体LipofectAMINE介导转染成纤维细胞。分别构建3种不同类型的组织工程化皮肤角质形成细胞+脱细胞猪真皮基质(A组),角质形成细胞+脱细胞猪真皮基质+成纤维细胞(B组),角质形成细胞+脱细胞猪真皮基质+PDGFB基因转染的成纤维细胞(C组),分别移植于大鼠背部创面,观察术后2、4、6周真皮血管重建情况。结果术后2周C组真皮浅层内可见较多新生毛细血管长入,B组次之,A组毛细血管长入较少(P<005);术后4周各组真皮浅层内毛细血管数逐渐增加,但C组毛细血管数仍明显高于B、A两组(P<005);术后6周各组织工程化皮肤内毛细血管数差异无显著性意义。结论PDGFB基因在组织工程化皮肤移植后早期真皮血管重建中发挥了重要的作用,为移植后皮片成活提供了保障。
- 谭谦陈曦梁志为黄培林周宏礽杨定文林子豪江华
- 关键词：组织工程化皮肤血管重建移植后B基因PDGF-B真核表达质粒
- 体外构建复合皮移植后对大鼠创面愈合的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:观察角质形成细胞和成纤维细胞与无细胞异种真皮基质构成的复合皮移植于全层皮肤缺损创面后的效果,寻找一种新的创面覆盖物。方法:54只SD大鼠作背部全层皮肤缺损创面后分为A、B、C三组,分别以A型复合皮(角质形成细胞+成纤维细胞+无细胞异种真皮基质)、B型复合皮(角质形成细胞+无细胞异种真皮基质)和普通敷料进行移植,术后定期观察创面愈合情况并进行创面收缩率的计算,同时切取创面组织进行组织学检测。结果:三组中,A组的创面愈合及外观情况最好;A组创面收缩率明显低于B、C两组(P<0.05);组织学检测提示A组复合皮上皮分化充分,胶原增生有序,表皮-真皮连接结构重建明显,未见明显的急性期免疫排斥反应。结论:角质形成细胞和成纤维细胞与无细胞异种真皮基质构成的复合皮移植后能改善创面愈合质量,是一种较理想的、可探索的皮肤替代物。
- 梁志为谭谦陈曦黄泽春林子豪
- 关键词：角质形成细胞无细胞异种真皮基质
- 角质形成细胞在脱细胞异种真皮上培养的实验研究被引量：9
- 2003年
- 目的 在脱细胞异种 (猪 )真皮上培养角质形成细胞探讨体外复合皮的构建。方法 取出生 2 4h内的SD大鼠全厚皮肤 ,采用低温酶消化法和密度梯度离心法分离获得纯角质形成细胞 ;以不用任何滋养层的角质形成细胞培养作为空白对照组 ,脱细胞异种真皮作为支架的角质形成细胞培养为实验组 ,原代培养后行气———液面培养。形态学 ,常规组织学HE染色观察 ,免疫组化染色 (SABC法 )检测复合皮肤中的Pancytokeratin和层粘连蛋白 (Laminin)。结果 HE染色显示有 4层以上的角质形成细胞和基底膜层形成 ,并有轻度角质化 ;免疫组化染色显示 :Pancytokeratin(+) ,提示在脱细胞猪真皮上生长的为角质形成细胞 ;Laminin(+) ,提示培养的角质形成细胞产生了新的基底膜。结论 体外培养的角质形成细胞能在脱细胞异种真皮上良好生长、存活 ,并有基底膜形成 ,在体外成功构建了具有表皮和真皮的复合皮 ,可以作为一种新的组织工程化皮肤。
- 谭谦周宏礽林子豪江华
- 关键词：脱细胞异种真皮角质形成细胞细胞培养
